- •Глава1.Обзорлитературы 11
- •Глава2.Материалыиметодыисследования 36
- •Глава3.Результатысобственных исследований 55
- •Глава1.Обзорлитературы
- •РазвитиепредставленийодиагностикеГм
- •Гистологическоеисследование
- •КритериидиагностикиГм
- •Глава2.Материалыиметодыисследования
- •Общаяхарактеристикабольных
- •Проведениедиагностическойбиопсиикожи
- •Гистологическоеисследование
- •.Непрямойиммуногистохимическийметодисследования
- •2.4Статистическийанализ
- •Глава3.Результатысобственных исследований
- •Глава4.Заключение
Глава4.Заключение
ГМявляетсянаиболеечастойразновидностьюпервичныхлимфомкожи.Современныеданныепонизкомууровнюдиагностики,отсутствиечеткогоалгоритмаобследованиятакихпациентов,множествовариабельныхформ,редкаявстречаемостьотносительнодругихзаболеванийкожиопределяютактуальностьпоискановыхдиагностическихмаркеровГМ.
Анализимеющихсялитературныхданныхпоказал,чтовнастоящиймоментдиагностикаГМосновываетсянакомплекснойоценкеклинических,гистологических,иммуногистохимическихимолекулярно-биологическихданных.
Актуальнойзадачейсовременнойдерматоонкологииявляетсявыявлениеболезнивначальнойстадии,когдаклиническиепроявленияминимальныитрудноподдаютсяинтерпретации.Дляэтойцеливпервуюочередьприменяютклиническоеобследованиеигистологическийметоддиагностики.Крометого,впоследниегодыполучилоширокоеразвитиеиммуногистохимическоеисследованиелимфомкожи,позволяющеепроводитьидентификациюклеточногосостава[52,58, 69, 89,200].
ОснованиемдляпримененияИГХисследованияявляютсямногочисленныеработы,вкоторыхавторыобнаружилиотличиеэкспрессиииммуногистохимическихмаркеровубольныхлимфопролиферативнымизаболеваниямиотпациентовсхроническимидоброкачественнымидерматозами[91,97].
НаиболеетруднойявляетсядифференциальнаядиагностикапациентовспятнистойстадиейГМ ибольныхбляшечнымпарапсориазом.
ОсобенностьюБПявляетсявозможностьтрансформациивГМстечениемвремени,причем,причиныивероятностьразвитияпаранеопластическогопроцессадосихпорнеустановлены[75,146].
СогласноклассификацииВОЗ-EORTCот2005годавыделяютмелкобляшечныйпарапсориаз,обладающийкрайненизкимпотенциаломтрансформациивГМ,икрупнобляшечныйпарапсориаз,изкоторогоможетразвитьсяГМ в50%случаев[206].
Учитывая,чтонетчеткихдифференциально-диагностическихкритериевмеждумелко-икрупнобляшечнымпарапсориазом,данныезаболеваниявнашейработебылиобъединенывнозологию–бляшечныйпарапсориаз.
Всоответствиисактуальностьютемыбылапоставленазадачаустановлениядифференциально-диагностическихпризнаковГМнаоснованииизученияданныхклиническойкартины,гистологическогоииммуногистохимическогометодовисследованиясцелью совершенствованиядиагностикизаболевания.
ДлявыполненияданнойзадачинамибылиизученыособенностиклиническихигистологическихпризнаковпораженнойкожипациентовсГМиБП.
ПроизведеноиммуногистохимическоеисследованиекожибольныхГМ,БПиздоровыхлицнаиболееактуальнымидлядиагностикилимфопролиферативныхзаболеваниймаркерами,выбранныминаоснованиианализасовременнойотечественнойизарубежнойлитературы.
ВыполненстатистическийанализполученныхданныхсопределениемзначимыхдлядиагностикиГМиммуногистохимическихмаркеров.
ОцениваязначимостьклиническогообследованиявдиагностикеГМ,необходимоконстатировать,чтовозможностиегоограничены.ВнашейработеувсехпациентовсГМокончательныйдиагнозневозможнобылоустановитьбезпримененияинструментальныхметодов исследования.
ВажностьвыполнениядополнительныхдиагностическихпроцедурподтверждаетсяданнымиН.В.Кунгуроваисоавторов,которыевыявили,чтов66,6%медицинскихучреждений,изтех,гденеприменяютдополнительныеметодыдиагностики,лимфомыкоживообщенедиагностируются[14].ПоказательныирезультатыисследованияЛезвинскойисоавторов,которые
определили,чтопридиагностикеГМвдиспансере,когданаиболеечастоприменяюттолькоосмотрпациентов,диагнозГМустанавливаетсяв25% случаев.
Такимобразом,значимостьклиническоеобследованиесостоитвтом,чтобызаподозритьГМ,адляформированияокончательногодиагнозанеобходимоприбегатькдополнительнымметодамдиагностики.
Анализируянашииполученныедругимиавторамиданныегистологическогоисследования,мыпришликвыводу,чтовнастоящеевремяубольшинствапациентоввбляшечнуюиопухолевуюстадииГМоноявляетсяосновнымдляподтверждениядиагноза заболевания.
Вотличиеотпрогрессирующихстадий,вначалеразвитияГМгистологическиеизменениячастомогутоказатьсянеинформативными.ПрисравненииданныхкрупномасштабныхисследованийгистологическиххарактеристикначальнойстадииГМ,выявляетсяширокийразбросзначенийпонекоторымпараметрам[2,172,184].Вчастности,количествокрупныхэпидермальныхлимфоцитовварьируетвпределахот17%до65%илимикроабсцессыПотриеобнаруживаютсяот0%до37%случаев.Лимфоцитывбазальномслоеэпидермисаобнаруживаютсяот17%до67% случаев.
Вариабельностьданныхможнообъяснитьотсутствиемстандартизованныхкритериевоценкиопределяемыхпризнаков,чтозатрудняетприменениеэтиххарактеристикдлядиагностикираннихстадийГМ.
Такимобразом,дляустановлениядиагнозаГМубольшинствапациентовсбляшечнойиопухолевойстадиями,гистологическоеисследованиеявляетсяосновным.Вначальныхстадияхзаболевания,когданаблюдаемыевкожеизменениянеспецифичныинепозволяютутверждатьоналичиепаранеопластическогопроцесса,необходимопроводитьиммуногистохимическоеимолекулярно-биологическоеисследования.
ВходепроведенияиммуногистохимическогоисследованиякожибольныхГМиБПобнаруженыстатистическизначимыеотличиярядамаркеров.Вчастности,выявленноенамистатистическизначимоепреобладаниеlangerin+-иCD83+-ДКупациентовспятнистойстадиейГМпосравнениюсбольнымиБП,
позволитнаоснованиианализаэтихпоказателейпроводитьдифференциальнуюдиагностикуэтихзаболеваний.ТакженеобходимоучитыватьизменениесоотношенияразличныхподтиповДКупациентовсБП,гденаблюдаетсяповышениеэкспрессиимаркераlangerin+ДКпосравнениюсоздоровымилицами,новместестемстатистическинезначимоизменениеэкспрессиимаркеразрелыхДК –CD83.
Порезультатамнашейработы,вывлено,чтонаибольшееувеличениеколичестваДКвозникаетубольныхГМвдерме,гдепроисходитделениезлокачественныхТ-лимфоцитов.Изэтогоможносделатьвывод,чтодермальныеклеткиЛангерганса,секретирующиецитокиныифакторроста,изрелыеCD83+-клетки,несущиенасвоейповерхностинаибольшееколичествокостимулирующихмолекул,являютсянеобходимыммикроокружениемдляосуществленияпролиферациилимфоцитоввкоже.
ВисследованииRowdenG.исоавторовпоказано,чтовэпидермисевмикроабсцессахПотриеклеткиЛангергансаокруженыопухолевымиТ-лимфоцитами[167].ПозжебылапродемонстрированаinvitroвыживаемостьзлокачественныхТ-лимфоцитовтольковприсутствииклетокЛангерганса[80,81].Наоснованииэтихданныхможнозаключить,чтонезрелыеДКактивируютсявэпидермисеиперемещаютсявсосочковуюдерму,гдесозреваютиобразуюткластеры, чтоподтверждаетсяисследованиямидругихавторов [176,137].
Намиопределено,чтонаибольшеезначениеотношенияэкспрессииlangerin+ДКкCD83+-ДКвыявляетсяупациентовсБП,втовремякакубольныхГМпятнистойстадиейданныйпоказательменьшев1,8раз.Этоможнообъяснитьтем,чтоприГМактивированоинакопленобольшееколичествозрелыхДК,чемприБП.
ПроводяоценкупролиферативнойактивностиклетоккожибольныхБПиГМ,атакжеиспользуяметоддвойноймаркировки,намудалосьобнаружитьстатистическизначимоотличающиесяпоказателиэкспрессиимаркеровупациентовслимфопролиферативнымизаболеваниями.
ВыявленноеувеличениесодержаниялимфоцитоввдермальныхинфильтратахиэпидермисеубольныхпятнистойстадиейГМпосравнениюсбольнымиБПидальнейшеенарастаниеихколичествавкожепациентовбляшечно-опухолевойстадииГМбылоожидаемым.Повышениечисленностилимфоцитоввэпидермисеидермепроисходилоодновременно,всвязисчемпоказательэпидермо-дермальногоотношенияCD3+-клетокубольныхБПиГМизменялсянезначительноинаходилсявпределах0,2-0,3.
Ожидаемоеувеличениеуровняклеточнойпролиферации(Ki-67+-клетки)убольныхсБПиГМнеимеетдиагностическогозначения,учитываятотфакт,чтодостовернойразницымеждунаиболеетруднодиагностируемымиБПипятнистойстадиейГМневыявлено,астатистическизначимыеразличиямеждупятнистойибляшечно-опухолевойстадиямиГМнепригодныдляприменения.
