2 курс / Гистология / Учебный_практикум_по_цитологии_и_гистологии_сельскохозяйственных

3

Содержание

Лабораторная работа № 1. Методы микроскопической техники. Устройство микроскопа……………………………………4

Лабораторная работа № 2. Многообразие и строение клеток животных………………………………………………………………..8

Лабораторная работа № 3. Строение и функции мембранных органоидов……………………………………………………………..11

Лабораторная работа № 4. Строение и функции ядра и немембранных органоидов…………………………………………15

Лабораторная работа № 5. Виды деления клеток……………….....20

Лабораторная работа № 6. Строение половых клеток. Гаметогенез…………………………………………………………….23

Лабораторная работа № 7. Дробление яйцеклеток и ранние этапы развития организма…………………………………………..27

Лабораторная работа № 8.Строение и функции эпителиальной ткани………………………………………………….29

Лабораторная работа № 9. Строение и функции желез…………...33

Лабораторная работа № 10. Мезенхима и кровь…………………38

Лабораторная работа № 11. Строение и функции волокнистой соединительной ткани……………………………….41

Лабораторная работа № 12. Строение хрящевой и костной ткани……………………………………………………………………..43

Лабораторная работа № 13. Строение мышечной ткани………46

Лабораторная работа № 14. Строение нервной ткани………....49 СПИСОК РЕКОМЕНДУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ….………………52

4

Лабораторная работа № 1 Методы микроскопической техники.

Устройство микроскопа

Цель: Познакомиться с различными методами микроскопирования, со строением микроскопа и сформировать навыки практической работы с увеличительным прибором.

Материалы и оборудование: микроскоп «Биолам», чашки Петри, предметные и покровные стекла, стерильный стеклянный шпатель, бумажные салфетки, вата, пипетки, пинцеты, ножницы, стаканчики с водой, постоянные микропрепараты животных и растительных клеток.

Задание 1. Познакомьтесь с основными методами микроскопической техники.

Световая микроскопия. В световом микроскопе для освещения объекта используются лучи видимого спектра. Современные световые микроскопы позволяют получать разрешение порядка 0,2 мкм.

Разновидности световой микроскопии:

Фазово-контрастная микроскопия – это метод изучения клеток в световом микроскопе, снабженном фазово-контрастным устройством. Благодаря смещению фаз световых волн в микроскопе такой конструкции повышается контрастность структур исследуемого объекта, что позволяет изучать живые клетки.

Интерференционная микроскопия. Разновидностями фазово-

контрастного микроскопа являются интерференционный микроскоп. В интерференционном микроскопе пучок света от осветителя раз-

деляется на два потока: один проходит через объект и изменяет по фазе колебания, второй идет, минуя объект. В призмах объектива оба пучка соединяются и интерферируют между собой. В результате строится изображение, в котором участки микрообъекта разной толщины и плотности различаются по степени контрастности.

Поляризационная микроскопия. В поляризационном микроско-

пе установлены два поляризационных фильтра — первый (поляризатор) между пучком света, и объектом, а второй (анализатор) между линзой объектива и глазом. Через первый фильтр свет проходит только в одном направлении, второй фильтр имеет главную ось, которая располагается перпендикулярно первому фильтру, и он не пропускает свет. Получается эффект темного поля.

5

Флюоресцентная (люминесцентная) микроскопия. Явления флюоресценции заключаются в том, что атомы и молекулы ряда веществ, поглощая коротковолновые лучи, переходят в возбужденное состояние. Обратный переход из возбужденного состояния в нормальное, происходит с испусканием света, но с большей длиной волны. флюоресцентном микроскопе в качестве источников света для возбуждения флюоресценции применяют ртутные или ксеноновые лампы. Первичной флюоресценцией обладают серотонин, катехоламин (адреналин, норадрсналин), содержащиеся в нервных, тучных и других клетках, после фиксации тканей в парах формальдегида при 60—80° С (метод Фалька). Вторичная флюоресценция возникает при обработке препаратов специальными красителями — флюорохромам.

