2 курс / Нормальная физиология / Молекулярная_физиология_Пятин_В_Ф_,_Баишева_Г_М_и_др_

УДК 576.32/.36

ISBN 978-5-9909123-0-4

В.Ф. Пятин, Г.М. Баишева, И.В. Широлапов, Е.Н. Веретельник

Молекулярная физиология: Учебное пособие для преподавателей и студентов медицинских вузов и биологических факультетов. Издание 2-е, переработанное,

дополненное. – Самара, 2016: Издательство ООО «АВИД», 156 стр.

Молекулярная физиология – направление биологии, которое фокусируется на научных исследованиях динамических интерактивных процессов и биохимических коммуникацийнасубклеточномуровне.Молекулярнаяфизиологиякакпредметвключает знания об ионных каналах и транспортерах, путей молекулярного сигнализирования, эндокринный контроль и регуляцию, передачу генетической информации, системы гомеостатического и молекулярного контроля, электрофизиологию и сенсорные механизмы, синтез белков и прикладные методы исследования и технологии.

Основное внимание в предлагаемом студентам и преподавателям учебном пособии уделено молекулярной организации биологической мембраны. Подробно рассматриваются молекулярная структура и функционирование ионных каналов мембраны клеток, строение и функции надмембранных и подмембранных структур цитолеммы, молекулярные основы синаптической передачи, представлена информация о методах и приборах, используемых в современной молекулярной физиологии.

Цель курса - показать достижения в современной физиологии на основе применения инновационных биомедицинских исследований, стимулировать интерес студентов к получению знаний на новом молекулярном уровне физиологических процессов в организмечеловека,продемонстрироватьзначениеэтойинформациидляформирования клинического мышления врача.

Настоящее пособие предназначено для оказания учебно-методической помощи студентам медицинских вузов и биологических факультетов в изучении молекулярной физиологии, для формирования общекультурных и профессиональных компетенций у студентов лечебного (ОК 1; ПК 16), педиатрического (ОК 1, ОПК 9А,Б, ПК 21) факультетов.

Рецензенты:

Мирошниченко Игорь Васильевич — заведующий кафедрой нормальной физиологии ФГБОУ ВО «Оренбургский государственный медицинский университет» Минздрава России, д.м.н., профессор.

ВедясоваОльгаАлександровна—профессоркафедрыфизиологиичеловекаи животныхФГАОУВО«Самарскийнациональныйисследовательскийуниверситет имени академика С.П. Королева» (Самарский университет), доктор биологических наук.

Учебное пособие утверждено ЦКМС ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России

УДК 576.32/.36

ISBN 978-5-9909123-0-4

В.Ф. Пятин, Г.М. Баишева, И.В. Широлапов, Е.Н. Веретельник

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

Молекулярная физиология – направление биологии, которое фокусируется на научных исследованиях динамических интерактивных процессов и биохимических коммуникаций на субклеточном уровне. Молекулярная физиология, как предмет включает знания об ионных каналах и транспортерах, путей молекулярного сигнализирования, эндокринный контроль и регуляцию, передачу генетической информации, системы гомеостатического и молекулярного контроля, электрофизиологию и сенсорные механизмы, синтез белков и прикладные методы исследования и технологии.

Молекулярный анализ биологических систем, таких как клетка, фокусируется на геномном, эпигеномном и транскриптомном, протеомном и метаболическом уровнях с применением интегративных компьютерных методов. Это открывает новый взгляд на патогенез хронических и пандемических заболеваний человека и состояний.

Из вышеперечисленного в настоящее время в молекулярной физиологии особенно интенсивно развиваются такие области знаний, как молекулярные механизмы сенсорной рецепции и межклеточная передача информации. Пониманиюфункционированиямеханизмовмембранныхрецепторныхсистем,прежде всего, будет способствовать знание процессов регуляции функции клетки, таких как внутриклеточная передача сигналов. Концепция вторичных посредников относится к фундаментальной в клеточной физиологии, а также в молекулярной медицине. В настоящее время известно порядка десяти молекул со свойствами вторичных посредников, к которым относят циклические нуклеотиды (cAMP, cGMP), инозитолтрифосфат (IP3), диацилглицерол (DAG), ионы кальция,полинуклеотидолигоА,оксидазота(NO),продуктыобменаарахидоновой кислоты и некоторое число субстанций липидной природы.