АнализраспределениявсехKi-67+-клетоккожи(впервуюочередь,пролиферирующихкератиноцитовиТ-лимфоцитов)выявилнаиболеевысокоезначениеихэпидермо-дермальногосоотношенияуздоровыхлюдей.УпациентовсБПиГМэтотпоказательмногократноуменьшаетсязасчетнарастанияпролиферативнойактивностиклетокдермальногоинфильтраи,возможно,сниженияпролиферациикератиноцитов.Уменьшениеэпидермо-дермальногоотношенияKi-67+-клетоккожиубольныхГМ,посравнениюсБП,свидетельствуетоболееинтенсивнойпролиферациидермальныхТ-лимфоцитовприихзлокачественнойтрансформации.
ПрименяядвойнуюмаркировкумаркеровCD3+Ki-67+,намудалосьвыявитьстатистическизначимоепреобладаниеотносительносительнойплощадиэкспрессииубольныхпятнистойстадиейГМнадданнымзначениемупациентовсБПиздоровыхлиц.ИспользованиеиммуногистохимическогоисследованиясдвойноймаркировкойCD3+Ki-67+,направленногонадетекциюпролиферирующихТ-лимфоцитов,достаточноинформативноприпроведениидифференциальнойдиагностикилимфопролиферативныхзаболеванийкожи.Применениеданногометодапозволяетдостовернооценитьуровень
пролиферативнойактивностилимфоцитовиобнаружитьболеезначимыеотличияприБПи ГМ,чемприиспользованиитолькоодногомаркераKi-67.
ДиагностикаЛК,иГМвчастности,невозможнабезкомплекснойоценкивсехимеющихсяклиническихиинструментальныхданных.ОднимизнаиболееразвивающихсянаправленийявляетсяИГХ исследованиекожибольныхГМ.Идетпоискновыхмаркеров,которыемоглибысбольшойдостоверностьюнаначальнойстадиизаболеванияустановить диагноз.
Такимобразом,наоснованииданныхлитературы,клиническогообследования,изучениягистологическогостроениякожибольныхГМиБП,анализаинформативностифенотипическихпризнаковопухолевыхиоколоопухолевыхклетокможноприйтикзаключению,чтодлядифференциальнойдиагностикиГМиБПпанельиммуногистохимическихмаркеров должнавключатьCD207/langerin,CD83иCD3Ki-67маркеры.
ВЫВОДЫ
Установлено,чтонаиболеезначимымиклиническимипризнакамиубольныхпятнистойстадиейгрибовидногомикозаявляютсяпятна,размерамибольше6см,сослабовыраженнымшелушением,расположенныенаучасткахкожи,неподвергающихсясолнечномуоблучению(чувствительность-SE0,56,специфичность-SP0,65),пойкилодермия(пятнистаяпигментация,телеангиоэктазии,атрофиякожи)(SE0,50,SP0,68),имеющиекардинальноезначениедлядиагностикисбляшечнымпарапсориазом.
Ведущимигистологическимипризнакамипридифференциальнойдиагностикепятнистойстадиигрибовидногомикозаотбляшечногопарапсориазаявляются:эпидермальныелимфоциты,лимфоцитысцеребриформнымиядрами.
КоличествопролиферирующихТ-лимфоцитов(CD3+Ki-67+-клеток)убольныхпятнистойстадиейгрибовидногомикоза–в10,7раз,абляшечно-опухолевой–в16развыше,чемупациентовсбляшечнымпарапсориазомиимеютвысокуюспецифичностьисреднюючувствительностьпридифференциальнойдиагностикебольных(SE0,63,SP0,89).
УбольныхгрибовидныммикозомпосравнениюсбольнымибляшечнымпарапсориазомотмечаетсястатистическизначимоепреобладаниенезрелыхдендритныхклетоксмаркеромLangerin/CD207,атакжезрелыхдендритныхклеток смаркеромCD83впораженнойкоже.
Эпидермо-дермальноеотношениепролиферативнойактивностиклеток(Ki-67+)кожиубольныхгрибовидныммикозомнавсехстадияхниже,чемуздоровыхлюдейипациентовсбляшечнымпарапсориазом.
РЕКОМЕНДАЦИИ
Придифференциальнойдиагностикебляшечногопарапсориазаигрибовидногомикозанеобходимовпервуюочередьобращатьвниманиенатакиеклиническиепризнакикакслабошелушащиесяпятнабольше6смвдиаметре,расположенныенаучасткахкожи,неподвергающихсясолнечномуоблучениюиявленияпойкилодермии.Такиегистологическиехарактеристики,какэпидермальныелимфоцитыкрупнеедермальных,лимфоцитысцеребриформнымиядрамипомогутдифференцироватьпациентовсначальнойстадиейгрибовидногомикозаотбольныхбляшечнымпарапсориазом.
Приотсутствиивозможностидифференцироватьбольныхпятнистойстадиейгрибовидногомикозаибляшечногопарапсориазанаоснованииклинико-морфологическихпризнаков,следуетиспользоватьиммуногистохимическоеисследованиесопределениемCD207/langerin,CD83иCD3+Ki-67+-клеток.
Придифференциальнойдиагностикебляшечногопарапсориазаигрибовидногомикозанеобходимоопределятьзначениеэпидермо-дермальногосоотношенияKi-67+-клеток.
СПИСОКУСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ
АГ —антиген
БП —бляшечныйпарапсориаз
ВИЧ—вирусиммунодефицитачеловекаВМедА—Военно-медицинскаяакадемия
ВОЗ —ВсемирнаяорганизацияздравоохраненияГМ —грибовидныймикоз
ДК —дендритныеклетки
ДНК—дезоксирибонуклеиноваякислотаИГХ—иммуногистохимия
ЛК —лимфомыкожи
ПЦР —полимеразнаяцепнаяреакцияРНК—рибонуклеиноваякислотаТКЛК— Т-клеточныелимфомыкожиТКР—Т-клеточныйрецептор
Т-рег — Т-регуляторныеклеткиУЗИ— ультразвуковоеисследование
EORTC— (EuropeanOrganisationforResearchandTreatmentofCancer)Европейскаяорганизацияпоизучениюилечениюрака
ISCL — (InternationalSocietyforCutaneousLymphoma)Международноеобществоизучениялимфомкожи
FISH —(Fluorescenceinsituhybridization)флуоресцентнаягибридизациянаместе
CD — (clusterofdifferentiation)кластердифференцировкиDC — (Dendriticcell)дендритнаяклетка
DC-LAMP— (dendritic cell-lysosomal associated membrane protein)лизосом-связанныймембранный протеиндендритныхклеток
FOXP3 — (forkheadboxprotein3)маркерТ-регуляторныхклеток
MCM— (MiniChromosomeMaintenanceprotein)белокподдежкиминихромосом
TCR —(Tcellreceptor)Т-клеточныйрецептор
СПИСОКЛИТЕРАТУРЫ
Бабиченко,И.И.Новыеметодыиммуногистохимическойдиагностикиопухолевогороста:Учеб. Пособие/И.И.Бабиченко,В.А.Ковязин//—М.:РУДН,2008.— С.109.
Белоусова,И.Э.Клинико-морфологическаядифференциальнаядиагностикапервичныхлимфомкожи,псевдолимфомкожиипарапсориазов:авторефератдиссертациинасоисканиеученойстепенидокторамедицинскихнаук:14.01.10/БелоусоваИренаЭдуардовна.—Санкт-Петербург, 2009.—39с.
Белоусова,И.Э.СовременныеподходыкдиагностикеилечениюпервичныхлимфомкожинаосновеновойBO3-EORTCклассификацииВ-клеточныхлимфомкожи/И.Э.Белоусова,Д.В.Казаков,Ю.А.Криволапов//Архивпатологии.—2007.—Т.69.№6. — С.48-50.
Белоусова,И.Э.Современныеподходыкдиагностикеилечениюпервичныхлимфомкожинаосновеновойвоз/еоитс-классификации.Т-клеточныелимфомыкожи/И.Э.Белоусова,Д.В.Казаков,Ю.А.Криволапов//Архивпатологии.—2007.—Т.69.№5. — С.11-17.
Белоусова,И.Э.Оценказначимостигистологических,иммуногистохимическихиклиническихданныхвдиагностикелимфопролиферативныхзаболеванийкожиметодоммежэкспертногосогласия/И.Э.Белоусова,Д.В.Казаков,А.В.Самцов,В.Кемпф//Архивпатологии.—2004.—Т.66.№2. — С.11-16.
Белоусова,И.Э.Синдромгранулематозной«вялой»кожикакредкийвариантгрибовидногомикоза/И.Э.Белоусова,НиконоваС.М.,ПирятинскаяВ.А.идр.//Вестникдерматологииивенерологии.—2008.—
№ 2.—С.68-71.
Братцева,Е.В.Современныеподходыкдиагностикегрибовидногомикоза/Е.В.Братцева,С.В.Ротанов//Вестникдерматологииивенерологии.—2010.№ 6. — С.16-22.
Вавилов,А.М.Первичныелимфомыкожи:фенотипическаяхарактеристикаосновныхклиническихформ,классификации/А.М.Вавилов,Е.М.Лезвинская//Арх. патологии.—1998.—№2.—С.3–7.
Дерматовенерология.Национальноеруководство/подред.Ю.К.Скрипкина,Ю.С.Бутова,О.Л.Иванова.—М.,ГЭОТАР-Медиа,2013.—Гл.67.—1024с.
Казаков,Д.В.Злокачественныеопухолилимфоиднойтканиспоражениемкожи:современныепринципыдиагностикиикраткаяхарактеристикаосновныхнозологическихформ/Д.В.Казаков,В.Кемпф,А.В.Самцовидр.//Вестн.дерматологииивенерологии.—2002.—№1. —С.23–33.
Карпов,В.В.Парапсориазувоеннослужащих/В.В.Карпов,В.Г.Исламов,Е.В.Гусев//Российскийжурналкожныхивенерическихболезней—2011.
—№3.—С.23-27.
Клиническиерекомендации.Дерматовенерология/подред.А.А.Кубановой. Москва:ДЭКС-Пресс,2010.—С.87-95.
