2. Методы микробиологической диагностики гриппа.

СХЕМА ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ГРИППА

Материал	Метод исследования	Результат
Мазки— отпечатки нижней но­совой рако­вины Смыв из носогло-тки Парные сыворотки крови	МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ Риноцитоскопия мазков, окра­шенных смесью основного фукси­на и метиленового синего Иммунофлюоресцентное исследование, ИФА ВИРУСОЛОГИЧЕСКИЙ Заражение куриных эмбрионов Постановка РГА Постановка РСК (тип вируса), РТГА (подтип) с диагностическими противогриппоз­ными сыворотками СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ РТГА, РСК, ИФА, РН	Включения — красного цвета в цитоплазме клеток Зеленое свечение в цито­плазме клеток Накопление вируса в хорионаллантоисной поло­сти Выявление вируса Положительная с одной из сывороток Нарастание титра анти­тел в 4 раза и более раз

2. Принципы лабораторной диагностики инфекций, вызванных герпесвирусами.

Экспресс-диагностика. Для экспресс-диагностики герпетической инфекции используют электронную микроскопию, РИФ, ИФА. Вирионы обнаруживают в содержимом везикул, в ядрах клеток мозговой ткани, реже в жидкой фракции растертых в дистиллированной воде корочек, в смывах, мазках-отпечатках, полученных с высыпаний на коже. Вирусспецифический антиген выявляют с помощью иммуноморфологических методов исследования в соскобах везикул, пораженной роговицы, в мазках из отделяемого везикул, в клетках спинномозговой жидкости.

Выделение вируса. Для выделения герпесвирусов используют мышей-сосунков 2 — 4-дневного возраста, взрослых белых мышей, кроликов, морских свинок, хомяков, хлопковых крыс, однодневных цыплят, 12-дневных куриных эмбрионов, культуры клеток почек кролика, эмбриона человека, курицы, амниона человека, HeLa и другие клеточные культуры. При наличии вируса в исследуемом материале у мышей (через 3 — 7 дней) развиваются параличи, наступает летальный исход, на ХАО куриных эмбрионов (через 48 ч) появляются бляшки, у кроликов (через 2 — 5 дней) отмечается кератит, иногда наступает летальный исход. В клетках зараженной роговицы выявляют вирусспецифический антиген (РИФ), внутриядерные включения. В инфицированных клеточных культурах через 4 — 7 дней отмечается появление многоядерных гигантских клеток (поликариоцитов), увеличение и округление клеток (баллонирующая дегенерация). Выделенные штаммы вируса простого герпеса (ВПГ) идентифицируют с помощью стандартных иммунных кроличьих сывороток в PH на мышах (по летальному эффекту), куриных эмбрионах (по количеству оспин на хорионаллантоисной оболочке), в культуре клеток (по количеству бляшек, ЦПД).

Серодиагностика основана на выявлении нарастания титров антител в PH, РСК при исследовании парных сывороток заболевших. При первичной герпетической инфекции диагностическое значение имеет выявление вируснейтрализующих и комплементсвязывающих антител. Для выявления первичной герпетической инфекции важное значение приобретает определение IgM.

При цитомегаловирусной инфекции вирус из мочи, слюны выделяют путем заражения культуры фибробластов эмбриона человека, реже — из биопсийного материала (кусочки печени), лейкоцитов крови и других материалов. Цитопатическое действие развивается медленно: обнаруживают увеличенные, многоядерные клетки с внутриядерными включениями.

Вирус ветряной оспы или опоясывающего лишая из содержимого везикул, носоглотки, соскоба папул выделяют путем инфицирования культур фибробластов и эпителиальных клеток человека и обезьян, которые после заражения инкубируют при 34 — 35 °C. Развивается очаговый цитопатический эффект, который регистрируют на 6— 13-й день или позднее. Отмечают появление синцитиев, цитоплазматических и внутриядерных включений. Для серологической диагностики, помимо РСК и PH, используют непрямую РИФ. В качестве антигена для этой реакции применяют фиксированные препараты клеток, зараженных вирусом ветряной оспы.

ПЦР. Этот метод широко применяется для подтверждения герпесвирусной этиологии менингоэнцефалитов, особенно у детей, для диагностики генитального герпеса. В качестве мишени при амплификации обычно используется общий для ВПГ-1 и ВПГ-2 высококонсервативный участок ДНК гена полимеразы. Количественный метод ПЦР эффективен также при контроле за течением инфекционного процесса и эффективностью терапии, особенно у лиц с иммунодефицитами. Несколько вариантов ПЦР используют для обнаружения вируса Эпштейна-Барр. Для диагностики хронических герпетических нейроинфекций разработан вариант мультиплексной ПЦР, позволяющий дифференцировать в одной реакционной смеси шести различных герпесвирусов, включая ВЭБ.