2 курс / Биохимия / Лабораторные_и_специальные_методы_исследования_в_судебной_медицине

вызывая при этом разрушения панцирей диатомовых водорос­ лей. Недостатком этого метода является то, что он требует значительной затраты времени (от 3 до 10 дней); кроме того, несмотря на известную стойкость панцирей диатомовых во­ дорослей к воздействию кислот, применение последних может вызывать разрушение отдельных тонких панцирей мелких экземпляров диатомовых. Для более быстрого разрушения материала можно использовать метод озоления, по которому измельченные кусочки органа помещают в тиглях или фар­ форовых чашках в муфельную печь при температуре 600 °С до появления на стенках белого пепла. К последнему прибав­ ляют (Н. И. Асафьева, 1954) разведенную соляную (1 мл на 59 мл дистиллированной воды) или азотную кислоту (по Tabbara, Derobert, 1963) и взвесь переливают в центрифужные пробирки. Тигли или фарфоровые чашки смывают дистилли­ рованной водой, которую также сливают в центрифужные пробирки. Затем кислоту тщательно отмывают дистиллиро­ ванной водой с последующим центрифугированием, а осадок исследуют. Метод озоления, как и предыдущий, не является щадящим по отношению к панцирям, так как прокаливание нередко приводит к разрушению части панцирей диатомовых, однако преимущество его состоит в том, что в сравнительно короткий промежуток времени (4—5 ч) удается разрушить объект значительной величины (100—150 г), например целую почку.

Наиболее щадящим по отношению к панцирям диатомо­ вых является пергидрольный способ разрушения. По этому методу часть органа весом 30—100 г после тщательного из­ мельчения помещают в колбу Кьельдаля емкостью 1000 мл. В течение 30—60 мин по частям осторожно добавляют 100 мл пергидроля. После каждого добавления содержимое колбы взбалтывают в течение 2—3 мин. После окончания воздейст­ вия пергидроля добавляют концентрированную серную кис­ лоту, содержимое перемешивают и кипятят в течение несколь­ ких часов в вытяжном шкафу. В конце разрушения добав­ ляют азотную кислоту и на последнем этапе — небольшое количество пергидроля (3—5 мл) для просветления. Содер­ жимое колбы остужают, многократно разбавляют дистилли­ рованной водой и центрифугируют в течение 5 мин при 500— 1000 об/мин. Из осадка приготавливают препараты.

При исследовании извлеченных из воды трупов с резко выраженными гнилостными изменениями исследованию на Диатомовый планктон следует подвергать костный мозг длин­ ных трубчатых костей (плечевых и бедренных). Для получе­ ния достаточного количества костного мозга (около 200 г) необходимо взять обе плечевые и бедренные кости. Для изъ­ ятия костного мозга трубчатые кости вычленяют в суставах, очищают от мягких тканей, промывают дистиллированной во-

349

дой и высушивают. Затем, после удаления надкостницы, в середине диафиза производят циркулярный распил пример­ но на половину толщины компактного слоя, после чего диафиз расшатывают и ломают. Из костномозгового канала каждой половины кюреткой полностью извлекают костный мозг.

В случаях эксгумации, когда наступило гнилостное рас­ плавление костного мозга, надлежит промыть костный канал дистиллированной водой с добавлением серной или азотной кислот из расчета 10 мл кислоты на 100 мл воды. Промыв­ ные воды по сравнению с костным мозгом быстрее подверга­ ются разрушению и не вызывают затруднений при последую­ щем микроскопическом исследовании препаратов, так как не содержат костных балок и их фрагментов.

