6 курс / Кардиология / Хламидийно_ассоциированные_инфекции_Хворик_Д_Ф_

Серологические методы диагностики. Единственное достоинство данных методов – это возможность получения результата в день забора материала. В.И. Бедновой и соавт. были предприняты попытки использовать для идентификации трихомонад РИФ. Однако данную реакцию в широкой практике не применяют ввиду сложности, длительности постановки и невозможности стандартизировать антиген, а также субъективизма при оценке результата реакции [4].

Г.А. Дмитриев и соавт. (2005) указали на возможность использования ИФА для диагностики УТ. Выявление иммуноглобулинов класса G в сыворотке проводили с помощью тест-системы ЗАО «Вектор-бест» (Новосибирск). При этом получены данные о перспективности использования данного метода для диагностики трихомониаза[39].

Значительный интерес для выявленияУТ представляет прямой ИФА с целью диагностики антигена в соскобах и в моче. Предварительные исследования продемонстрировали высокий процент положительных результатов ИФА на антиген по сравнению с другими методами диагностики при различных локализациях трихомонад: в уретре, цервикальном канале, влагалище. Однако говорить о широком практическом применении данных методик преждевременно [39].

Молекулярно-биологические методы диагностики. К

недостаткам ПЦР-анализа и ДНК-гибридизации в качестве отборочного теста при массовых скрининговых обследованиях относится дороговизна исследования и недостаточная информированность специалистов, к преимуществам – высокая чувствительность, специфичность и воспроизводимость, а также простота выполнения анализа и короткое время получения результата (Дмитриев Г.А. и соавт., 2007; Бочарова Е.Н. и соавт., 2001). Чувствительность ПЦР составляет 97%,

специфичность – 98% (Nascvimeto М.С. et al., 1998; Nath К. et al., 2000).

101

Методика молекулярно-биологической диагностики УТ представлена в таблице 24 (приложение №5 к приказу МЗ РБ № 487 от 20 мая 2009 г.).

Таблица 24 – Методика молекулярно-биологической диагностики УТ

3)твердотельные термостаты для микропробирок (не менее 2 шт.);

4)высокоскоростная (до 14000 об/мин) микроцентрифуга для пробирок типа «eppendorf»;

5)микроцентрифуги-вортексы для микропробирок (не менее 3 шт.);

6)амплификатор (термоциклер) или амплификатор с детекцией результатов амплификации в режиме реального времени;

7)ПЦР-детектор флуоресценции;

8)источник постоянного тока для электрофореза;

9)камера для горизонтального электрофореза с плашками и гребенками для приготовления геля;

10)трансиллюминатор для детекции продуктов амплификации в агарозном геле;

11)видеосистема для регистрации изображений;

12)компьютер;

102

13)микроволновая печь для приготовления агарозного геля или магнитная плитка-мешалка;

14)одноразовые пластиковые микропробирки типа

«Eppendorf» 1,5 мл;

15)одноразовые пластиковые микропробирки 0,5 или 0,2 мл;

16)наборы автоматических дозаторов переменного объема (отдельно для этапа выделения, амплификации выделенной нуклеиновой кислоты и детекции продуктов амплификации методом гельэлектрофореза);

17)одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема, тестированные на отсутствие ДНК/РНК;

18)одноразовые наконечники с аэрозольным барьером для дозаторов переменного объема, тестированные на отсутствие ДНК/РНК;

19)стеклянные стаканы;

20)стеклянные колбы;

21)цилиндры;

22)стеклянные палочки;

23)штативы для микропробирок;

24)штативы для автоматических дозаторов;

25)емкости для дезинфекции;

26)дезинфицирующие средства;

27)бактерицидные облучатели;

28)контейнеры для транспортировки образцов первичных проб;

29)средства индивидуальной защиты

Реагент  набор реагентов, зарегистрированных в МЗ РБ, для выделения нуклеиновых кислот из проб первичных образцов;

набор реагентов, зарегистрированных в МЗ РБ, для проведения амплификации нуклеиновых кислот с детекцией методом гель-электрофореза;

набор реагентов, зарегистрированных в МЗ РБ, для проведения амплификации нуклеиновых кислот с детекцией продуктов амплификации в режиме реального времени;

набор реагентов, зарегистрированных в МЗ РБ, для детекции продуктов амплификации методом гель-электрофореза;

дистиллированная вода;

70% этиловый спирт.

103

выполнение требований хранения и доставки материала в лабораторию;

выполнение требований маркировки проб и соответствия маркировки пробы маркировке направления;

контроль реагентов (внешнее состояние, срок годности), условия и сроки хранения;

качество лабораторной посуды.