Кубанова,А.А.Клиническиерекомендации.Дерматовенерология/А.А.Кубанова, 2008.—С.42-50.
Кунгуров,Н.В.Осовершенствованииоказанияспециализированноймедицинскойпомощибольнымзлокачественнымилимфомамикожи/Н.В.Кунгуров,М.М.Кохан,И.А.Куклинидр.//Вестникдерматологииивенерологии.—2010.—№3—С.4-11.
Кунгуров,Н.В.Алгоритмыклинико-лабораторнойдиагностикизлокачественныхлимфомкожи/Н.В.Кунгуров,М.М.Кохан,С.В. Сазонов //Вестникдерматологииивенерологии.—2002.—№6.—С.16.
Ламоткин,И.А.Результатыиммунофенотипированияразличныхклиническихформгрибовидногомикоза/И.А.Ламоткин,О.В.Бурлаченко,Ю.Г.Тарасенко//Российскийжурналкожныхивенерическихболезней.—2005.—№5. —С.4-5.
Лезвинская,Е.М.СостояниезаболеваемостизлокачественнымилимфомамикоживМосковскойобластиипутисовершенствованиялечебно-диагностическойпомощибольным/Е.М.Лезвинская,В.А.Молочков,Н.К.Ларина//Росcийскийжурналкожныхивенерическихболезней.—2000.—
№ 4.—С.12-17.
Лезвинская,Е.М.Иммунопатогенеззлокачественныхлимфомкожи/Е.М.Лезвинская//Вестн.дерматологииивенерологии.—1997.—№3.—С.21–26.
Лезвинская,Е.М.Иммунофенотипированиевдиагностикезлокачественныхлимфомкожи/Е.М.Лезвинская,Г.В.Овсянникова,Л.Е.Гуревичидр.//Российскийжурналкожныхивенерическихболезней.—2007.—№1.—С.4-10.
Молочков,В.А.РазличныеподходыкопределениюклональностиприТ-клеточнойлимфомекожи/МолочковВ.А.,СидороваЮ.В.,МеньщиковаГ.В.исоавт.//Российскийжурналкожныхивенерическихболезней.―2012.― №5.― С.8-9.
Молочков,В.А.Т-клеточныелимфомыкожи:современныеподходыкклинико-морфологическойдиагностикесогласноклассификацииWHO/EORTC(2006).часть1/В.А.Молочков,А.М.Ковригина,Г.В.Овсянникова//Российскийжурналкожныхивенерическихболезней.—2009.—№2. —С.4-14.
Овсянникова,Г.В.Методиммунофенотипированиякоживдиагностикезлокачественныхлимфомкожи/Г.В.Овсянникова,Е.М.Лезвинская//Альманахклиническоймедицины.—2006.—№9.—С.96-101.
Овсянникова,Г.В.МетодопределенияклональностилимфоцитоввдиагностикеТ-клеточныхзлокачественныхлимфомкожи/Г.В.Овсянникова,Е.А.Никитин,Е.М.Лезвинская//Альманахклиническоймедицины.—2007.—№15.—С.254-258.
Олисова,О.Ю.Т-клеточнаялимфомакожи:трудностидиагностики/О.Ю.Олисова,О.В.Грабовская,И.Н.Тетушкина//Российскийжурналкожныхивенерическихболезней.—2013.— №3.—С.4-6.
Оркин,В.Ф.Т-клеточнаялимфомакожи:грибовидныймикоз/В.Ф.Оркин,А.И.Завьялов,С.С.Кравченяисоавт.//Клиническаядерматологияивенерология—2006.—№4.—С.14-16.
Павлов,С.Т.МатериалыквопросуоParapsoriasis/С.Т.Павлов//Венерологияидерматология.—1969.—№ 6.—С.242–246.
Разнатовский,И.М.БляшечныйпарапсориазБрокаигрибовидныймикоз(обзорлитературы)/И.М.Разнатовский//Вестн.дерматологииивенерологии.—1974.—№12.—С.23-29.
Разнатовский,И.М.БолезньБрока/И.М.Разнатовский//Вестн.дерматологииивенерологии.—1977.—№12.—С.40-44.
Разнатовский,И.М.ДифференциальнаядиагностикамеждуболезньюБрокаигрибовидныммикозом/И.М.Разнатовский//Вестн.дерматологииивенерологии.—1976.—№8.—С.29–34.
Разнатовский,И.М.ЭволюциявзглядовнагруппупарапсориазовБрока/И.М.Разнатовский//Вестн.дерматологииивенерологии.—1976.—
№2.—С.41-46.
Разнатовский,И.М.Lichenvariegatus(лихеноидныйпарапсориазБрока)/И.М.Разнатовский//Вестн.дерматологииивенерологии.—1977.—
№1.—С.15–19.
Родионов,А.Н.Гистологическаядиагностикалимфомкожи(достиженияипроблемы).Обзорлитературы/А.Н.Родионов,В.В.Барбинов,А.В.Казаков
//Журналдерматовенерологииикосметологии.—1997.—№ 1.—С.5–14.
Самцов,А.В.Клинические,гистологическиеииммуногистохимическиеособенностилимфомкожинасовременномэтапе/А.В.Самцов,И.Э.Белоусова//Вестникдерматологииивенерологии.—2006.—№1.—С.3-6.
Самцов,А.В.Оботношениибляшечногопарапсориазакгрибовидномумикозу.Вносятлиясностьновыеданные?/А.В.Самцов,И.Э.Белоусова//Вестникдерматологииивенерологии.—2007.—№6.—С.14-18.
Тарасенко,Г.Н.Лимфомакоживпрактикеврача-дерматолога/Г.Н.Тарасенко,И.А.Ламоткин,Ю.Г.Тарасенко,Ю.В.Кузьмина//Российскийжурналкожныхивенерическихболезней.—2006.—№2.—С.6-9.
Тупицын,Н.Н.Иммуноморфологическаядиагностикалимфом.Руководствопоиммуногистохимическойдиагностикеопухолейчеловека/Н.Н. Тупицын
/Подред.С.В.Петрова,Н.Т.Райхлина:2-еизд.—Казань:Титул,2004.—С.246–273.
Яковлев,А.Б.Парапсориаз:современноесостояниепроблемы/А.Б.Яковлев
//Лечащийврач—2012.—№10.— С.27.
Ackerman,AB.Ifsmallplaque(digitate)parapsoriasisisacutaneousT-celllymphoma,evenan‘abortive’one,itmustbemycosisfungoides!/ABAckerman//ArchDermatol—1996;—Vol.132:—P.562-566.
Algara,P.ValueofPCRdetectionofTCRgammagenerearrangementinthediagnosisofcutaneouslymphocyticinfiltrates/P.Algara,C.Soria,P.Martinezetal.//Diagn. Mol. Pathol.—1994.—Vol.3,N4.—P.275–282.
Alibert,J.L.M.DescriptiondesMaladiesdelaPeau:observeesal’hospitalSaint-Louis,etexpositiondesmeileuresmethodessuivespourleurtraitement/J.L.M.Alibert//Paris:BarroisL’AineetFils—1806.—P.231.
Arafah,M.TheHistologicalSpectrumofEarlyMycosisFungoides:AStudyof58SaudiArabpatients/MArafah,SNZaidi,HKKfoury,etal.//OmanMedJ.
—2012—Vol27(2)—P.134-139.
Arai,R.Retrospectivestudyof24patientswithlargeorsmallplaqueparapsoriasistreatedwithultravioletBtherapy/RArai,YHoriguchi//JDermatol.—2012—Vol.39(7)—P.674-676.
Assaf,C.CutaneouslymphomasinGermany:ananalysisoftheCentralCutaneousLymphomaRegistryoftheGermanSocietyofDermatology(DDG)/
C. Assaf,S.Gellrich,M.Steinhoffetal.//J.Dtsch.Dermatol.Ges.—2007.—Vol.5,N8.—P.662–668.
Bachelez,H.DetectionofclonalT-cellreceptorgammagenerearrangementswiththeuseofthepolymerasechainreactionincutaneouslesionsofmycosisfungoidesandSezarysyndrome/H.Bachelez,L.Bioul,B.Flageuletal.//Arch.Dermatol.—1995.—Vol. 131,N9.—P.1027–1031.
Bakels,V.ImmunophenotypingandgenerearrangementanalysisprovideadditionalcriteriatodifferentiatebetweencutaneousT-celllymphomasandpseudo-T-celllymphomas/VBakels,JWvanOostveen,SCvanderPutte//AmJPathol.—1997—Vol.150—P.1941-1949.
Ballesteros-Tato,A.PrimingofTfollicularhelpercellsbydendriticcells/ABallesteros-Tato, TD Randall//ImmunolCellBiol.—2013Vol.22.P.45-48.
Barba,G.Comparativegenomichybridizationidentifies17q11.2approximatelyq12duplicationasanearlyeventincutaneousT-celllymphomas/GBarba,CMatteucci,GGirolomoni//CancerGenetCytogenet.—2008—Vol.184(1)—P.48-51.
Bazin,E.Leconssurletraitementdesmaladieschroniquesengeneralaffectionsdelapeau/E. Bazin.—Paris, 1870.
Bell,D.Inbreastcarcinomatissue,immaturedendriticcellsresidewithinthetumor,whereasmaturedendriticcellsarelocatedinperitumoralareas/DBell,PChomarat,DBroyleset al.//JExpMed—1999—Vol. 190—P.1417-1426.
Belousova,IE.Apatientwithclinicopathologicfeaturesofsmallplaqueparapsoriasispresentinglaterwithplaque-stagemycosisfungoides:reportofacaseandcomparativeretrospectivestudyof27casesof"nonprogressive"smallplaqueparapsoriasis/IEBelousova,TVanecek,AVSamtsov//JAmAcadDermatol.—2008—Vol. 59(3)—P.474-482.
