Частная бактериология

351

42. Для определения антител в сыворотке крови больного бруцеллезом не используют реакции (один правильный ответ):

42.1агглютинации

42.2пассивной гемагглютинации

42.3связывания комплемента

42.4коагглютинации

42.5опсоно-фагоцитарную

43. Для обнаружения бруцеллезных антигенов в сыворотке крови больного не используют реакции (один правильный ответ):

43.1агрегат-гемагглютинации

43.2коагглютинации

43.3опсоно-фагоцитарную

43.4иммуноферментный анализ

43.5реакцию нейтрализации антител

44. Реакция Хеддельсона – это реакция (один правильный ответ):

44.1опсоно-фагоцитарная

44.2агглютинации на стекле

44.3кольцепреципитации

44.4связывания комплемента

44.5агглютинации в пробирке

45. Реакцию Райта ставят с целью (один правильный ответ):

45.1определения бруцеллезных антигенов в сыворотке крови больного

45.2определения бруцеллезных антител в сыворотке крови больного

45.3аллергической диагностики бруцеллеза

45.4отбора лиц, подлежащих вакцинации против бруцеллеза

45.5определения завершенности фагоцитоза

46. Серологическую диагностику бруцеллеза начинают проводить от начала заболевания на (один правильный ответ):

46.13-5 день

46.27-8 день

46.310-12 день

46.43 неделе

46.54 неделе

47. С помощью реакции Кумбса определяют (один правильный ответ):

47.1завершенность фагоцитоза

47.2опсонины

47.3преципитины

47.4неполные антитела

47.5полные антитела

352

48. Специфическая профилактика при бруцеллезе проводится (один правильный ответ):

48.1живой вакциной EV

48.2живой вакциной СТИ

48.3живой вакциной Гайского-Эльберта

48.4живой вакциной 19-ВА

48.5иммуноглобулином

49. Какой препарат используют для специфической профилактики бруцеллеза (один правильный ответ):

49.1живую вакцину из штамма ЕV

49.2вакцину СТИ

49.3вакцину из штамма B.abortus 19-ВА

49.4аутовакцину

49.5убитую вакцину

50. Основная мера предупреждения заболевания бруцеллезом (один правильный ответ):

50.1всеобщая вакцинация людей

50.2выведение генетически устойчивых животных

50.3санэпиднадзор на молокозаводах, мясокомбинатах и в животноводстве

50.4пастеризация продуктов

50.5 контроль водоснабжения

Правильные ответы: 1.3; 2.2; 3.3; 4.2; 5.2; 6.1, 6.2, 6.3, 6.4; 7.3; 8.2, 9.3; 10.2; 11.3; 12.1; 13.3; 14.2; 15.2, 15.3, 15.4, 15.5; 16.2; 17.1, 17.2, 17.3, 17.4, 17.5; 18.4; 19.2, 19.3, 19.5; 20.3, 20.5; 21.1; 22.2; 23.1, 23.2, 23.3, 23.5; 24.3; 25.3; 26.1, 26.2, 26.4; 27.2, 27.3, 27.4; 28.1, 28.2; 29.3, 29.4; 30.3; 31.1, 31.2, 31.3, 31.4, 31.5; 32.3, 32.4, 32.5; 33.2; 34.3; 35.1, 35.2, 35,3, 35.4; 36.1, 36.2, 36.3, 36.4; 37.3; 38.1; 39.4; 40.1, 40.2, 40.3, 40.5; 41.2; 42.4; 43.3; 44.2; 45.2; 46.3; 47.4; 48.4; 49.3; 50.3.

354

В1925 г. японский врач Х. Охара (H. Ohara, 1882-1943 гг.) описал у кроликов так называемую заячью болезнь (болезнь Охари). Из воспаленного и увеличенного лимфатического узла женщины, ухаживавшей за кроликами, был выделен микроорганизм, получивший название кокк Охари. В 1928 г. Э. Фрэнсис установил тождественность выделенного им возбудителя (Bacterium tularensis) и кокка Охари. Позднее возбудитель получил наименование Francisella tularensis в честь первооткрывателя Э. Фрэнсиса и по названию озера Туляре.

Туляремия – это острое или хроническое природно-очаговое заболевание человека и животных, проявляющееся лихорадкой, интоксикацией, увеличением лимфатических узлов и поражением различных органов. Туляремия распространена во многих странах мира. В России туляремию впервые описали врачи астраханской противочумной станции С.В. Суворов, А.А. Вольферц и М.М. Воронкова в 1926 г. в низовьях реки Волги у Астрахани во время вспышки этого заболевания среди охотников за водяными крысами. Диагноз был подтвержден выделением от больных людей чистой культуры возбудителя.