104

Мероприятия аналитического этапа:

включение официально зарегистрированных контрольных материалов;

соблюдение технологии выполнения процедуры в соответствии с инструкцией производителя тестсистем;

учет результатов с контрольным материалом и испытуемым образцом в соответствии с официально признанными критериями.

Внутренний контрольный образец, добавляемый на стадии выделения нуклеиновой кислоты, позволяет судить о наличии в пробах веществ, ингибирующих ПЦР, а также о качестве пробоподготовки.

Технология проведения реакции амплификации подразумевает обязательную постановку наряду с опытными пробами положительных и отрицательных контрольных образцов. Положительный контроль этапа амплификации включает в себя все компоненты реакции, но вместо материала клинического образца, прошедшего пробоподготовку, вносится контрольный препарат нуклеиновой кислоты.

Отрицательный контроль включает в себя все компоненты реакции, но вместо материала клинического образца, прошедшего пробоподготовку, вносится буфер или деионизованная вода. Отрицательный контроль необходим для проверки компонентов реакции на отсутствие в них специфической нуклеиновой кислоты или клеток возбудителя вследствие контаминации, и для исключения получения ложноположительных результатов. Внутри лабораторный контроль качества проводят не реже 1 раза в месяц путем исследования шифрованных контрольных панелей, содержащих «положительные» и «отрицательные» пробы. Контрольные панели могут быть приготовлены в лаборатории или использованы ре- ференс-панели, зарегистрированные в МЗ РБ.

В рамках внутри лабораторного контроля качества 1 раз в месяц, а также при подозрении и для выявления возможной контаминации лаборатории нуклеиновыми кислотами, следует проводить исследования смывов с рабочих поверхностей и оборудования. Для обеспечения внешнего контроля качества проводимых исследований используются референс-панели, разрешенные к применению на территории РБ.

Мероприятия постаналитического этапа:

105

—правильность внесения результатов в бланк исследования и формулировка лабораторного заключения;

—своевременное доведение информации до врача, назначившего исследование.

Однако, учитывая распространенность смешанных инфекций, частой встречаемости «атипичных» трихомонад, при сомнительных результатах культурального исследования для дополнительного контроля следует проводить ПЦРдиагностику в комплексе с микроскопией [39, 134].

106

Заслуживает внимания алгоритм диагностики УТ у мужчин и женщин (рисунки 4 и 5), предложенный Р.А. Раво-

диным (2005).

Рисунок 4 – Алгоритм диагностики УТ у мужчин

107

Таблица 25 – Клинический протокол диагностики пациентов с УТ [68]

109

5.2 Урогенитальныйкандидоз

Урогенитальный кандидоз – грибковое заболевание слизистой оболочки и кожи мочеполовых органов, вызванное грибами рода Candida. Первые упоминания о кандидозе появились еще в трудах Гиппократа и Галена. Впервые клиническая картина вульвовагинита была описана в 1792 г. (Frank), а в 1794 г. (Wilkinson) впервые установил ее грибковую этиологию.

Распространенность урогенитального кандидоза.

Урогенитальный кандидоз чаще встречается у женщин, реже

– у мужчин. Заболевание составляет до 40% в структуре инфекционной патологии нижнего отдела гениталий (Прилепская В.Н., Байрамова Г.Р., 1995). Подсчитано, что из 100 млн ежегодных визитов к врачам по поводу вагинита около 20– 25% обусловлены вульвовагинальным кандидозом [31]. Установлено, что 75% женщин переносят в течение своей жизни по крайней мере хоть один эпизод вульвовагинального кандидоза, а у 40–50% из них развивается один рецидив за-

болевания (Harley R., De Louvois J., 1979; Reed B.D., 1992).

Заболеваемость вульвовагинальным кандидозом в США насчитывает около 13 млн случаев в год, что составляет около 10% женского населения страны. Урогенитальный кандидоз наиболее часто регистрируется в странах с жарким климатом и низкими санитарно-гигиеническими условиями. В последние годы появились стертые и атипичные формы данной патологии, а также хронические, резистентные к проводимой терапии разновидности заболевания [3, 40, 48, 66, 191].

В США в 1990 г. зарегистрировано около 8 млн посещений женщинами акушера-гинеколога в связи с кандидозным вагинитом. Отмечается, что в 1980–1990 гг. количество случаев грибковых вагинитов удвоилось, что связано с увеличением кандидозов, вызванных не-albicans видами Candida. Проведенный опрос женщин в США показал, что 6,5% женщин старше 18 лет имели, по крайней мере, один эпизод предполагаемого грибкового вагинита в течение последних двух месяцев, 8% респондентов имели четыре или более эпизодов в течение года [3, 32, 86].

110