После разрушения органов и тканей из 2—3 мл центрифу­ гированного осадка изготавливают препараты для микроско­ пического исследования. Для лучшей сохранности препаратов, возможности систематизирования диатомовых по семействам! и родам, а также последующего микрофотографирования следует использовать постоянные препараты. Для изготовле­ ния постоянных препаратов на покровные стекла размером 18X18, толщиной 0,018—0,020 мм, тщательно вымытые и обезжиренные, наносят каплю жидкости с осадком, которую осторожно распределяют тонким слоем с помощью препа­ ровальной иглы и подсушивают на электрической плитке. На чистые предметные стекла помещают небольшое количество какой-либо среды: гиракс (показатель преломления 1,80), плевракс (показатель преломления 1,90), стиракс (показа­ тель преломления 1,58), и осторожно подогревают до рас­ плавления среды. После этого теплые покровные стекла на­ кладывают на каплю среды подсушенным слоем материала книзу. В качестве среды можно применять также раствор полистирола в ксилоле (33 г полистирола+ 67 г ксилола),, показатель преломления которого 2,03. Для предупреждения: образования кристаллов к раствору полистирола добавляют 1 мл пластификатора дибутилфталата. Приготовленные та­ ким образом постоянные препараты исследуют под микроско­ пом с использованием иммерсионного объектива, дающего возможность детально рассмотреть структуру панциря диато­ мовых и произвести их определение. Обнаруженные экземп­ ляры диатомовых необходимо измерить при помощи окулярмикрометра. В связи с тем что обнаружение панцирей диато­ мовых водорослей при обычной микроскопии представляет известные трудности, возможно использование фазово-конт­ растного метода. Для документации исследования желатель­ но производить микрофотографирование под микроскопом с введением в осветительную систему фазово-контрастного устройства.

350

Лабораторное исследование образца воды и внутренних jpraHOB трупов на наличие диатомового планктона оформ­ ляется актом исследования, как и других вещественных до­ казательств, который состоит из трех частей: введения, опи­ сательной части и выводов. Во введении указывают дату исследования, фамилию, имя, отчество, пол и возраст умер­ шего, номер акта вскрытия, дату вскрытия, краткие обстоя­ тельства утопления (водоем, из которого извлечен труп, дата утопления, время пребывания в воде и др.). В описательной части подробно описывают объекты исследования (когда и в какой упаковке поступили, какие органы, в каком состоянии, масса). При описании образца воды отмечают ее количество, прозрачность, запах и цвет, здесь же излагают метод иссле­ дования и подробно описывают обнаруженные панцири ди­ атомовых водорослей как в образце воды, так и в каждом из исследованных органов, включая и легочную ткань, при­ чем указывают их количество, размеры, проводят системати­ зирование по семействам и родам. В выводах дают перечень органов, в которых обнаружены панцири диатомовых, указы­ вают количество панцирей в каждом органе, их размеры, (Семейство и род, приводят состав диатомового планктона водоема, специфичность для водоема, откуда извлечен труп, диатомовых, обнаруженных в органах. К акту исследования прилагают микрофотографии диатомовых панцирей, обнару­ женных в органах и в образце воды.

Оценка результатов исследования на диатомовый планк­ тон. Судебно-медицинский эксперт, оценивая результаты ла­ бораторного исследования органов на диатомовый планктон, должен принимать во внимание тот факт, что доказательст­ вом утопления является только обнаружение диатомовых во -внутренних органах (кроме легких) и в крови. Если же пан­ цири диатомовых обнаружены только в легких, то в этих случаях возможны как утопление, так и смерть в воде, а так­ же посмертное попадание тела в воду. Однако отсутствие диатомовых водорослей в крови и внутренних органах трупа, извлеченного из воды, не дает основания исключить смерть от утопления. Диатомовые водоросли могут не проникнуть во внутренние органы в тех случаях утопления, когда дея­ тельность сердца прекращается в самом начале утопления или когда смерть наступает в воде (например, рефлекторная остановка сердца), в случаях облитерации плевральных по­ лостей утонувшего, а также при отсутствии диатомовых во­ дорослей в водоеме или при утоплении в период диатомового минимума.

Решающее значение для диагностики утопления имеет об­ наружение значительного количества (десятков и сотен) пан­ цирей диатомовых водорослей во внутренних органах (пе­ чень, почка, мышца сердца, головной мозг, мозг длин-

351

ных трубчатых костей) и в крови. Из легких в ток крови в основном проникают небольшие экземпляры диатомовых во­ дорослей (от 5 до 50 мкм) и их фрагменты.

Комплекс диатомовых, обнаруженный в крови и внутрен­ них органах, как правило, соответствует составу диатомового планктона в образце воды того водоема, где произошло утоп­ ление. Если же диатомовые, обнаруженные в образце воды, взятом на месте обнаружения трупа, не соответствуют тако­ вым в органах, нельзя исключить в этом случае утопление человека в другом водоеме.