Визучение туляремии в нашей стране большой вклад внесли Е.Н. Павловский, Н.Г. Олсуфьев, Н.А. Гайский, Б.Я. Эльберт и многие другие ученые. В частности, Е.Н. Павловский разработал учение о природной очаговости инфекционных заболеваний, в том числе туляремии, а Н.Г. Олсуфьев провел комплексное обследование очагов туляремии в разных зонах бывшего СССР, определил роль млекопитающих и переносчиков в распространении возбудителя инфекции (рисунок 4.59).

А Б Рисунок 4.59 – А - Евгений Никанорович Павловский (1884 – 1965 гг.); Б - Николай

Григорьевич Олсуфьев (1905-1988 гг.). Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Н.А. Гайский и Б.Я. Эльберт (рисунок 4.60) разработали вакцину против туляремии.

Рисунок 4.60 – А - Николай Акимович Гайский (1884-1947 гг.); Б - Борис Яковлевич Эльберт (1890-1963 гг.). Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Таксономическое положение. Возбудитель туляремии (Francisella tularensis) относится к царству Bacteria, типу Proteobacteria, классу Gammaproteobacteria, порядку Thiotrichales, семейству Francisellaceae, роду Francisella. Род Francisella включает 6 видов: F. tularensis, F. hispaniensis, F. novicida, F. noatunensis, F. philomiragia, F. piscicida. В пределах вида F. tularensis

различают четыре подвида или географические расы: F. tularensis subsp.holarctica, F. tularensis subsp. mediasiatica, F. tularensis subsp. novicida, F. tularensis subsp. tularensis (nearctica). Патогенными для человека являются подвиды неарктический, голарктический и среднеазиатский. Эти подвиды отличаются некоторыми биологическими особенностями. Четвертый подвид (F. tularensis subsp. novicida) считается условно патогенным для человека, отмечены единичные случаи выделения этого подвида от людей со сниженным иммунитетом.

Неарктическая (американская) разновидность (тип А или подвид tularensis

(nearctica) – F. tularensis subsp. tularensis) является высоко патогенной,

ферментирует глицерин и содержит фермент цитруллинуреидазу. Этот подвид распространен в Северной Америке.

Голарктическая (европейско-азиатская) разновидность туляремийного микроба (тип В или подвид holarctica – F. tularensis subsp. holarctica) является умеренно патогенной, не ферментирует глицерин и не продуцирует цитруллинуреидазу. Этот подтип регистрируется в Европе и Азии и включает 3 биологических варианта: японский биовар, биовар I (эритромицин-чувствительный - Ery S) и биовар II (эритромицин-резистентный - Ery R). Биовар japonica голарктической разновидности выделен в Японии, бактерии этого варианта ферментируют глицерин. Биовар I распространен в Старом и Новом свете. Биовар II выделяется в некоторых регионах Европы и Азии.

Среднеазиатская разновидность (подвид mediasiatica – F. tularensis subsp. mediasiatica) туляремийного микроба является мало патогенной, ферментирует глицерин, содержит цитруллинуреидазу. Этот подвид вызывает заболевания в Средней Азии в дельтах рек Или и Аму-Дарьи.

Таксономическое положение F. novicida остается неопределенным.

На территории России распространен голарктический подвид с биоварами эритромицин-чувствительный и эритромицин-резистентный.

Наибольшей вирулентностью для человека обладает североамериканский подвид tularensis (nearctica), менее вирулентными являются штаммы подвида holarctica, а штаммы подвида mediasiatica способны вызывать заболевания в единичных случаях.

Сравнительная характеристика подвидов F. tularensis представлена в таблице 4.5.

Таблица 4.5 - Сравнительная характеристика подвидов F. tularensis

Морфологические и тинкториальные свойства. Возбудитель туляремии представляет собой мелкие грамотрицательные палочки (коккобациллы) размером 0,3-0,7 мкм в длину и 0,2-0,4 мкм в ширину (рисунок 4.61).

а б Рисунок 4.61 - Клетки туляремийного микроба: а – сканирующая электронная

микроскопия, компьютерная визуализация, б – окраска по Граму. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

В мазках из культур доминируют кокковидные формы, в мазках из органов - палочковидные (рисунок 4.62).

а б

Рисунок 4.62 – а - F. tularensis в тканях (микрофотография, компьютерная визуализация); б - F. tularensis (указано стрелками) в отпечатке из селезенки,

окраска по Романовскому-Гимзе. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

357

При электронной микроскопии клеток обнаруживается гранулярная цитоплазма и центрально расположенный нуклеоид (рисунок 4.63).