Во второй половине прошлого века и в начале нового столетия Нобелевской премией были отмечены открытия в области молекулярной физиологии: F. Gringard, L.Ingarro, R.Furchgott, F.Murad и другие.

Развитие молекулярной физиологии, как междисциплинарной области знаний, связано с изобретением и применением принципиально новых приборов молекулярного изображения. Поэтому учебное пособие открывается описанием методов и технологий, используемых в исследованиях современной молекулярной физиологии. Курс «Молекулярная физиология» организован из двух частей: курс лекций и курс семинарских занятий. В тематике лекций и семинарских занятий рассматриваются молекулярная организация и функции клеточной мембраны — ионные каналы и ионные насосы. Анализируются молекулярные механизмы межклеточных взаимодействий — сигнальная трансдукция; клеточные рецепторы и механизмы их активации; G-белок; вторичные посредники; этапы сигнальной трансдукции; взаимосвязи вторичных посредников; система кальций—кальмодулин; типы межклеточных контактов. Подробно анализируются молекулярные основы синаптической передачи возбуждения в биологических системах.

МЕТОДЫ МОЛЕКУЛЯРНОЙ ФИЗИОЛОГИИ

Курс «Молекулярная физиология» был впервые организован на кафедре нормальной физиологии СамГМУ в 2013-2014 учебном году; включает 5 лекций и 3 семинарских занятия (36 часов) и обеспечен современным мультимедийным обеспечением.

Цель курса – дать представление о новых научных знаниях в области молекулярной физиологии, которые исследователи получают на основе примененияинновационныхбиомедицинскихисследований;стимулироватьинтерес студентов к изучению молекулярных механизмов физиологических процессов в организме человека; показать роль молекулярной физиологии для формирования клинического мышления врача.

1.МЕТОДЫ МОЛЕКУЛЯРНОЙ ФИЗИОЛОГИИ. СВЯЗЬ МОЛЕКУЛЯРНОЙ ФИЗИОЛОГИИ С ДРУГИМИ НАУКАМИ

Молекулярная физиология - междисциплинарное направление современной биологической науки, вобравшее в себя как классическую физиологию (в том числе эволюционную и сравнительную), так и новые разделы современной физико-химической биологии, включая молекулярную биологию, биохимию, биофизику и целый ряд других дисциплин.

Предмет молекулярной физиологии - выяснение молекулярных механизмов, обеспечивающих осуществление физиологических функций организма.

Методы молекулярной физиологии:

1.Электрофизиологические

2.Молекулярные

3.Иммунологические

4.Изобразительные подходы

Некоторые актуальные методы молекулярной физиологии (ПРИЛОЖЕНИЯ 1,2)

1.Конфокальная микроскопия

а) Изучение структуры объекта (3Dили Z-серия). С помощью кон-

фокального микроскопа можно получить несколько изображений виртуальных срезов клетки, или же собранную из них трехмерную модель.

б) Мультиспектральные исследования. Колокализация. Изучение взаимной локализации в клетке двух и более веществ, например, разных белков. Предварительно вещества или структуры метятся антителами с разными флуоресцентными метками. Способствует детальному исследованию морфологии фиксированных живых клеток и тканей.

МЕТОДЫ МОЛЕКУЛЯРНОЙ ФИЗИОЛОГИИ

Рис. 1. Получение серии оптических срезов (Z-серия) с помощью лазерного сканирующего конфокального микроскопа

в) Изучение динамических процессов - прослеживание в живых орга-

низмах или клетках распространения каких-либо веществ, которые обладают либо собственной флуоресценцией, либо их необходимо метить флуоресцентными зондами.

Например:

•исследование потоков ионов Са2+ через клеточные мембраны с использованием красителей типа FURAили FLUO, чувствительных к концентрации ионов;

•изучение внутриклеточных сверхбыстрых процессов (в частности, динамической нестабильности цитоскелета) и межмолекулярных взаимодействий в живых клетках и тканях, таких как формирование лиганд-рецепторных комплексов, индукция апоптоза, внутриклеточный транспорт;

•долгосрочное наблюдение за клеткой в естественных условиях.