Сопоставление результатов исследования на диатомовый планктон с другими данными, полученными при вскрытии трупа, гистологическом исследовании внутренних органов и т. д., позволяет в каждом конкретном случае квалифици­ рованно и наиболее полно обосновать диагноз утопления.

Необходимые инструменты и оснащение секционного зала для забо­ ра материала

Оснащение и оборудование судебно-химической лаборатории для про­ ведения исследований на диатомовый планктон

16. Таблицы микрофотограмм наиболее часто встречающихся видов диатомовых водорослей применительно к конкретным водоемам.

352

КРИСТАЛЛООПТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ДИАГНОСТИКЕ УТОПЛЕНИЯ

Как известно, в случаях утопления аспирируются с жид­ костью и быстро проникают в кровь и внутренние органы не только диатомовые водоросли, но и кварцсодержащие мине­ ральные частицы. В некоторых водоемах (реки, пруды, водо­ хранилища) отмечается высокое содержание взвешенных ве­ ществ— до 800 мг/л, что обусловлено особенностями грунта берегов и дна водоема, а также скоростью течения воды. При экспертизе трупов, извлеченных из воды, некоторые авторы (Н. И. Асафьева, И. В. Скопин, 1955; Н. И. Асафьева, 1958, 1961;; Н. П. Марченко, 1968) обнаруживали во внутренних органах значительное количество элементов «псевдопланкто­ на» (песчинок), однако примененный ими метод исследования давал возможность лишь констатировать наличие минераль­ ных частиц и не позволял установить механизм проникнове­ ния их в органы и дифференцировать кварцсодержащие эле­ менты от частиц иного происхождения. В связи с этим Б. С. Касаткин и И. К- Клепке (1966), Б. С. Касаткин (1969) предложили производить кристаллооптическое исследование озоленных препаратов, приготовленных из органов трупов, извлеченных из воды, с целью установления прижизненного попадания человека в воду.

При кристаллооптическом исследовании озоленных срезов внутренних органов выявляются кварцсодержащие минераль­ ные частицы, имеющие характерную гистотопографическую локализацию и определенные петрографические свойства. Кварцсодержащие включения имеют величину от 2 до 15 мкм в легких и от 2 до 10 мкм в других органах, неправильную угловатую форму, ребристые края, заостренные углы. Такие частицы при утоплении, по данным указанных авторов, обна­ руживаются в количестве от 25 до 100 в 10 полях зрения сподограммы и располагаются: а) в легких (альвеолы, аль­ веолярные ходы, бронхиолы, сосуды среднего и мелкого ка­ либра); б) в почках (клубочки, единичные в мочевых каналь­ цах); в) в миокарде (мелкие сосуды и большей частью около сосудов); г) в скелетных мышцах (мелкие сосуды, между во­ локнами по ходу сосудов); д) в сосудистых сплетениях го­ ловного мозга.

В сподограммах органов, взятых из трупов людей, при жизни длительно работавших в условиях большой запылен­ ности, но погибших не в воде, могут встречаться единичные (до 2—3 в 10 полях зрения) мелкие (1—3 мкм) кварцсодер­ жащие частицы (Б. С. Касаткин, 1965). Эти частицы распо­

нальцах и в межуточной ткани. В окрашенных препаратах, приготовленных (без озоления) в таких случаях при микро­ скопическом исследовании в обычном и поляризованном све­ те вокруг такого рода минеральных включений, авторы, как правило, выявляли элементы витальной прижизненной ре­ акции.

В случаях асфиксии, прерываемой различными фактора­ ми в процессе утопления, и при попадании тела в воду в тер­ минальном состоянии гистотопографические и петрографиче­ ские особенности кварцсодержащих частиц, аспирируемых с водой, аналогичны тем, которые наблюдаются при утопле­ нии, но зависят от числа дыхательных движений и сердечных сокращений, в процессе умирания в воде наблюдаются су­ щественные различия в количестве их в легких и других ор­ ганах. При посмертном погружении трупов в воду в сподограммах легочной ткани кварцсодержащие частицы размером 2—8 мкм авторы выявляли в мелких бронхиолах и в отдель­ ных группах альвеол.