Электронная микроскопия. В электронном микроскопе используется поток электронов с более короткими, чем в световом микроскопе, длинами волн. Разрешающая способность электронного микроскопа в сотни и тысячи раз превышает обычные оптические приборы. С помощью электронных микроскопов получены многочисленные данные об ультраструктуре клеток.

Цитоспектрофотометрия − метод изучения химического состава клеток, основанный на избирательном поглощении веществом, входящим в состав клетки, света с определенной длиной волны.

Радиоавтография − метод, основанный на изучении распределения в клетках и тканях веществ, в состав которых искусственно введены радиоактивные изотопы. В исследуемый объект (в организм животного или в среду клеток) вводится соединение, меченое радиоактивным атомом и далее выявляются места его включения путем фотографической регистрации излучения. Метод основан на способности включенных в клетки изотопов восстанавливать бромистое серебро фотоэмульсии, которой покрывают срезы ткани или клетки.

– метод микроскопического исследования тканей, обеспечивающий наиболее специфическое выявление в них искомых веществ и основанный на обработке срезов маркированными специфическими антителами к выявляемому веществу, которое в данной ситуации служит антигеном.

Метод культуры клеток, тканей заключается в выращивании клеток и тканей вне организма в искусственных питательных средах (в

условиях in vitro).

Микроскопическая хирургия клетки – совокупность методиче-

ских приемов, осуществляемых с помощью специального прибора –

6

микроманипулятора,который позволяет производить различного рода тончайшие операции на клетке.

Цейтраферная, или замедленная, микрокиноили видеосъем-

ка – изучение живых клеток. Такой способ позволяет проследить за медленно протекающими изменениями клеток.

Метод фракционирования (дифференциального центрифугирования) клеток. Метод основан на разных скоростях осаждения этих компонентов при вращении гомогенатов клеток в ультрацентрифугах.

Конфокальная микроскопия – это современный метод, использующий в качестве осветителя лазерный луч, который последовательно сканирует всю толщину препарата. Информация о плотности объекта по каждой линии сканирования передается в компьютер, где специальная программа осуществляет трехмерную реконструкцию объекта.

Задание 2. Рассмотрите основные части микроскопа «Биолам»: механическую, оптическую и осветительную. Изучите правила работы с микроскопом.

Рис. 1. Устройство световых микроскопов: А - МИКМЕД-1; Б - БИОЛАМ. 1 - окуляр, 2 - тубус, 3 - тубусодержатель, 4 - винт грубой наводки, 5 - микрометренный винт, 6 - подставка, 7 - зеркало, 8 - конденсор, ирисовая диафрагма и светофильтр, 9 - предметный столик, 10

- револьверное устройство, 11 - объектив, 12 - корпус коллекторной линзы, 13 - патрон с лампой, 14 - источник электропитания.

Правила работы с микроскопом

1.Установите микроскоп окуляром к себе.

2.Поставьте в рабочее положение объектив малого увеличения. Для этого поворачивайте револьвер до тех пор, пока нужный объектив

7

не займет срединное положение по отношению к тубусу и предметному столику (встанет над отверстием столика). Когда какой-либо объектив занимает срединное положение, в револьвере срабатывает уст- ройство-защелка, при этом слышится легкий щелчок и револьвер фиксируется. Изучение любого объекта начинается с малого увеличения.

3.Поднимите с помощью макрометрического винта объектив на высоту 0,5 см.

4.Положите на предметный столик готовый микропрепарат покровным стеклом вверх.

5.Смотря на тубус сбоку, опустите его с помощью макрометрического винта так, чтобы объектив находился на расстоянии около 2 мм от препарата.

6.Глядя в окуляр, медленно поднимайте тубус с помощью макрометрического винта до тех пор, пока в поле зрения не появится изображение объекта.

