Диагностика.

Значительный полиморфизм клинических проявлений при токсоплазмозе и разнообразный характер течения болезни практически исключают возможность постановки диагноза только на основании клинической картины в связи с чем возрастает роль лабораторных исследований, включающих паразитологические и иммунологические методы.

Паразитологические методы исследования выявляют возбудителя при непосредственной микроскопии материала, в гистологических срезах внутренних органов или путем выделения возбудителя на восприимчивых лабораторных животных с помощью биопроб. С этой целью используют кровь, ликвор, плевральную жидкость, пунктат лимфатических узлов и костного мозга, удаленные миндалины, биопсированные лимфоузлы, печень, мышцы, соскоб из полости матки, органы абортированного плода и мертворожденных, а в летальных случаях - головной мозг, печень, селезенку, лимфоузлы и другие органы. Для прямого микроскопирования из исследуемого материала готовят мазки-отпечатки на предметных стеклах, высушивают, фиксируют метиловым спиртом 3-5 мин, или, смесью Никифорова, состоящей из равных частей этилового спирта и эфира - 20 мин. Затем препараты окрашивают по Романовскому и микроскопируют с иммерсионной системой (5х90). Обнаружение в препаратах токсоплазм (эндозоитов, ооцист или цист) при определенной клинической картине подтверждает диагноз. Метод прямой микроскопии несложен и доступен, но не всегда результативен.

Выделение токсоплазм методом биопробы. Сущность метода состоит в заражений восприимчивых животных взвесью исследуемого материала. При этом в организме животных происходит количественное накопление возбудителя, что облегчает его выявление. Из лабораторных животных наиболее пригодны для биопроб белые мыши, но можно использовать и морских свинок, кроликов, хомяков.

Метод биопроб может применяться на различных этапах инфекционного процесса, но наиболее эффективен при острой форме заболевания. Для постановки биопроб используют те же субстраты, что и для прямой микроскопии. Из материала готовят суспензию с обязательным добавлением антибиотиков (1 000 ед. пенициллина и 0,05 гр. стрептомицина на 1 мл взвеси) и по 0,5-1 мл внутрибрюшинно и подкожно вводят мышам. За животными устанавливают наблюдение. В положительных случаях у мышей происходит генерализация процесса, развивается заболевание, заканчивающееся гибелью. У таких мышей в брюшной полости образуется экссудат, содержащий токсоплазмы. Токсоплазмы легко обнаружить в мазках-отпечатках из печени, селезенки, легких. У мышей, погибших через 2 недели и позднее берут для исследования головной мозг на предмет выявления цист токсоплазм.

Паразитологические методы диагностики не пользуются широкой популярностью из-за большой трудоемкости, необходимости соблюдения режимных условий при работе с живым возбудителем. Прямая микроскопия и биопробы не имеют абсолютно доказательного значения, так как их отрицательный результат не исключает токсоплазмозной инфекции.

Иммунологические исследования. В подавляющем большинстве случаев при диагностике токсоплазмоза ориентируются на данные серологических исследований (реакция с красителем Сэбина- Фельдмана -РК, реакция связывания комплемента - РСК, реакция непрямой гемагглютинации - РНГА, реакция агглютинации - РА, реакция непрямой иммунофлюоресценции - РНИФ, реакция иммуноферментного анализа -ИФА), обнаруживающих наличие специфических антител в сыворотке крови обследуемого человека.

Для серологических реакций у обследуемых лиц забирают натощак из вены 5-10 мл крови в сухую стерильную пробирку без консервантов и антикоагулянтов. Пробирку с кровью ставят на 1-2 часа в термостат при 37°С а затем помещают в холодильник для ретракции сгустка. Отстоявшуюся сыворотку отсасывают в стерильную сухую пробирку и хранят в холодильнике при +4-6°С до начала исследования. При необходимости длительного хранения сыворотку лучше сохранять при -20-70°С. В реакциях используют не гемолизированные и не проросшие сыворотки.

РК является золотым стандартом серологии при токсоплазмозе. Авторы впервые использовали в этом тесте неспособность токсоплазм окрашиваться метиленовой синькой в присутствии токсоплазменных антител. Антитела, выявляемые РК, обычно появляются уже через несколько дней после заражения, обычно в конце первой недели, достигают высоких титров в последующие несколько недель и сохраняются много лет, в более низких титрах пожизненно. Несмотря на неоспоримые достоинства, РК не лишена весьма существенных недостатков, которые ограничивают ее применение: она довольно сложна, трудоемка и требует живых токсоплазм, что возможно не во всех лабораториях.

Такие методы как РСК, РА, РНГА также могут бить использованы для серологической диагностики токсоплазмоза. РНИФ и ИФА -популярные методы серодиагностики во всем мире, так как комбинируют тщательность и точность методов с легкостью выполнения. РНИФ близка по своим достоинствам к РК. В последние годы РНИФ завоевала широкую известность и зарекомендовала себя как высокочувствительный тест, легко воспроизводимый в любой лаборатории, располагающей люминисцентным микроскопом. Антитела, определяемые РНИФ, появляются к концу первой недели после заражения и сохраняются длительное время. Сущность метода состоит в выявлений специфических антител в исследуемой сыворотке с помощью токсоплазменного антигена и маркированной антисыворотки.

Иммуноферментный анализ. В последние годы широко вошла в практику реакция иммуноферментного анализа (ИФА). В трех европейских лабораториях (Франция, Нидерланды, Швеция) было проведено сравнительное изучение диагностической ценности всех тестов, используемых в серологической диагностике токсоплазмоза. Получена хорошая корреляция результатов. Чувствительность тестов представлена в порядке: ИФА>РК>РНГА>РНИФ>РСК. Последующие исследования показали высокую чувствительность и воспроизводимость ИФА.

Полимеразная цепная реакция. В последние годы для подтверждения диагноза токсоплазмоза используют ПЦР (полимеразноцепная реакция). Наибольшее значение этот тест имеет у пациентов с иммуносупрессией, т.е. у больных при пересадке различных органов, у лиц с ВИЧ-инфекцией, онкологическими и вирусными заболеваниями. Известно, что у больных СПИДом часто развивается токсоплазмозный энцефалит, при котором серологические тесты дают низкие титры антител. У таких больных обследование с помощью ПЦР спинномозговой жидкости и крови позволяет выявить токсоплазмозную инфекцию. Имеются данные об использовании ПЦР в глазной практике. Обычно при токсоплазмозных увеитах и хориоретинитах титры токсоплазмозных антител очень низки. Обследование методом ПЦР глазной жидкости помогало правильно поставить диагноз. Получены данные об успешной пренатальной диагностике конгенитального токсоплазмоза с помощью ПЦР при исследовании амниотической жидкости.