г) Микроскопия подавления индуцированного излучения (STED). STED-микроскопия — один из современных оптических методов сверхвысокого разрешения. Принцип STED-методики сходен с конфокальной флуоресцентной микроскопией, но кроме возбуждающего лазерного импульса, запускающего свечение молекулфлуорофоров, в ней используется также гасящий импульс, уменьшающий эффективный радиус зоны возбуждения флуорофоров до ≈50 нм. В результате данный метод позволяет наблюдать за внутриклеточнымипроцессамисточностьюдонанометров. (ПРИЛО-

ЖЕНИЕ 1)

2.Метод поверхностного плазмонного резонанса (ППР)

Спомощью этого метода производят исследование физико-химических параметров взаимодействия отдельных высокоаффинных молекул, таких как рекомбинатные антитела и их антигены.

Метод ППР широко применяется при создании химических и биологических сенсоров (биосенсоров). При контакте с биообъектами (ДНК, вирусы,

МЕТОДЫ МОЛЕКУЛЯРНОЙ ФИЗИОЛОГИИ

антитела) плазмонные эффекты позволяют более чем на порядок увеличить интенсивность сигналов флуоресценции, то есть значительно расширяют возможности обнаружения, идентификации и диагностики биологических объектов.

Метод регистрации ППР имеет преимущества перед классическими методами исследования межмолекулярного взаимодействия, поскольку не требует мечения реагентов ни радиоактивными, ни какими-либо еще метками и позволяет определять равновесные параметры взаимодействия без разделения свободных и связанных форм.

3.Высокочувствительное оптическое молекулярное изображение (напри-

мер, x-ray)

Рентгеновские лазеры, как правило, используют, чтобы изучить неживые

структуры. Так, микрокристаллические структуры идеально согласуются с оптическим поглощением, что позволяет провести крайне чувствительные измерения молекулярных трансформаций с получением моментальных снимков. Хотя при определенном подходе возможно избежать повреждения живых молекул от излучения, которое может накапливаться. В таком случае использование рентгеновских лазеров позволяет изучать активность биомолекул в динамике и получать на выходе ультразамедленные кадры их активности. Благодаря высокому временному разрешению рентгеновского лазера можно изучать шаги в цикле, который короче, чем 1 пикосекунда – такой быстрый процесс невозможно было поймать другими методами. Сверхбыстрые снимки могут быть собраны поэтапно с демонстрацией динамики молекулы в ультразамедленном воспроизведении.

4.Метод исследования движения отдельных частиц (Single particle tracking (SPT))

Метод наблюдения движения отдельных частиц в среде, применяется для изучения количественного «поведения» белка на поверхности клетки, в частности,дляпониманияклеточнойкинетикибелков,изученияброуновскойдиффузии, изучения мембранной диффузии. Метод основан на применении флуоресцентных или оптических меток.

5. Метод молекулярного моделирования

Молекулярное моделирование - собирательное название методов исследования структуры и свойств молекул вычислительными методами с последующей визуализациейрезультатов(компьютернаяграфика,3D-визуализация),обеспе- чивающиеихтрехмерноепредставлениепризаданныхврасчетеусловиях.Используется как для теоретического фундаментального представления о функционировании и взаимодействии молекул, так и в процессе создания новых лекарственных препаратов.

МЕТОДЫ МОЛЕКУЛЯРНОЙ ФИЗИОЛОГИИ

6. Техника patch clamp

Лабораторная электрофизиологическая техника изучения одного или нескольких ионных каналов в клетке.

Рис. 2. Техника patch clamp. Нейер и Сакманн (Нобелевская премия по физиологии и медицине, 1999 г.)

(a). схематическое изображение метода, представлены пассивный и активный электроды и мембрана клетки; (b). фотография клетки с введенными микроэлектродами.

Этот метод позволяет регистрировать на изолированных клетках их потенциалы, токи или одиночные ионные каналы посредством специальной стеклянной пипетки (patch-пипетки), напоминающей микроэлектрод, но имеющей сопротивление от 2 до 10 МОм, в зависимости от типа исследуемых клеток. Кроме того, метод позволяет регистрировать ионные каналы в изолированном кусочке мембраны, который может быть расположен по отношению к отверстию пипетки либо внешней, либо внутренней стороной.

ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ

1.Молекулярная физиология как наука. Определение понятия и задачи.

2.Историяразвитиямолекулярнойфизиологии.Какиеметодыисследования молекулярной физиологии Вам известны?

3.Предметисследованиямолекулярнойфизиологиииеесвязьсдругиминауками.

4.Методика patch-clamp: в чем суть технологии и возможности исследования?

5.Виды микроскопии, используемые в молекулярной физиологии.

6.Нобелевские лауреаты и другие видные ученые, удостоенные премий и научных наград за открытия в области молекулярной физиологии.

7.Молекулярная физиология для наномедицины и нанотехнологий.

МОЛЕКУЛЯРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ И ФУНКЦИИ МЕМБРАН КЛЕТОК

2.МОЛЕКУЛЯРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ И ФУНКЦИИ МЕМБРАН КЛЕТОК

2.1. СТРУКТУРА И ФУНКЦИИ БИОЛОГИЧЕСКИХ МЕМБРАН

Мембранные структуры клетки представлены поверхностной плазматической мембраной, отделяющей цитоплазму клетки от внеклеточной среды и мембранамивнутриклеточныхорганелл:ядра,эндоплазматическогоретикулума, аппарата Гольджи, митохондрий, везикул и т.д. Однако основные электрические клеточные процессы происходят на поверхности клеточной мембраны.

Рис. 3. Представленность биологических мембран в клетке. Показаны цитоплазматическая мембрана, мембраны митохондрий и ядра клетки и др. клеточных органелл (помечено красным цветом).

Строение биологических мембран

В настоящее время общепринятой является предложенная в 1972 г. Синджероми Николсономжидкостно-мозаичная модель строения биологических мембран (ПРИЛОЖЕНИЕ 7). Структурную основу биологической мембраны образует двойной слой фосфолипидов, инкрустированный белками.

СТРУКТУРА И ФУНКЦИИ БИОЛОГИЧЕСКИХ МЕМБРАН

Рис. 4. Жидкостно-мозаичная модель биологической мембраны. Основу биологической мембраны составляет липидный бислой, в который встроены белки.

Основными компонентами биологических мембран являются липиды и белки.

Липиды мембран.

Липидный состав мембран сбалансирован таким образом, чтобы обеспечить корректную и эффективную работу мембранных белков. Липиды мембран представлены 4 основными классами (ПРИЛОЖЕНИЯ 3, 4):

1)Фосфоглицериды

2)Сфингозамещенные липиды

3)Гликолипиды

4)Стероиды (холестерол)

Каждая из липидных молекул, кроме холестерола, имеет гидрофильную головку и два длинных гидрофобных углеводородных хвоста. Классическим представлением о строении мембраны является следующая модель: в толще водного раствора наиболее энергетически выгодным состоянием липида является бислой, где гидрофобные хвосты ориентированы друг на друга, а гидрофильныеголовкипообестороныбислоявзаимодействуютсмолекуламиводы. Современные методы исследования дают более сложную картину (ПРИЛО-

ЖЕНИЕ 5).

Свойства липидного бислоя:

1)высокая текучесть;

2)латеральная диффузия (молекулы липидов внутри бислоя постоянно передвигаются внутри монослоев);

3)флип-флоп механизм – процесс перехода отдельных молекул из одного монослоя в другой путем переворота;

МОЛЕКУЛЯРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ И ФУНКЦИИ МЕМБРАН КЛЕТОК

4)высокое электрическое сопротивление (106-109 Ом/см2);

5)преграда для неспецифической проницаемости (за счет гидрофобной части);

6)способность удерживать электропотенциал (мембрана является плоским конденсатором).

A B C D

Рис. 5. Липидные компоненты мембран. А – фосфатидилхолин, В – фосфатидилхолин и холестерол, С – сфингомиелин, D – сфингомиелин и холестерол.