Bembenek,A.PresenceofmatureDC-Lamp+dendriticcellsinsentinelandnon-sentinellymphnodesofbreastcancerpatients/A.Bembenek,J.Li,C.Loddenkemperetal.//EurJSurgOncol—2008—Vol.34(5)—P.514-518.
Benner,M.F.DiagnosticandprognosticevaluationofphenotypicmarkersTRAF1,MUM1,BCL2andCD15incutaneousCD30-positivelymphoproliferativedisorders/ M.F.Benner,P.M.Jansen,C.J.Meijer//BrJDermatol.—2009—Vol.161(1)—P.121-127.
Benton,EC.Acutaneouslymphomainternationalprognosticindex(CLIPi)formycosisfungoidesandSezarysyndrome/E.C.Benton,S.Crichton,R.Talpur//EurJCancer.—2013—Vol. 49(13)—P.2859-2868.
Berger,CL.ThegrowthofcutaneousT-celllymphomaisstimulatedbyimmaturedendriticcells/C.L.Berger,D.Hanlon,D.Kanada//Blood.—2002—Vol.99(8)—P.2929-2939.
Bergman,R.ImmunophenotypingandT-cellreceptorgammagenerearrangementanalysisasanadjuncttothehistopathologicdiagnosisofmycosisfungoides/RBergman,DFaclieru,DSaharetal.//JAmAcadDermatol.—1998—Vol. 39—P.554-559.
Bittencourt,A.L.AnalysisofcutaneouslymphomasinamedicalcenterinBahia,Brazil/A.L.Bittencourt,P.D.Oliveira,A.C.Andradeetal.//AmJClinPathol.
—2013—Vol.140(3)—P.348-354.
Bonin,S.Evidenceofmultipleinfectiousagentsinmycosisfungoideslesions/S.Bonin,S.M.Tothova,R.Barbazzaetal. //ExpMolPathol.—2010—Vol.89(1)
—P.46-50.
Bordignon,M.Theroleofimmunohistochemicalanalysisinthediagnosisofparapsoriasis/M.Bordignon,A.Belloni-Fortina,B.Pigozzietal.//ActaHistochem.—2011—Vol.113(2)—P.92-95.
Bos,J.D.Theskinasanorganofimmunity/J.D.Bos//ClinExpImmunol―1997―Vol. 107(suppl1) ―P.3-5
Brocq,M.L.Lesparapsoriasis/M.L.Brocq//Ann.Dermatol.Syphiligr.(Paris).—1902.—Vol.3.—P.313-315.
Buder,K.PrimarycutaneousfollicularhelperT-celllymphoma:diagnosticpitfallsofthisnewlymphomasubtype/K.Buder,L.M.Poppe,E.B.Bröckeretal.//JCutanPathol.―2013―Vol.40(10)― P.903-908.
Burg,G.Smallplaque(digitate)parapsoriasisisan“abortivecutaneousT-celllymphoma”andisnotmycosisfungoides/G.Burg,R.Dummer//Arch.Dermatol.—1995.—Vol. 131,N3.—P.336-338.
Burg,G.Cutaneouslymphomasconsistofaspectrumofnosologicallydifferententitiesincludingmycosisfungoidesandsmallplaqueparapsoriasis/G.Burg,
R. Dummer,F.O.Nestleetal.//Arch.Dermatol.—1996.—Vol. 132,N5.—P. 567–572.
Carbone,A.Array-basedcomparativegenomichybridizationinearly-stagemycosisfungoides:recurrentdeletionoftumorsuppressorgenesBCL7A,SMAC/DIABLO,andRHOF/A.Carbone,L.Bernardini,F.Valenzanoetal.//GenesChromosomesCancer.―2008―Vol.47(12)― P.1067-1075.
Cerroni,L.AnillustratedguidetoSkinLymphoma,2nded./L.Cerroni,K.Gatter,
H. Kerl.—BlackwellPublishingLtd,2004.—186p.
Cerroni,L.Lymphoproliferativelesionsoftheskin/L.Cerroni//J.Clin.Pathol.
—2006.—Vol. 59,N8.—P.813–826.
Cerroni,L. Skinlymphoma/L.Cerroni,K.Gatter,H.Kerl//Theillustratedguide. 3rded.Oxford,UK:Wiley-Blackwell.―2009.―P.11-56.―Chapter2,Mycosisfungoides.
Cerroni,L.Theuseofmonoclonalantibodiesonparaffinsectionsinthediagnosisofcutaneouslymphoproliferativedisorders/L.Cerroni,H.Kerl//Dermatol.Clin.—1994.—Vol.12,N2.—P.219–229.
Cho,R.J.UseofanexpandedimmunohistochemicalpaneltodistinguishcutaneousHodgkinlymphomafromhistopathologicimitators/R.J.Cho,T.H.McCalmont,W.Z.Aietal.//JCutanPathol.―2012―Vol.39(6)―P.651-658.
Cho-Vega,J.H.Early-stagemycosisfungoidesvariants:case-basedreview/J.H.Cho-Vega,J.A.Tschen,M.Duvic//AnnDiagnPathol.―2010―Vol.14(5)P.369-385.
Chung,C.Y.Dendriticcells:cellularmediatorsforimmunologicaltolerance/
C.Y.Chung,D.Ysebaert,Z.N.Bernemanetal.//ClinDevImmunol.―2013Vol. 20― P.92-98.
Coons,A.H.Immunologicalpropertiesofanantibodycontainingafluorescentgroup/A.H.Coons,H.J.Creech,R.N.Jones//Proc.Soc.Exp.Biol.Med.—1941.—Vol.47.—P.200-202.
Coons,A.H.Studiesonantibodyproduction.I.Amethodforthehistochemicaldemonstrationofspecificantibodyanditsapplicationtoastudyofthehyperimmunerabbit/A.H.Coons,E.H.Leduc,J.M.Connolly//J.Exp.Med.—1955.—Vol.102.—P.49-60.
Criscione,V.D.IncidenceofcutaneousT-celllymphomaintheUnitedStates,1973–2002/V.D.Criscione,M.A.Weinstock//Arch.Dermatol.—2007.—Vol. 143,N7.—P.854–859.
Degos,R.Dermatologie/R.Degos.—Paris.—1981
Der-Petrossian,M.DermalinfiltratesofcutaneousT-celllymphomaswithepidermotropismbutnotothercutaneouslymphomasareabundantwithlangerinerin⁺dendriticcells/M.Der-Petrossian,J.Valencak,C.Jonaketal.//JEur.Acad.DermatologyandVenerology.―2011―Vol.25(8)― P.922-927.
Dereure. O. InfrequentFasmutationsbutnoBaxorp53mutationsinearlymycosisfungoides:apossiblemechanismfortheaccumulationofmalignantTlymphocytesintheskin/O. Dereure, E. Levi, E.C.Vonderheidetal.//JInvestDermatol.―2002―Vol.118(6)― P.949-956.
Dulmage,B.O.LessonslearnedfromgeneexpressionprofilingofcutaneousT-celllymphoma/B.O.Dulmage,L.J.Geskin//BrJDermatol.―2013―Vol.67
― P.871-878.
Dummer,R.Expressionofbcl-2proteinandKi-67nuclearproliferationantigeninbenignandmalignantcutaneousT-cellinfiltrates/R.Dummer,S.A.Michie,
D. Kelletal. //JCutanPathol.―1995―Vol.22(1)― P.11-7.
Edelson,R.L.CutaneousT-celllymphoma:mycosisfungoides,Sezarysyndrome,andothervariants/R.L.Edelson//J.Am.Acad.Dermatol.—1980.—Vol.2,N2.—P.89–106.
Edelson,R.L.CutaneousTcelllymphoma:thehelpinghandofdendriticcells/
R.L. Edelson//AnnNyAcadSci.―2001―Vol.941― P.1-11.
El-Darouti,M.A.Hypopigmentedparapsoriasisenplaque,anew,overlookedmemberoftheparapsoriasisfamily:areportof34patientsanda7-yearexperience/M.A.El-Darouti,M.M.Fawzy,R.A.Hegazyetal.//JAmAcadDermatol.―2012―Vol.67― P.1182-1188.
Elliott,B.Long-termprotectiveeffectofmatureDC-LAMP+dendriticcellaccumulationinsentinellymphnodescontainingmicrometastaticmelanoma/B.Elliott,R.A.Scolyer,S.etal.Suciu//ClinCancerRes.―2007―Vol.13―P.3825-3830.
Everett,M.A.EarlydiagnosisofMycosisfungoides:vacuolarinterfacedermatitis
/M.A. Everett//J.Cutan.Pathol.—1985.—Vol. 12,N3–4.—P. 271–278.
Fahy,C.M.Developmentofmycosisfungoidesafter bonemarrowtransplantationforchronicmyeloidleukaemia;transmissionfromallogeneicdonor/C.M.Fahy,
Fortune,F.Quinn//BrJDermatology.―2013―Vol. 68― P.45-49.
Flaig,M.J.Impactofmolecularanalysisinthediagnosisofcutaneouslymphoidinfiltrates/M.J.Flaig,K.Schuhmann,C.A.Sander//Semin.Cutan.Med.Surg.—2000.—Vol. 19,N2.—P.87–90.
Fleischmajer, R. Parapsoriasis en plaques and mycosis fungoides /
R. Fleischmajer,F.Pascher,C.F.Sims//Dermatologica.—1965.—Vol. 131,N3.—P.149–160.
Foltyn,W.ThevalueoftheKi-67proliferationmarkerasaprognosticfactoringastroenteropancreaticneuroendocrinetumours/W.Foltyn,W.Zajęcki,B.Mareketal. //EndokrynolPol.―2012―Vol.63(5)― P.362-366.
Furmanczyk,P.S.Diagnosisofmycosisfungoideswithdifferentalgorithmicapproaches\P.S.Furmanczyk,G.M.Wolgamot,S.J.Kussicketal.\\JCutanPathol.―2010Vol.37(1)― P.8-14.