Рисунок 4.63 – Электронная микрофотография возбудителя туляремии. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Микроб неподвижен, спор не образует, синтезирует капсулу (особенно в организме животных).

Основным компонентом внешней мембраны вирулентных клеток туляремийного микроба является S-форма ЛПС, состоящая из О-полисахарида (О- антигена), присоединенного к липиду А через олигосахарид кора. Фазовые вариации липида А влияют на способность туляремийного микроба к внутриклеточному существованию и размножению. ЛПС туляремийного микроба не способен связываться с ЛПС-связывающим белком и рецептором TLR4 на макрофагах. О- антиген играет важную роль во внутриклеточном выживании туляремийного микроба. В отличие от ЛПС других грамотрицательных бактерий ЛПС туляремийного микроба не обладает токсичностью и не индуцирует синтез провоспалительных цитокинов. Для авирулентных штаммов характерен синтез R- ЛПС без О-цепей.

Культуральные свойства. Возбудитель туляремии не растет на простых питательных средах, что является одним из дифференциально-диагностических признаков. Для его культивирования применяют среды, содержащие яичный желток, кровь, витамины, цистин, цистеин, тиамин, экстракты органов и тканей животных. Для выращивания туляремийного микроба используют свернутую желточную среду Мак-Коя, полужидкую среду с кровью Емельяновой, среду Фрэнсиса, полужидкую желточную среду Дрожевкиной, FT-агар. На желточных средах и средах с кровью вирулентные штаммы туляремийного микроба формируют блестящие выпуклые небольшие колонии (1-2 мм) с ровными краями S-формы молочно-белого цвета с голубоватым оттенком (рисунок 4.64).

358

Рисунок 4.64 - Колонии туляремийного микроба на плотной питательной среде. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Возбудитель туляремии является факультативным анаэробом, температурный оптимум составляет 36-38°С, рН 6,8-7,4. Посевы выдерживают в термостате от 2 до 14 суток.

В жидких питательных средах туляремийный микроб растет только на поверхности среды и значительно хуже, чем на плотных средах. Бактерия хорошо размножается также в желточном мешке развивающегося куриного эмбриона.

Биохимические свойства. Туляремийный микроб не обладает выраженной биохимической активностью. Способность разлагать углеводы и спирты у этого микроба выявляется лишь на специальных плотных средах с пониженным содержанием белка и с определенным значением рН. Среды Гисса для этой цели непригодны. Бактерия ферментирует с образованием кислоты без газа глюкозу и мальтозу. В некоторых случаях микроб ферментирует левулезу и маннозу. Другие углеводы туляремийный микроб не ферментирует. Образует сероводород и индол, редуцирует тионин, метиленовый голубой, малахитовый зеленый.

Антигенная структура. Вирулентные штаммы возбудителя туляремии (S- форма колоний) имеют два антигенных комплекса, локализованных на поверхности клетки. Vi-антиген является вариантом капсульного антигена, он содержит липиды и белки. О-антиген располагается в клеточной стенке и представляет собой термостабильный гликопротеин. Эти антигены вызывают образование агглютинирующих, преципитирующих и комплементсвязывающих антител, а также участвуют в развитии гиперчувствительности замедленного типа. Антигены возбудителя туляремии родственны антигенам возбудителей чумы и бруцеллеза, поэтому возможны перекрестные серологические реакции, что необходимо учитывать при иммунологических исследованиях.

Культуры в R-форме утрачивают Vi-антиген и содержат только О-антиген, поэтому они авирулентны и лишены иммуногенных свойств. Полная потеря вирулентности сопровождается утратой иммуногенных свойств, поэтому у вакцинных штаммов туляремийных бактерий сохраняется “остаточная вирулентность” для белых мышей.

Резистентность. Возбудитель туляремии в воде и влажной почве при 4ОС сохраняется без снижения вирулентности свыше 4 месяцев, в воде при 20-25°С - 1015 суток, в зерне и соломе при температуре ниже 0°С - до 6 месяцев, при 8-12°С - 56 суток, при 20-30°С - не более 20 суток, в речной воде при температуре 10ОС - до 9 месяцев. Возбудитель туляремии неустойчив к высоким температурам - при 60ОС погибает через 5-10 минут, при кипячении - через 1-2 минуты. К низким температурам возбудитель малочувствителен и выживает при минус 30ОС, в замороженном мясе сохраняется до 93 дней, в молоке и сливках при 8-10°С - не менее 3 недель, в замороженном молоке - до 104 суток. В трупах грызунов возбудитель сохраняется до 90 суток. В замороженных трупах животных, павших от туляремии, возбудитель сохраняется до 8 месяцев, в их шкурах при 8-12°С - более месяца, при 32-33°С - 1 неделю. Прямые солнечные лучи убивают возбудителя через 30 минут. Микроб устойчив к высушиванию.