Забор материала и методы исследования. Б. С. Касаткин и И. К. Клепче (1966) предлагают для кристаллооптических исследований вырезать кусочки внутренних органов разме­ ром 2X1,5 см. Поверхность органов, из которых берут кусоч­ ки, инструменты и посуду, предварительно неоднократно обмывают дистиллированной водой. Затем эти кусочки ткани органов фиксируют в 10—12% растворе формалина, приго­ товленном на дистиллированной воде, обезвоживают в спир­ тах и заливают в парафин (скелетные мышцы — в целло­ идин). Изготовленные срезы толщиной 12—15 мкм сначала помещают в дистиллированную воду, а потом на чистые пред­ метные стекла. Срезы должны быть хорошо расправлены и плотно прилегать к предметным стеклам. Приготовленные таким образом препараты на фарфоровой пластинке помеща­ ют в муфельную печь, накрывают колпаком из жаростойкого стекла и сжигают (табл. 17). Оголенные срезы накрывают покровными стеклами, которые фиксируют замазкой Движкова, воском или полистиролом. Во избежание деформации сподограмм под покровные стекла рекомендуется положить полгски из плотной черной бумаги.

Нагрев муфельной печи производится постепенно (за каж­ дые 10 мин на 80—100 °С) и регулируется реостатом. Тем­ пературу измеряют милливольтметром с соответствующей термопарой (Б. С. Касаткин, И. К. Клепче, 1966).

Наряду с получением сподограмм следует изготовить обычные гистологические окрашенные препараты. Сподограммы и окрашенные препараты рекомендуется рассматривать в обычном и поляризованном свете.

При изучении сподограмм в проходящем свете Б. С. Ка­ саткин и И. К. Клепче различали основные структурные

354

Г л а в а XIX

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ ВРЕМЕНИ НАСТУПЛЕНИЯ СМЕРТИ

Значительную часть судебно-медицинских исследований трупов лиц, умерших насильственной смертью, производят в течение первых суток, поэтому наиболее разработанными являются методы определения давности наступления смерти в ранние ее сроки. Давность наступления смерти определяют по таким трупным явлениям, как охлаждение, трупное око­ ченение, трупные пятна и др. Оценка трупных явлений в основ­ ном носит субъективный характер. Поэтому не случайно ис­ следователи в последние годы направляют свои усилия на разработку методов, позволяющих объективно выявлять ди­ намику и закономерности в течение посмертных процессов в различных жидкостях, органах и тканях трупов и использо­ вать это для определения времени наступления смерти. Не­ которые из этих методов приводятся в данной главе.

Измерение температуры тела трупа. Наступление смерти, как известно, сопровождается нарушением в организме про­ цессов теплообразования и теплоотдачи. Это в свою очередь приводит к снижению температуры тела до уровня темпера­ туры окружающей среды. Принято считать, что температура тела человека в среднем является постоянной величиной и в норме колеблется в пределах 36,6—36,9 СС. Скорость охлаж­ дения тела зависит от многих факторов, в том числе от тем­ пературы и влажности окружающего воздуха, объема трупа, наличия и качества одежды, толщины подкожного жирового слоя, причины смерти и т. д.

В табл. 18 приведены сводные данные литературы по опре­ делению на ощупь охлаждения трупа при температуре воз­ духа в помещении от 11 до 25 °С.

Вследствие неравномерности охлаждения отдельных ча­ стей трупа многие исследователи рекомендуют измерять тем­ пературу в подмышечных впадинах, прямой кишке, печени, грудной полости и других частях тела. Термометрия в подмы­ шечных впадинах, прямой кишке и полости рта может быть осуществлена с помощью медицинского (максимального) тер­ мометра. Однако в экспертной практике наиболее широкое применение должны приобрести более точные и чувствитель-

357

ные электротермометры различных моделей. Так, например, в СССР медицинская промышленность производит электро­ термометры типа ТПЭМ-1, укомплектованные четырьмя ти­ пами датчиков: кожным, ректальным, подмышечным и стерж­ невым. По специальным заказам электротермометр может быть снабжен и другими датчиками (сердечный, желудочный и др.)- Кроме того, некоторые авторы (Н. П. Марченко, В. И. Кононенко, 1964) усовершенствовали отдельные узлы электротермометров в соответствии с поставленными зада­ чами.

С целью определения времени наступления смерти ряд исследователей рекомендуют измерять температуру в пря-

Т а б л и ц а 19

Влияние различных температур окружающего воздуха на скорость изменения ректальной температуры трупов (в градусах/ч)

(Г. А. Ботезату, 1973)

358