Furukawa,F.Immunohistochemicallocalizationofproliferatingcellnuclearantigen/cyclininhumanskin/F.Furukawa,S.Imamura,M.Fujitaetal.//ArchDermatolRes.―1992―Vol.284(2)P.86-91.
Gambichler,T.ExpressionofproliferationmarkersandcellcycleregulatorsinTcelllymphoproliferativeskindisorders/T.Gambichler,S.Bischoff,F.G.Becharaetal.//JDermatolSci.―2008―Vol.49(2)― P.125-132.
Gamsizkan,M.Comparative morphometricanalysisofintraepidermalanddermallymphocytesinearlymycosisfungoidesandsomeinflammatorydermatoses/M.Gamsizkan,M.Demiriz,Y.Karslioğluetal.//AnalQuantCytolHistol.―2007
―Vol.29(3)― P.153-158.
Gillot,X.Thesepourledoctoratenmedecine:etudesuruneaffectiondelapeaudecritesouslenomdeMycosisfongo’ide/X. Gillot.—Paris,1869.—89p.
Glusac,E.J.Criterionbycriterion,mycosisfungoides/E.J.Glusac//Am.J.Dermatopathol.—2003.—Vol. 25,N3.—P. 264–269.
Goeldel,A.L.T-cellreceptorgammagenerearrangementincutaneousT-celllymphoma:comparativestudyofpolymerasechainreactionwithdenaturinggradientgelelectrophoresisandGeneScananalysis/A.L.Goeldel,P.Cornillet-Lefebvre,A.Durlachetal.//BrJDermatol.―2010―Vol.162(4)―P.822-829.
Golmohammad.R.TheprognosticvalueoftheP53proteinandtheKi-67markerinbreastcancerpatients/R.Golmohammadi,A.Pejhan//JPakMedAssoc.―2012―Vol.62(9)― P.871-875.
Goteri,G.Densityofneoplasticlymphoidinfiltrate,CD8+Tcells,andCD1a+dendriticcellsinmycosisfungoides/G.Goteri,A.Filosa,B.Mannelloetal.//JClinPathol.―2003―Vol. 56(6)― P.453-438.
Gjerdrum,L.M.FOXP3+regulatoryTcellsincutaneousT-celllymphomas:associationwithdiseasestageandsurvival/L.M.Gjerdrum,A.Woetmann,N.Odumet al.//Leukemia.―2007―Vol.21(12)― P.2512-2518.
Guitart,J.Histologiccriteriaforthediagnosisofmycosisfungoides:proposalforagradingsystemtostandardizepathologyreporting/J.Guitart,J.Kennedy,S. Ronanetal.//J.Cutan. Pathol.—2001.—Vol. 28,N4.—P. 174–183.
Haeffner,A.C.Differentiationandclonalityoflesionallymphocytesinsmallplaqueparapsoriasis/A.C.Haeffner,B.R.Smoller,K.Zepteretal.//Arch.Dermatol.—1995.—Vol. 131,N3.—P.321–324.
He,W.L.CombinedevaluationofcentromereproteinHandKi-67asprognosticbiomarkerforpatientswithgastriccarcinoma/W.L.He,Y.H.Li,D.J.Yangetal.
//EurJSurgOncol.―Vol. 20― P.18-23.
Heuze,M.L.Migrationofdendriticcells:physicalprinciples,molecularmechanisms,andfunctionalimplications/M.L.Heuze,P.Vargas,M.Chabaudetal.//ImmunolRev.―2013―Vol.256(1)― P.240-254.
Hinds,G.A.Treatmentofmycosisfungoideswithtotalskinelectronbeam:responseandrelapsebyethnicityandsex/G.A.Hinds,J.Alhariri,R.Q.Kleinetal.//AmJClinOncol.―2013―Vol. 36(5)― P.481-485.
Hwang,S.T.MycosisfungoidesandSézarysyndrome/S.T.Hwang,J.E.Janik,E.S.Jaffe//Lancet.―2008―Vol.371(9616)― P.945-957.
Inchara,Y.K.Earlymycosisfungoidesvs.inflammatorymimics:howreliableishistology?/Y.K.Inchara,T.Rajalakshmi//IndianJDermatolVenereolLeprol.
―2008―Vol.74(5)― P.462-426.
Johnson,L.A.Controlofdendriticcelltraffickinginlymphaticsbychemokines/
L.A. Johnson, D.G. Jackson. //Angiogenesis.―2013―Vol.34―P.120-124.
Johnson,V.E.Geneticmarkersassociatedwithprogressioninearlymycosisfungoides/V.E.Johnson,E.C.Vonderheid,A.D.Hessetal.//JEurAcadDermatolVenereol.―2013―Vol. 31.― P.132.
Jovanoviсh,M.P.PooroutcomeinpatientswithdiffuselargeB-celllymphomaisassociatedwithhighpercentageofbcl-2andKi67-positivetumorcells/M.P.Jovanoviсh,L.Jakovich,A.Bogdanovichetal.//VojnosanitPregl.―2009―Vol. 66(9)― P.738-743.
Kallakury,B.V.Theprognosticsignificanceofproliferation-associatednucleolarproteinp120expressioninprostateadenocarcinoma:acomparisonwithcyclinsAandB1,Ki-67,proliferatingcellnuclearantigen,andp34cdc2/B.V.Kallakury,
C.E. Sheehan,S.J.Rheeetal.//Cancer.―1999―Vol.85(7)― P.1569-1576.
Kanavaros,P.Immunohistochemicalexpressionofthep53,mdm2,p21/Waf-1,Rb,p16,Ki67,cyclinD1,cyclinAandcyclinB1proteinsandapoptoticindexinT-celllymphomas/P.Kanavaros,M.Bai,K.Stefanakietal.//HistolHistopathol.―2001―Vol. 16(2)― P.377-386.
KandolfSekulović,L.TCRgammagenerearrangementanalysisinskinsamplesandperipheralbloodofmycosisfungoidespatients/L.KandolfSekulović,B.Cikota,O.Stojadinovićetal.//ActaDermatovenerolAlpPanonicaAdriat.―2007―Vol. 16(4)― P.149-155.
Kawahira,K.Immunohistochemicalstainingofproliferatingcellnuclearantigen(PCNA)inmalignantandnonmalignantskindiseases/K.Kawahira//ArchDermatolRes―1999―291(7-8)― P.413-418.
Kazakov,D.V.Clinicopathologicalspectrumofmycosisfungoides/D.V.Kazakov,G.Burg,W.Kempf//JEurAcadDermatolVenereol.―2004―Vol.18(4)― P.397-415.
Keehn,C.A.Thediagnosis,stagingandtreatmentoptionsformycosisfungoides/
C.A.Keehn,I.P.Belongie,G.Shistiketal.//CancerControl.―2007―Vol.14
― P.102-111.
Khalil,S.H.TheapplicabilityofT-cellreceptorgammagenerearrangementasanadjuvantdiagnostictoolinskinbiopsiesforcutaneousT-celllymphoma/S.H.Khalil,I.R.Hamadah//SaudiMedJ.―2006―Vol. 27(7)―P.951-954.
Kikuchi,A.Parapsoriasisenplaques:itspotentialforprogressiontomalignantlymphoma/A.Kikuchi,W.Naka,T.Harada//JAm AcadDermatol.―1993―Vol. 29(3)― P.419-422.
Kikuchi,A.Apoptoticandproliferatingcellsincutaneouslymphoproliferativediseases/A.Kikuchi,T.Nishikawa//ArchDermatol.―1997―Vol.133(7)―P.829-833.
Kim,S.W.Mycosisfungoidesmisdiagnosedassquamouscellcarcinoma/S.W.Kim,D.J.Kim,S.N.Jung//ArchPlastSurg.―2013―Vol.40(4)―P.472-474.
Kim,Y.H.ISCLandtheEORTC.TNMclassificationsystemforprimarycutaneouslymphomasotherthanmycosisfungoidesandSezarysyndrome:aproposaloftheInternationalSocietyforCutaneousLymphomas(ISCL)andtheCutaneousLymphomaTaskForceoftheEuropeanOrganizationofResearchandTreatmentofCancer(EORTC)/Y.H.Kim,R.Willemze,N.Pimpinellietal.//Blood.―2007―Vol.110(2)― P.479-484.
King-Ismael,D.Guttateparapsoriasis/digitatedermatosis(smallplaqueparapsoriasis)ismycosisfungoides/D.King-Ismael,A.B.Ackerman//Am.J.Dermatopathol.—1992.—Vol. 14,N6.—P.518-530.
Klechevsky,E.Humandendriticcellsstarsintheskin/E.Klechevsky//EurJImmunol.―2013―Vol. 12―P.100-103.
Klechevsky,E.Humandendriticcellssubsetsastargetsandvectorsfortherapy/
E.Klechevsky,J.Banchereau//AnnNYAcadSci.―2013―Vol.1284P.24-30.
Klemke,C.D.ClonalTcellreceptorgamma-chaingenerearrangementbyPCR-basedGeneScananalysisintheskinandbloodofpatientswithparapsoriasisandearly-stagemycosisfungoides/C.D.Klemke,E.Dippel,A.Dembinski//JPathol.―2002―Vol.197(3)P.348-354.
Kopp,K.L.STAT5-mediatedexpressionofoncogenicmiR-155incutaneousT-celllymphoma/K.L.Kopp,U.Ralfkiaer,L.M.Gjerdrumetal.//CellCycle―2013―Vol. 12―P.1939-1947.
Krejsgaard, T. RegulatoryTcellsandimmunodeficiencyinmycosisfungoidesandSézarysyndrome/T. Krejsgaard, N.Odum,C.Geisleretal.//Leukemia.―2012―Vol. 26(3)― P.424-432.
Küng,E.CutaneousTcelllymphoma:immunocytochemicalstudyonactivation/proliferationanddifferentiationassociatedantigensinlymphnodes,
skin,andperipheralblood/E.Küng,K.Meissner,T.Löning//VirchowsArchAPatholAnatHistopathol.―1988―Vol.413(6)―P.539-49.