359

Для дезинфекции эффективны растворы обычных дезинфицирующих веществ в принятых концентрациях. Особенно чувствителен возбудитель к этиловому спирту (погибает через 0,5-1 минуту). От 3% растворов лизола, крезола и формалина туляремийные бактерии погибают в течение нескольких минут. Возбудитель чувствителен in vitro ко многим антибиотикам – аминогликозидам (стрептомицину, гентамицину, неомицину, канамицину), тетрациклинам (доксициклину, миноциклину), макролидам (эритромицину), фениколам (левомицетину), рифампицинам, фторхинолонам (офлоксацину, ципрофлоксацину). Вместе с тем возбудитель устойчив к пенициллину.

Экология возбудителя. Туляремия является природно-очаговой зоонозной инфекцией, возбудитель способен циркулировать среди животных в очаге инфекции длительное время. Природная очаговость заболевания поддерживается дикими грызунами и кровососущими членистоногими. В природных очагах естественными носителями (резервуаром) возбудителя туляремии являются зайцы, кролики, водяные крысы, полевки, среди которых периодически возникают эпизоотии и от которых заражаются синантропные мышевидные грызуны (рисунок 4.65).

Рисунок 4.65 - Резервуар возбудителя туляремии в природе. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Инфицированные грызуны сохраняют возбудителя в крови с момента развития септицемии до гибели животного. К туляремийному микробу восприимчивы серые крысы, лесные и домовые мыши, суслики, бурундуки, хомяки, песчанки, кроты, землеройки. Из домашних животных к возбудителю туляремии чувствительны овцы, кошки, собаки, свиньи; из лабораторных животных - морские свинки и белые мыши. Возбудитель туляремии приспособился более чем к 140 видам позвоночных и 100 видам кровососущих членистоногих, способных передавать возбудителя.

Переносчиками инфекции являются кровососущие членистоногие. Наибольшее эпидемиологическое значение из переносчиков имеют слепни, клещи, комары (рисунок 4.66).

360

а б в Рисунок 4.66 - Переносчики туляремийного микроба: а – слепень, б – клещ, в

– комар. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

По степени чувствительности к возбудителю туляремии выделяют три группы животных.

Первая группа – высоковосприимчивые и высокочувствительные млекопитающие: мелкие мышевидные грызуны, полевки, водяные крысы, хомяки, песчанки, домовые мыши, землеройки, зайцы. У этих животных заболевание протекает по типу острой септицемии при минимальной заражающей дозе. При этом возбудитель в большом количестве выделяется с мочой и калом. Животные погибают на 6-10-й день после инфицирования. Внутренние органы и кровь павших животных содержат большое количество возбудителя.

Вторая группа – высоковосприимчивые, но малочувствительные млекопитающие (суслики, серые и черные крысы, белки, ежи). Инфекционный процесс у них часто заканчивается выздоровлением. Отмечается умеренное обсеменение бактериями паренхиматозных органов и крови.

Третья группа – маловосприимчивые и нечувствительные млекопитающие (хищные млекопитающие и сельскохозяйственные животные - кошки, собаки, волки, енотовидные собаки, лисицы, хорьки). У них болезнь даже при заражении большими дозами возбудителя протекает без видимых клинических проявлений.

Туляремия у сельскохозяйственных животных возникает спорадически и также протекает без видимых клинических проявлений. Заражение происходит с инфицированными кормами и водой, воздушно-капельным путем, а также в результате укусов кровососущих членистоногих. Туляремия чаще проявляется в весенне-осенний период года, что связано с миграцией грызунов, трансмиссивным характером передачи возбудителя, обмолотом хлебов. Болезнь у сельскохозяйственных животных сопровождается небольшим обсеменением тканей бактериями; в крови и в выделениях возбудитель не обнаруживается.

Природные очаги туляремии распространены на всех континентах Северного полушария в Европе, Азии и Северной Америке. Выделяют различные типы очагов (лесные, степные, лугово-полевые, пойменно-болотные и др.). Каждому типу очагов соответствуют свои виды животных и членистоногих, принимающих участие в передаче возбудителя. Заболевания людей регистрируются в виде спорадических случаев и эпидемических вспышек во многих странах. Нередко вспышки охватывают несколько сотен человек. Рост заболеваемости наблюдается в годы повышенной численности грызунов.

В Российской Федерации туляремия обнаружена на территории практически всех краев, областей и республик. В 90-е годы прошлого века в нашей стране ежегодно фиксировалось от 100 до 400 случаев заболевания людей туляремией, при