7.Прежде чем перейти к большому увеличению, необходимо отцентрировать препарат. Для этого, глядя в окуляр, передвигайте препарат с помощью винтов-препаратоводителей или руками, пока объект не займет нужное положение. Если объект не будет центрирован, то при большом увеличении он может оказаться вне поля зрения.

8.Вращая револьвер, переведите в рабочее положение объектив большого увеличения.

9.Опустите тубус (смотря на него сбоку) почти до соприкосновения с препаратом (фокусное расстояние для объектива большого увеличения равно примерно 1 мм).

10.Затем, глядя в окуляр, медленно поднимайте тубус, пока в поле зрения не появится изображение. Не торопитесь, поскольку фокусное расстояние всего 1 мм и его легко пройти. Для тонкой фокусировки используйте микрометрический винт.

Задание 3. Изготовьте временный препарат и изучите клетки плоского эпителия полости рта человека. На препарате видны плавающие в жидкости отдельные крупные плоские клетки, содержащие ядра. Большая часть клеток мертвые, они имеют сильно структурированное ядро. Так как поверхностные клетки покровного эпителия являются высокодифференцированными клетками, в которых затухают синтетические процессы, в ядрах этих клеток отсутствуют ядрышки или они очень мелкие.

8

Если взять соскоб этих клеток у женщины, то в ядрах многих клеток можно увидеть так называемые тельца Барра – это не что иное, как половая Х-хромосома в интерфазном ядре (половой хроматин) – плотный участок хроматина, прилежащий непосредственно к периферии ядра. В цитоплазме живых клеток можно также видеть множество мелких гранул – митохондрий и мелких пузырьков.

Рис. 2. Клетки плоского эпителия полости рта человека:1 – ядра клеток; 2 – цитоплазма клеток; 3 – половой хроматин; 4 – митохондрия

Контрольные вопросы

1.Какие существуют современные методы микроскопирования?

2.Из каких частей состоит световой микроскоп?

3.В чем различия между окуляром и объективом?

4.Какие объективы используются в микроскопе «Биолам»?

5.С какого увеличения объектива микроскопа начинается изучение любого объекта?

6.Чем отличается временный препарат от постоянного?

Лабораторная работа № 2 Многообразие и строение клеток животных

Цель: Познакомиться с общим планом строения животной клетки и различными формами клеток в связи с выполняемой функцией.

Материалы и оборудование: микроскоп, микропрепараты: зеленая железа рака; эпителий кишечника беззубки; нервные клетки из мозжечка собаки; мышечные клетки аскариды; эритроциты крови человека; эритроциты крови лягушки.

10

— ядрышко; 10 — пиноцитозные пузырьки; 11 — фагосомные вакуоли; 12 — секреторные пузырьки

Задание 3. Рассмотрите под микроскопом при малом, затем при большом увеличении микропрепарат зеленой железы рака. На препарате можно увидеть клетки, находящиеся на разных стадиях секреторной деятельности. Здесь видны кубические клетки с гладкой поверхностью. Затем имеются клетки с выпячиваниями различной величины, отделившиеся капли секрета и клетки, выделившие секрет (с вогнутой поверхностью и меньшей высотой). Зарисуйте, отметьте кубический эпителий в концевых отделах железы.

Рис. 3. Железистый эпителий антеннальной железы речного рака 1 − несекретирующая клетка; 2 − начальная стадия секреции

клетки; 3, 4, 5 − последовательные стадии выделения секрета; 6 −клетки, выделившие секрет; 7 − капли секрета в просвете железы.

Задание 4. Рассмотрите под микроскопом микропрепарат мерцательного эпителия мантии беззубки. Под эпителием располагается соединительная ткань. Соединительная ткань покрыта однослойным мерцательным эпителием. На границе между эпителием и соединительной тканью, как всегда, располагается базальная мембрана. Зарисуйте эпителий, отметьте составные части: реснички, базальную мембрану, ядра.

Рис. 4. Реснитчатый эпителий мантии беззубки: 1 – реснички; 2 – базальная мембрана; 3 – яд-

ра клеток