Ladstein,RG.Ki-67expressionissuperiortomitoticcountandnovelproliferationmarkersPHH3,MCM4andmitosinasaprognosticfactorinthickcutaneousmelanoma/R.G.Ladstein,I.M.Bachmann,O.Straumeetal.//BMCCancer.―2010―14― P.10-140.
Lallas,A.Dermoscopyofearlystagemycosisfungoides/A.Lallas,Z.Apalla,I.Lefaki//JEurAcadDermatolVenereol.―2013―Vol.27(5)― P.617-621.
Lambert,W.C.Thenosologyofparapsoriasis/W.C.Lambert,M.A.Everett//JAmAcadDermatol.―1981―Vol.5―P.373-395.
Lazar,AP.Parapsoriasisandmycosisfungoides:theNorthwesternUniversityexperience,1970to1985/A.P.Lazar,W.A.Caro,H.H.Roenigketal.//JAmAcadDermatol.―1989Vol.5―P.919-923.
LeBoit,P.E.WorldHealthOrganizationClassificationofTumours.PathologyandGeneticsofSkinTumours/P.E.LeBoit,G. Burg,D. Weedonetal.—Lion:IARCPress, 2006.—355p.
Lebre,M.C.RheumatoidarthritissynoviumcontainstwosubsetsofCD83-DC-LAMP-dendriticcellswithdistinctcytokineprofiles/M.C.Lebre,S.L.Jongbloed,S.W.Taset al.//AmJPathol.―2008―Vol.172(4)― P.940-950.
Lever,W.F.Histopathologyoftheskin/W.F.Lever,G. Schaumburg-Lever.—Philadelphia:Lippincott, 1975.—897p.
Li,JY.ManagementofcutaneousTcelllymphoma:newandemergingtargetsandtreatmentoptions/J.Y.Li,S.Horwitz,A.Moskowitzetal.//CancerManagRes.―2012―Vol.4― P.75-89.
Li,SS.ReplicativeMCM7proteinasaproliferationmarkerinendometrialcarcinoma:atissuemicroarrayandclinicopathologicalanalysis./S.S.Li,W.C.Xue, U.S.Khooetal.//Histopathology.―2005―Vol. 46(3)― P.307-313.
Li,W.Reflectanceconfocalmicroscopyforthecharacterizationofmycosisfungoidesandcorrelationwithhistology:apilotstudy/W.Li,H.Dai,Z.Lietal.
//SkinResTechnol.―2013―Vol.19(3)― P.352-355.
Lüftl,M.Dendriticcellsandapoptosisinmycosisfungoides/M.Lüftl,A.Feng,E. Lichaetal. //Br JDermatol.―2002―Vol.147(6)― P.1171-1179.
Magro,C.M.Pityriasislichenoideschronica:stratificationbymolecularandphenotypicprofile/C.M.Magro,A.N.Crowson,C.Morrisonetal.//HumPathol.―2007―Vol.38(3)― P.479-490.
Mao,X.AmplificationandoverexpressionofJUNBisassociatedwithprimarycutaneousT-celllymphomas/X.Mao,G. Orchard, D.M.Lillingtonetal.
//Blood.―2003―Vol. 101(4)― P.1513-1519.
Mao,X.AgenomicandexpressionstudyofAP-1inprimarycutaneousT-celllymphoma:evidencefordysregulatedexpressionofJUNBandJUNDinMFandSS/X.Mao,G. Orchard, T.J.Mitchelletal.//JCutanPathol.―2008―Vol.35(10)― P.899-910.
Marrack,J.R.DerivedAntigensasaMeansofStudyingtherelationofSpecificCombinationtoChemicalStructure:(SectionofTherapeuticsandPharmacology)
/J.R.Marrack//ProcR SocMed.―1934―Vol. 27(8)P.1063-1065.
Massone,C.Histopathologicfeaturesofearly(patch)lesionsofmycosisfungoides:amorphologicstudyon745biopsyspecimensfrom427patients/C.Massone,K.Kodama,H.Kerletal.//AmJSurgPathol―2005.―Vol.29―P.550—560.
McMillan,E.M.DemonstrationofOKT6-reactivecellsinmycosisfungoides/
E.M.McMillan,K.Beeman,R.Wasiketal.//JAmAcadDermatol―1982―Vol.6P.880-887.
Meissner,K.EpidermalLangerinerhanscellsandprognosisofpatientswithmycosisfungoidesandSe´zarysyndrome/K.Meissner,T.Loning,W.Rehpenningetal.//InVivo―1993―Vol.7P. 277-280.
Mirvish,J.J.RoleofinfectiousagentsincutaneousT-celllymphoma:factsandcontroversies/J.J.Mirvish,R.G.Pomerantz,JrL.D.Faloetal.//ClinDermatol.
―2013―Vol.31(4)P.423-431.
Montgomery,H.Dermatopathology/H.Montgomery.—New-York,1967.—154p.
Moyal,L.MiR-155isinvolvedintumorprogressionofmycosisfungoides/L.Moyal,A.Barzilai,B.Gorovitzetal.//ExpDermatol.―2013―Vol.22(6)P.431-433.
Nag,F.Ichthyosiformlargeplaqueparapsoriasis:reportofarareentity/F.Nag,
Ghosh,P.Biswasetal.//IndianJDermatol.―2013―Vol.58(5)P.385-387.
Nakane,P.K.Enzyme-labeledantibodies:preparationandapplicationforthelocalizationofantigen/P.K.Nakane,Jr.G.B.Pierce//J.Histochem.Cytochem.
—1966.—V.14.—P.929.
Navas,I.C.p16(INK4a)genealterationsarefrequentinlesionsofmycosisfungoides/I.C.Navas,P.L.Ortiz-Romero,R.Villuendasetal.//AmJPathol.―2000―Vol. 156(5)― P.1565-1572.
Nickoloff,B.J.Light-microscopicassessmentof100patientswithpatch/plaque-stagemycosisfungoides/B.J.Nickoloff//Am.J.Dermatopathol.—1988.—Vol. 10,N6.—P.469—477.
Onizuka,T.ParapsoriasisenplaquesuspectedofprogressiontomycosisfungoidesassociatedwithextranodalmalignantBcelllymphomaofthecheek/
T.Onizuka,S.Satou,M.Koikeetal.//RinshoKetsueki.―1993―Vol.34(6)
― P.723-727.
Oschlies,I.Mycosisfungoidesorinflammatorydermatitis:differentialdiagnosisbetweenearlylymphomaandinflammationinskinbiopsies/I.Oschlies,W.Klapper//Pathologe.―2013―Vol. 34(3)― P.215-224.
Papp,S.Anewmonoclonalanti-humanCD83antibodyforflowcytometry,westernblotanalysis,andELISA/S.Papp,U.Richardt,B.Fleischeretal.
//MonoclonAntibImmunodiagnImmunother.―2013―Vol.32(2)P.98-104.
Park,M.C.CD83expressioninducedbyCpG-DNAstimulationinamacrophagecelllineRAW264.7/M.C.Park,D.Kim,Y.Lee//BMBRep.―2013―Vol.46(9)P.448-453.
Peck,J.R.WasTreatmenttheTrigger?MycosisFungoides/J.R.Peck,M.P.Frank, L.R.Peck//AmJ Med.―2013―Vol. 28.― P.1002-1006.
Persson,J.L.miRNAinmycosisfungoidesandskininflammation/J.L.Persson
//APMIS―2013―121(11)― P.1017-1019.
Pigozzi,B.ExpressionoftheCD1amoleculeinB-andT-lymphoproliferativeskinconditions/B.Pigozzi,M.Bordignon,A.B.Fortinaetal.//OncolRep―2006―Vol. 15―P.347—351.
Pimpinelli,N.Definingearlymycosisfungoides/N.Pimpinelli,E.A.Olsen,M.Santuccietal.// JAmAcadDermatology―2005―Vol. 53― P.1053-1063
Ponti,R.BernengoTCRgamma-chaingenerearrangementbyPCR-basedGeneScan:diagnosticaccuracyimprovementandclonalheterogeneityanalysisinmultiplecutaneousT-celllymphomasamples/R.Ponti,M.T.Fierro,P.Quaglinoetal.//JInvestDermatol.―2008―Vol.128(4)―P.1030-1038.
Ponti,R.T-cellreceptorgammagenerearrangementbymultiplexpolymerasechainreaction/heteroduplexanalysisinpatientswithcutaneousT-celllymphoma(mycosisfungoides/Sézarysyndrome)andbenigninflammatorydisease:correlationwithclinical,histologicalandimmunophenotypicalfindings/
R.Ponti,P.Quaglino,M.Novellietal.//BrJDermatol.―2005―Vol.153(3)
― P.565-573.
Rodríguez-Pinilla,S.M.TCR-γexpressioninprimarycutaneousT-celllymphomas/S.M.Rodríguez-Pinilla,P.L.Ortiz-Romero,V.Monsalvezetal.//AmJSurgPathol.―2013―Vol.37(3)―P.375-384.
Prechtel,A.T.CD83:anupdateonfunctionsandprospectsofthematurationmarkerofdendriticcells/A.T.Prechtel,A.Steinkasserer//ArchDermatol―2007―Vol. 299(2)―P.59-69.
Ralfkiaer,E.Benignandmalignantlymphocyticskininfiltrates:immunologicalpatternsrecognizedbyimmunohistochemicalstainingwithmonoclonalantibodies/E.Ralfkiaer,K. Hou-Jensen,D.Y.Masonetal.//Adv.Exp.Med.Biol.—1985.—Vol.186.—P.1033-1041.
Ralfkiaer,E.Immunocytochemicalcharacterisationofcutaneouslymphomasotherthanmycosisfungoides/E.Ralfkiaer,T.A.Saati,J.Bosqetal.//J.Clin.Pathol.—1986.—Vol. 39,N5.—P.553–563.
Ralfkiaer,U.DiagnosticmicroRNAprofilingincutaneousT-celllymphoma(CTCL)/U.Ralfkiaer,P.H.Hagedorn,N.Bangsgaardetal.//Blood―2011―Vol.118― P.5891—5900.