Липидные компоненты мембраны — это не просто пассивный носитель белков, но и равноправные участники большинства физиологических и биохимических процессов. Липидный состав мембраны тщательно оптимизирован эволюциейипозволяетсоздатьнеобходимыеусловиядлякорректнойиэффективной работы мембранных белков. Например, частичное взаимное несмешивание липидных компонентов мембраны эукариотической клетки приводит к появлению микроскопических неоднородностей, называемых мембранными рафтами, или плотами (от англ. raft — «плот»). Такое сложное фазовое поведение липидного матрикса мембраны активно используется клеткой: мембранные плоты образуют функциональные платформы, в которых комплексы мембранных белков выполняют все разнообразие своих функций, причем определенные белки предпочитают находиться в рафтовых областях, тогда как другие — в областях между ними.

СТРУКТУРА И ФУНКЦИИ БИОЛОГИЧЕСКИХ МЕМБРАН

Рис. 6. Схема строения липидного рафта. (А) Внутриклеточная среда, цитоплазма, (B) внешняя среда или внутривезикулярное пространство аппарата Гольджи. Обозначения: 1. липид в жидкой неупорядоченной фазе, окружающий плотно-упакованный липидный рафт(2);3.трансмембранныйбелок,связанныйслипиднымрафтом;4.белокклеточной мембраны; 5. олигосахаридные остатки на белке рафта (гликопротеин); 6. гликозилфосфатидилинозитол;7.холестерин;8.олигосахаридныеостаткиналипидах(гликолипид).

Мембранный плот (membrane raft, lipid raft) (ПРИЛОЖЕНИЕ 5) ­— микро-

домен липидного бислоя клеточной мембраны, участок плотноупакованного липида, «плавающего» на поверхности «жидкого» фосфолипида (отсюда название липидный плот). Он представлен липидной платформой (сфинголипид и холестерол), стабилизированной актиновым цитоскелетом, прикрепление которого осуществляется за счет «молекулярных моторов» - миозина I и миозина II. Миозин I связывает внутренний липидный слой цитолеммы и актиновый филамент, тем самым способствует их движению вдоль цитолеммы и способствует их слиянию из наноплотов в макроплоты. Предполагается, что миозин I способствует направленному движению клеток, деформации и изгибу плазматической мембраны. Миозин II способствует движению биполярных актиновых филаментов, перестраивая актиновый цитоскелет.

Функции мембранных плотов: координируют клеточные процессы, влияют на текучесть мембраны, служат организующими центрами для сборки сигнальных молекул, регулируют перемещение мембранных белков, рецепторов, регулируют нейротрансмиссию.

Мембранные белки

Все функционально активные белки имеют в своем составе домены – пространственно обособленные участки белковой молекулы. Большая часть доменов является консервативными (conserved), т.е. с минимальной филогенетической изменчивостью. Белки мембран условно подразделяются на интегральные, полуинтегральные и ассоциированные (ПРИЛОЖЕНИЕ 6).

Интегральные (трансмембранные) белки полностью пронизывают ли-

пидный бислой, при этом гидрофобная часть белковых молекул находится в окружении гидрофобных хвостов липидных молекул, а гидрофильные части располагаютсяпообесторонылипидногобислоя.Полуинтегральные белки гидрофобной частью внедрены в половину липидного бислоя. Ассоциированные

МОЛЕКУЛЯРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ И ФУНКЦИИ МЕМБРАН КЛЕТОК

белки не имеют связи с гидрофобной частью липидного бислоя, связаны только с головками липидов или интегральными и полуинтегральными белками.

Вфункциональномотношениикинтегральнымбелкамотносятсярецепторные белки, ионные каналы, структурные белки, белки-переносчики, ферменты; к полуинтегральным – структурные и ферментные белки; к ассоциированным – в основном ферменты.

Среди всех мембранных белков особое положение занимают рецепторы. Они обеспечивают передачу информации через плазматическую мембрану внутрь клетки. У многоклеточных организмов передача информации между клетками осуществляется с помощью сигнальных молекул, выделяемых во внешнюю среду. Среди этих сигнальных молекул выделяют гормоны, небелковые соединения и ионы, образующиеся или высвобождающиеся, в том числе, при повреждении соседних клеток. Рецепторы специфически распознают сигналы (молекулы лигандов), появляющиеся во внеклеточном пространстве, и запускают каскады реакций в ответ на них.

Рис. 7. Классификация мембранных белков по типу связывания с мембраной.

Периферические белки: (а) электростатическое связывание с бислоем, (б) связывание с другими «якорными» белками.