Rowden,G.TargetroleofLangerhanscellsinmycosisfungoides:transmissionandimmuno-electronmicroscopicstudies/G.Rowden,T.M.Phillips,M.G.Lewisetal.//JCutanPathol―1979―Vol.6―P.364—382.
Russo,E.Dendriticcellinteractionswithlymphaticendothelium/E.Russo,M.Nitschké,C.Halin//LymphatResBiol.―2013―Vol.11(3)― P.172-182.
Saint-Vis,B.Anovellysosome-associatedmembraneglycoprotein,DC-LAMP,induceduponDCmaturation,istransientlyexpressedinMHCclassIIcompartment/B.Saint-Vis,J.Vincent,S.Vandenabeeleetal.//Immunity.―1998―Vol.9(3)―P.325-336.
Samman,P.D.Thenaturalhistoryofparapsoriasisenplaques(chronicsuperficialdermatitis)andprereticuloticpoikiloderma/P.D.Samman//Br.J.Dermatol.—1972.—Vol.87,N5.—P.405—411.
Sanchez,J.L.Thepatchstageofmycosisfungoides.Criteriaforhistologicdiagnosis/J.L.Sanchez,A.B. Ackerman//Am.J.Dermatopathol.—1979.—Vol.1,N1.—P.5–26.
Santucci,M.Efficacyofhistologiccriteriafordiagnosingearlymycosisfungoides:anEORTCcutaneouslymphomastudygroupinvestigation.EuropeanOrganizationforResearchandTreatmentofCancer/M.Santucci,A.Biggeri,
A.C.Felleretal. //Am.J.Surg.Pathol.—2000.—Vol.24,N1.—P.40—50.
Sarantopoulos,G.P.Mimicsofcutaneouslymphoma:reportofthe2011SocietyforHematopathology/EuropeanAssociationforHaematopathologyworkshop/
G.P.Sarantopoulos,B.Palla,J.Saidetal.//AmJClinPathol.―2013―Vol.139(4)― P.536-551.
Sarveswari,K.N.Theconundrumofparapsoriasisversuspatchstageofmycosisfungoides/K.N.Sarveswari,P.Yesudian//IndianJDermatolVenereolLeprol
―2009―Vol. 75― P.229—235.
Schlapbach,C.HighnumbersofDC-SIGN+dendriticcellsinlesionalskinofcutaneousT-celllymphoma/C.Schlapbach,A.Ochsenbein,U.Kaelinetal.//JAmAcadDermatol.―2010―Vol.62(6)― P.995-1004.
Schwingshackl,P.Distribu-tionandmaturationofskindendriticcellsubsetsintwoformsofcutaneousT-celllymphoma:mycosisfungoidesandSézarysyndrome/P.Schwingshackl,G.Obermoser,V.A.Nguyenetal.//ActaDermVenereol.―2012―Vol. 92(3)― P.269-275.
Seillet,C.Terminaldifferentiationofdendriticcells/C.Seillet,G.T.Belz//AdvImmunol.―2013―Vol.120― P.185-210.
Sehgal,V.N.Parapsoriasis:acomplexissue/V.N.Sehgal,G.Srivastava,A.K.Aggarwal//Skinmed―2007―Vol.6―P.280-286.
Shapiro,P.E.Thehistologicspectrumofmycosisfungoides/Sezarysyndrome(cutaneousT-celllymphoma).Areviewof222biopsies,includingnewlydescribedpatternsandtheearliestpathologicchanges/P.E.Shapiro,F.J.Pinto//Am.J.Surg.Pathol.—1994.—Vol. 18,N7.—P.645—667.
Shin,J.LesionalgeneexpressionprofilingincutaneousT-celllymphomarevealsnaturalclustersassociatedwithdiseaseoutcome/J.Shin,S.Monti,D.J.Airesetal.//Blood.2007―Vol.110(8)― P.3015-3027.
Simon,M.Largeplaqueparapsoriasis:clinicalandgenotypiccorrelations/M.Simon,M.J.Flaig,P.Kindetal//JCutanPathol―2000―Vol.27― P.57-60.
Slater,D.Clonaldermatoses:aconceptualanddiagnosticdilemma/D.Slater//J.Pathol.—1990.—Vol. 162,N1.—P.1–3.
Smith,N.P.HistologiccriteriaforearlydiagnosisofcutaneousT-celllymphoma
/N.P.Smith//DermatolClin―1994―Vol.12― P.315-322.
Smoller,B.R.Reassessmentofhistologicparametersinthediagnosisofmycosisfungoides/B.R.Smoller,K. Bishop,E.Glusacetal.//Am.J.Surg.Pathol.—1995.—Vol.19,N12.—P.1423—1430.
Song,S.X.Mycosisfungoides:reportofthe2011SocietyforHematopathology/EuropeanAssociationforHaematopathologyworkshop/S.X.
Song,R.Willemze,S.H.Swerdlowetal.//AmJClinPathol.―2013―139(4)
― P.466-490.
Soughi,M.Hyperpigmentedmycosisfungoides:ararevariant/M.Soughi,F.Z.Mernissi//PanAfrMedJ.―2013―Vol.7― P.15-13.
Southern,E.M.DetectionofspecificsequencesamongDNAfragmentsseparatedbygelelectrophoresis//JMolBiol.—1975.
SternbergerL.A.Theunlabelledantibodyperoxidase-antiperoxidase(PAP)method./L.A. Sternberger,//EdImmunocytochemistry.―1979.―P.104-169.
Sterry,W.Thoughtsaboutparapsoriasis/W.Sterry //Dermatopathology.—2000.—Vol.6.—P.1-3.
Stevens,S.R.AsimpleclinicalscoringsystemtoimprovethesensitivityandstandardizationofthediagnosisofmycosisfungoidestypecutaneousT-celllymphoma:logisticregressionofclinicalandlaboratorydata/S.R.Stevens,M.S.Ke, A.Biroletal//BrJDermatol―2003―Vol.149― P.513-522
Thomas,B.R.ApracticalapproachtoaccurateclassificationandstagingofmycosisfungoidesandSézarysyndrome/B.R.Thomas,S.Whittaker//SkinTherapyLett.―2012―Vol.17(10)―P.5-9.
Thurnher,M.Humanrenal-cellcarcinomatissuecontainsdendriticcells/M.Thurnher,C.Radmayr,R.Ramoneretal.//Int JCancer.―1996―Vol.68―P.1-7.
Tirumalae,R.OriginUseofCD4,CD8,andCD1aImmunostainsinDistinguishingMycosisFungoidesfromitsInflammatoryMimics:APilotStudy
/R.Tirumalae,P.K.Panjwani//IndianJDermatol.―2012―Vol.57(6)―P.424-427.
Tracey,L.MycosisfungoidesshowsconcurrentderegulationofmultiplegenesinvolvedintheTNFsignalingpathway:anexpressionprofilestudy/L.Tracey,
R.Villuendas,A.M.Dotoretal.//Blood.―2003―Vol.102(3)―P.1042-1050.
Turbitt,M.L.AnassessmentofthediagnosticvalueofthemonoclonalantibodiesLeu8,OKT9,OKT10andKi67incutaneouslymphocyticinfiltrates.BrJDermatol/M.L. Turbitt,R.M.Mackie//1986―Vol.115(2)―P.151-158.
Ueno,H.Harnessinghumandendriticcellsubsetsformedicine/H.Ueno,N.Schmitt, E. Klechevskyetal.//ImmunolRev.―2010―Vol.234(1)P.199-212.
Unna,P.UberdieParakeratosenimallgemeinenundeineneueFormderselben(Parakeratosisvariegata)/P.Unna,R.Santi,S.Pollitzor//Monatsschr.Prakt.Dermatol.—1890.—Vol. 10.—P.404—412.
Vakeva,L.Aretrospectivestudyoftheprobabilityoftheevolutionofparapsoriasisenplaquesintomycosisfungoides/L.Vakeva,S.Sarna,
Vaalastietal.//ActaDerm.Venereol.—2005.—Vol.85,N4.—P.318–323.
Velagapudi,P.Smallbowelobstructionduetomycosisfungoides:anunusualpresentation/P.Velagapudi,M.Turagam,I.Uzoaruetal.//AmJMedSci.2011
―Vol.341(6)― P.508-509.
Vonderheid,E.C.Prognosticfactorsandriskstratificationinearlymycosisfungoides/E.C.Vonderheid,I.Pavlov,J.C.Delgadoetal.//LeukLymphoma.2013―Vol.7― P.23-27.
Wain,E.M.Finemappingofchromosome10qdeletionsinmycosisfungoidesandsezarysyndrome:identificationoftwodiscreteregionsofdeletionat10q23.33-24.1and10q24.33-25.1/E.M.Wain,T.J.Mitchell,R.Russell-Jonesetal.//GenesChromosomesCancer.―2005―Vol.42(2)― P.184-192.
Wei-yuan,M.SignificanceofDC-LAMPandDC-SIGNexpressioninpsoriasisvulgarislesions/M.Wei-yuan,L.Wen-ting,Z.Chenetal.//ExpMolPathol.―2011―Vol.91(1)― P.461-465.
Weinstock,M.A.MycosisfungoidesintheUnitedStates.Increasingincidenceanddescriptiveepidemiology/M.A.Weinstock,J.W.Horm//JAMA.―1988
―Vol.260(1)― P.42-46.
Willemze,R.Classificationofprimarycutaneouslymphomas.Historicaloverviewandperspectives/R.Willemze,R.C.Beljaards,C.J.Meijeretal.//Dermatology.—1994.—Vol.189,Suppl.2.—P.8–15.
Willemze,R.CutaneousT-celllymphoma:epidemiology,etiology,andclassification/R.Willemze//Leuk.Lymphoma.—2003.—Vol.44,Suppl.3.
—P.S49–54.
Willemze,R.WHO-EORTCclassificationforcutaneouslymphomas/R.Willemze,E.S.Jaffe,G.Burg,etal.//Blood―2005―Vol.105―P.3768-3785.
Willemze,R.Thirtyyearsofprogressincutaneouslymphomaresearch/R.Willemze//GItalDermatolVenereol.―2012―Vol.147(6)―P.515-521.Review. PubMedPMID:23149697.
Wilson,L.D.Age,race,sex,stage,andincidenceofcutaneouslymphoma/L.D.Wilson,G.A.Hinds,J.B.Yu//ClinLymphomaMyelomaLeuk.―2012―Vol.12(5)― P.291-296.
Wollina,U.CutaneousTcelllymphoma:updateontreatment/U.Wollina//IntJDermatol.―2012―Vol.51(9)― P.1019-1036.
Wood,G.S.AnalysisofclonalityincutaneousT-celllymphomaandassociateddiseases/G.S.Wood//Ann. N. Y. Acad.Sci.—2001.—Vol.941.—P.26–30.
Xu,C.SignificanceofTCRgeneclonalrearrangementanalysisindiagnosisofmycosisfungoides/C.Xu,Y.Tang,L.Wangetal.//ZhonghuaZhongLiuZaZhi.―2010―Vol.32(9)― P.685-689.
Yamashita,T.MycosisfungoidesandSézarysyndrome:clinical,histopathologicalandimmunohistochemicalreviewandupdate/T.Yamashita,
L.P.Abbade,M.E.Marquesetal.//AnBrasDermatol.―2012―Vol.87(6)―P.817-828.
Yang,H.ThesignificanceofmultiplexPCR/heteroduplexanalysis-basedTCR-gammagenerearrangementcombinedwithlaser-capturemicrodissectioninthediagnosisofearlymycosisfungoides/H.Yang,C.Xu,Y.Tangetal.//JCutanPathol―2012―Vol.39― P.337-346.
Zackheim, H.S. Mycosisfungoides:thegreatimitator/H.S.Zackheim, T.H.McCalmont//JAmAcadDermatol.―2002―Vol.47(6)―P.914-918.
Zeybek,N.D.Immunohistochemicalanalysisofsmallplaqueparapsoriasis:involvementofdendriticcells/N.D.Zeybek,E.Asan,A.H.Erbiletal.//ActaHistochem.―2008―Vol.110(5)― P.380-387.
Zhang,B.CombineduseofPCR-basedTCRGandTCRBclonalitytestsonparaffin-embeddedskintissueinthedifferentialdiagnosisofmycosisfungoidesandinflammatorydermatoses/B.Zhang,A.H.Beck,J.M.Taubeetal.//JMolDiagn―2010―Vol. 12―P.320-327.
Zhou,Z.Growthdifferentiationfactor-15suppressesmaturationandfunctionofdendriticcellsandinhibitstumor-specificimmuneresponse/Z.Zhou,W.Li,Y.Song,etal.//PLoSOne.―2013―Vol.13― P.8-11.
Zhu,J.Heterogeneityandplasticityof Thelpercells/J.Zhu,W.E.Paul//CellRes.―2009―Vol.20― P.4-12.
ПРИЛОЖЕНИЕ№1
Состависпользовавшегосяфиксирующегораствора
Цинк-формалин
Хлоридцинка 500г
Формалин(40%водныйрастворформальдегида) 3лЛедянаяуксуснаякислота 19млДистиллированнаявода 20л
ПРИЛОЖЕНИЕ2
Схемаобезвоживанияипропитыванияпарафиномбиопсийногоиоперационногоматериала
ПарафинI |
60°С |
18час |
ПарафинII |
60°С |
1час |
ПарафинIII |
60°С |
1час |
АбсолютизированныйизопропанолI 1часАбсолютизированныйизопропанолII 2часАбсолютизированныйизопропанолIII 3часАбсолютизированныйизопропанолIV 4часАбсолютизированныйизопропанолV 5часАбсолютизированныйизопропанол VI 5часАбсолютизированныйизопропанол VII 5часАбсолютизированныйизопропанолVIII 5час
Протоколыпроведенияиммуногистохимическихисследований,реактивыиоборудование
а)Подготовкасрезовткани,фиксированнойвформалине,залитойвпарафин
1.Приготовленныегистологическиесрезытолщиной4мкмнаносилиначистыепредметныестекла.Дляпредотвращенияотслаиванияиповреждениясрезоввовремятепловойилипротеазнойобработкиисериипромываний,поверхностьвымытыхпредметныхстекол обрабатывалиL-полилизиномивысушивали.
АдгезивL-Полилизин(молекулярнаямасса150кДа)1мг/мл дистиллированнойводы.
2.Высушивалипрепаратыпри37°Свтечение18часилипри56°–60°Свтечение30мин.Воизбежаниеповрежденияантигеновсрезыдержалиприповышеннойтемпературенеболееуказанноговремени.
б)Основной(sABC)протоколиммуногистохимическогоокрашиванияпарафиновыхсрезов
Срезыпомещалина30минвтермостатпри56°C.
Парафинудалялиснеостывшихсрезовинкубациейвдвухсменахксилола.
Длительностьоднойинкубации5–10мин.
Срезыгидратироваливабсолютномэтаноле,меняяеготрижды,ипомещалистеклавпроточнуюводу.
Эндогеннуюпероксидазнуюактивностьблокировалив0,6%раствореперекисиводородавметанолевтечение10минприпостоянномвстряхиваниинашейкере.
Срезыополаскиваливпромывномбуферевтечение5мин,используяшейкер.
Взависимостиотисследуемыхантигенов,срезыобрабатываливскороваркеилипроводилипротеазную обработку(всоответствииспротоколами).
Срезыпромываливбуфередваждыпо2мин.
Избытокжидкостиудалялиспредметногостеклавокругсрезовприпомощисалфеткиисрезыобводилиспециальнымгидрофобнымкарандашом.Предметныестеклаукладывалигоризонтальнововлажнойкамереинаносилинакаждыйсрезкаплю10%растворанормальнойсывороткиживотного-доноравторыхантител. Инкубацияпроходила20минприкомнатнойтемпературе.
Избытоксывороткиудалялисосрезовспомощью салфетки.
Наносилирастворпервичногоантителав1%раствореБСАврабочемразведении,котороеопределяливсерияхконтрольныхтитрований.Насрезыотрицательногоконтрольногоисследованияпервичныеантителаненаносили.
Инкубироваливтечениеночипри4°С.
Ополаскивалисрезывпромывномбуферетриждыпо1мин.Излишкибуферасостеколудаляли.
Насрезынаносилирастворвторыхбиотинилированныхантител.Рабочееразведениеантителв1%БСАопределялизаранеевсерияхконтрольныхтитрований.Инкубироваливтечение35минприкомнатнойтемпературе.Приработесмоноклональнымиантителамииспользоваликроличьиантимышиныеантитела.
Ополаскивалисрезывпромывномбуферетриждыпо1мин.Излишкибуферасостеколудаляли.
Насрезнаносиликонъюгатстрептавидина/биотинилированнойпероксидазыхрена(ПХ-sABC).Инкубировали30мин.SABC-комплексготовилинепозднеечем за30миндоиспользованияииспользовалинеболее3суток.
Промывалисрезывбуферетриждыпо3мин.
Срезыинкубироваливсвежеприготовленномбуферномрастворе3,3'-диаминобензидинтетрахлорида(ДАБ)/H2O2.Развитиеокраскиследиливмикроскоп:если5-минутнаяинкубациянедаваланеобходимойинтенсивностиокраски, продолжалиинкубациюсДАБот 1до5мин.
Промывалисрезыводой.
Окрашивалиядрагематоксилином(слабо),принеобходимостидифференцировалиокраскувсолянокисломспирте,промывалипроточнойводойдополучениясинейокраскиядер.
Препаратыобезвоживаливспиртахиксилолеизаключалисрезывканадскийбальзам.
в)Обработкапарафиновыхсрезовткани,фиксированнойформалином,вкастрюле-скороварке
Скороварку,наполненнуюнадветретиееобъемасоответствующимбуфером,доводилидокипенияналабораторнойэлектроплитке,незакрываякрышкуназащелку.
Предметныестекласдепарафинированнымисрезамипомещаливдержательизхимическиинертногоматериалаипогружалидержательвкипящийбуфер.Припоявленииструипараизклапанасустановленнымнизкимуровнемдавлениязасекаливремяначалаобработки.
Поистечении4минскороваркубыстропомещаливхолоднуюводуипослевыравниваниядавленияизвлекалистеклаизбуфера.
Стеклапромываливводе(1–3мин)ипомещаливпромывнойбуфер,следязатем,чтобысрезыневысыхали.
Выполнялиосновнойпротокол ИГХ окрашиванияспункта7.
Дляреставрациибольшинстваантигеновбылоптимальным0,01Мцитратныйбуфер,pH 6,0.Внекоторыхслучаяхлучшиерезультатыдавалбуферсвысокимизначениями(0,01МЭДТАpH9,0).
г)Обработкапротеолитическимиферментамипарафиновыхсрезовткани,фиксированнойформалином
Срезыдепарафинировали;одновременноприготовлялинагретыедо37Срастворыферментов.
Прогревалисрезывдистиллированнойводепри37С втечение10мин.
Инкубировалисрезывраствореферментавтечение5–20минпри37Силиприкомнатнойтемпературе.Оптимальныеусловияреакцииподбираливпредварительнойсерииопытов.
Останавливалипротеолиз,погружаястекласосрезамивпроточнуюводуна10мин.
СледовалиосновномупротоколуИГХокрашиваниясп.7.
Трипсин:extemporеприготовляли0,1%(в/о)растворCaCl2вводеилибуфере0,05Mтрис-HCl,pH7,8ипрогревалиегодо37°Свтермостате.Донанесениянасрезыдержалираствортрипсинапри37°С.
Проназа:0,05%(в/о)рабочийрастворпроназывбуфере0,05Mтрис-HCl,0,1MNaCl,pH7,2(TBS)при37°С.