Интегральные трансмембранные белки: (в) единственное и (г) множественные пересечения мембраны.

Интегральные мембранные белки, имеющие гидрофобный якорь:

(д) I тип — белок обладает С-концевым пептидным якорем, (е) II тип — белок содержит N-концевой якорь, (ж) в качестве гидрофобного якоря выступает фосфатидилинозитольный гликолипид (GPI).

Некоторые функции биологических мембран

1.Ограничение клетки/органеллы от внешней среды.

СТРУКТУРА И ФУНКЦИИ БИОЛОГИЧЕСКИХ МЕМБРАН

2.Активный транспорт ионов K+, Na+, Ca2+, подержание осмотического равновесия.

3.Связывание гормонов и включение механизмов внутриклеточной сигнализации.

4.Генерация потенциалов покоя и действия, распространение потенциала действия.

5.Перенос электронов на кислород и синтез АТФ (окислительное фосфорилирование).

6.Перенос ионов кальция из цитоплазмы внутрь везикул.

7.Поглощение квантов света и генерация внутриклеточного сигнала.

Транспорт веществ через мембрану

Существуют два механизма транспорта веществ через мембрану клетки: посредством простой диффузии, т.е. без помощи специфического переносчика, и при помощи специфических переносчиков. В первом случае выделяют диффузию соединений непосредственно через липидный бислой мембраны и ионов через ионные каналы. Во втором случае выделяют так называемую об-

легченную диффузию, первично-активный транспорт и вторично-активный транспорт (ПРИЛОЖЕНИЕ 8).

МОЛЕКУЛЯРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ И ФУНКЦИИ МЕМБРАН КЛЕТОК

АКТУАЛЬНОСТЬ И КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

ИОННЫЕ КАНАЛЫ

ПароксизмальПароксизмальная ночная гемоглобинурия (ПНГ) - редкое,

ная ночная ге- прогрессирующее, жизнеугрожающее заболевание, которое моглобинурия и характеризуется частичным или полным отсутствием инги- GPI-якорь биторов комплемента на поверхности клеток крови и проявляется хроническим гемолизом. Для синтеза GPI-якоря требуется продукт PIG-A гена. GPI-якорь должен состоять из трех частей, и они должны синтезироваться в определенном порядке. PIG-A ген отвечает за синтез первой части GPIякоря, поэтому в случае патологии, GPI-якорь либо не будет синтезирован, либо будет произведен в минимальном количестве. В результате, в клетках крови, полученных из гемопоэтических стволовых клеток, несущих PIG-A мутацию(и), наблюдается полный (Тип III) или частичный (Тип II) дефицит

GPI-заякоренных белков.

2.2. ИОННЫЕ КАНАЛЫ

Переносчики ионов через биологические мембраны подразделяют на три типа: ионные насосы, ионообменники и каналы. Наличие ионных переносчиковразноготипапозволяетклеткеоченьтонкорегулироватьионныйгомеостаз

(ПРИЛОЖЕНИЯ 8,10).

Ионные каналы (ИК) — это сложные трансмембранные белковые структуры, пронизывающие клеточную мембрану поперёк в виде нескольких петель и образующие в мембране сквозное отверстие (пору).

Канальные белки состоят из субъединиц, образующих структуру со сложнойпространственнойконфигурацией,вкоторойкромепорыобычноимеются дополнительные молекулярные системы: открытия, закрытия, избирательности, инактивации, рецепции и регуляции. ИК могут иметь не один, а несколько участков (сайтов) для связывания с управляющими веществами (лигандами).

Ионные каналы можно рассматривать как транспортный механизм, обеспечивающий перемещение ионов между цитоплазмой клетки и наружной средой.

Методы исследования ионных каналов (ИК)

1.Электрофизиологические методы а) Регистрация интегральных токов и потенциалов.

б) Внутриклеточная регистрация.

Методы внутриклеточной регистрации не позволяют регистрировать ионные токи, текущие через мембрану возбудимой клетки.

2.Метод фиксации мембранного потенциала.

3.Измерение токов одиночного канала - пэтч-кламп (patch-clamp).

4.Биохимические и генетические методы исследования ионных каналов. Исследования молекулярной структуры ионных каналов используют био-