Sudebnaya medicina v lekciyah

В.И. Витер, А.А. Халиков Стр. 301

следования осуществляется следующим образом:

-приготовление соскобов - чистым скальпелем или бритвой осторожно соскабливают помарку или пятно на лист бумаги. Аналогично берут контрольный образец с расположенной рядом с незапятнанной поверхностью.

-приготовление смывов - небольшие кусочки чистого бинта (для смывов чужеродных потожировых выделений размер тампона не должен превышать 1,5ґ1,5 см) или ткани слегка увлажняют водой

ибез нажима протирают тампоном видимые следы. Таким же образом готовят смыв с незапятнанного участка, расположенного вблизи пятна. Тампоны для смывов должны браться от одного куска бинта или чистой ткани. При приготовлении смывов необходимо надевать резиновые перчатки или брать тампон пинцетом. Для обнаружения чужеродных потожировых выделений на теле жертвы смывы делают в местах их наиболее вероятного присутствия - с шеи, вокруг рта, кистей рук и т.д.

Пятна, находящиеся на грунте, изымаются вместе с грунтом, желательно на всю глубину пропитывания. Изъятый грунт рассыпается тонким слоем на тарелку, просушивается, упаковывается в бумажные пакеты и направляется на исследование. Контрольные образцы подготавливаются аналогично.

Кровяные пятна со снега, равно как и пятна жидкой крови, спермы, мочи, собираются на чистую марлю (бинт), сложенные в несколько слоев. Марлю с изъятым образцом кладут на дно како- го-либо сосуда, высушивают, упаковывают и передают на исследование. Обязательно прикладывается контрольный образец марлевого тампона (если бралось пятно со снегом, то контрольный образец должен быть пропитан незапятнанным снегом и высушен).

Волосы, или объекты их напоминающие, собираются пинцетом в отдельные пакетики, изготовленные из бумаги, упаковываются по местам изъятия и направляются на исследование.

2. Отбор биологического материала от трупов и изъятие образцов у живых лиц.

Перед экспертами часто ставятся вопросы, требующие исследования содержимого влагалища, полости рта, прямой кишки потерпевших, крови, спермы, слюны, волос, смывов и отпечатков с половых членов подозреваемых.

Изъятие образцов необходимо производить с соблюдением следующих правил: - содержимое влагалища у живых женщин целесообразно брать сразу после совершения преступления - сохранность сперматозоидов в половых путях живых женщин составляет 5-7 дней (при условии, если потерпевшая не предпринимала никаких гигиенических манипуляций), но количество их резко уменьшается уже в течение первых суток. Содержимое влагалища берется на чистый марлевый тампон, при этом обрабатываются своды, наружный зев и шейка матки. Отработанным тампоном на чистые предметные стекла наносятся поверхностные мазки, подсушиваются, упаковываются и подробно надписываются;

-содержимое полости рта у живых потерпевших желательно изымать в течение нескольких часов с момента совершения преступления. Аналогично марлевым тампоном протирается слизистая оболочка губ, щек, десен, зубов, лакуны, миндалины, после чего содержимое тампона переносится на предметное стекло и высушивается;

-содержимое прямой кишки у живых потерпевших следует брать до акта дефекации. Предварительно делается смыв вокруг анального отверстия (тампон исследуется самостоятельно), и лишь после этого новым тампоном берут содержимое прямой кишки, вводя тампон на глубину 3-6 см. Все тампоны с образцами перед упаковкой высушиваются.

При взятии мазков-отпечатков с полового члена следует учитывать, что проведение подозреваемым гигиенических мероприятий способно полностью исключить возможность обнаружения чужеродного биологического материала. Как правило, безрезультатно изъятие мазков-отпечатков позднее, чем через 3 дня после совершения преступления. При взятии отпечатков чистые, слегка смоченные водой предметные стекла одной из сторон плотно прикладываются к наружной поверхности полового члена, внутренней поверхности крайней плоти венечной борозды, к головке полового члена. Отпечатки просушивают, стекла складывают отпечатками внутрь, проложив между ними спички, и связывают, предварительно промаркировав каждое стекло. Стекла укладывают в коробки и направляют на исследование. При взятии мазков, что менее желательно, марлевыми тампонами, слегка смоченными водой, протирают названные выше участки, тампоны подсушивают, упаковывают и направляют на исследование.

В.И. Витер, А.А. Халиков Стр. 303

Перечисленные объекты отбираются у трупов судебными медиками, - у живых лиц - судебными медиками или урологами, сексопатологами, гинекологами, андрологами.

Важные вещественные доказательства можно получить, исследовав подногтевое содержимое потерпевшего и подозреваемого. Для этого ногтевые пластинки указанных лиц срезают очень острыми чистыми ножницами, стараясь не повредить мягких тканей

иполностью захватить выступающий край ногтевой пластины. Во избежание утраты доказательственного материала подногтевое содержимое исследуется первоначально на наличие микроволокон и лишь затем - на наличие биологических объектов.

Подногтевое содержимое, равно как и следы чужеродных биологических выделений в естественных отверстиях трупов, подлежат обязательному исследованию вне зависимости от времени с момента совершения преступления, за исключением случаев, когда исследование невозможно из-за далеко зашедших гнилостных изменений трупа.

Вкачестве сравнительных образцов на исследование желательно направлять биологические субстраты того же вида, что и изъятые на месте происшествия. Так, если на месте происшествия изъята кровь, то в качестве сравнительных образцов направляется тоже кровь, если сперма, то сперма, если слюна - то слюна и т.д. При таком сравнении результаты являются наиболее объективными.

Кровь - при возможности незамедлительной доставки в лабораторию - желательно направлять в жидком виде в количестве 2-3 мл из пальца руки, помещенную в чистый флакон с указанием номера дела

ифамилии донора. При невозможности направления крови в жидком виде, а также для возможного дублирования исследований обязательно представление образцов на марлевом тампоне. Тампон пропитывается кровью до получения пятна 5ґ5 см (с пропитыванием нескольких слоев марли), высушивается и направляется на исследование.

Слюна - прополоскать рот донора водой, положить под язык марлевый тампон, после обильного пропитывания слюной извлечь его пинцетом, высушить при комнатной температуре, упаковать.

Сперма, влагалищное содержимое - отбор этих образцов описан выше. На исследование направляют как мазки на предметных стеклах, так и тампоны, высушенные при комнатной температуре.

Волосы - для сравнения следует направлять волосы с головы или тела человека, в зависимости от принадлежности волос с места происшествия. С головы для сравнения срезают, как можно ближе к корням, небольшие пряди волос, отдельно - со лба, висков, темени, затылка. Следует помнить, что длина волос - один из диагностических признаков. Для сравнения волосы с тела должны представляться с тех же областей, из которых предполагается происхождение волос-улик. Это могут быть длинные и короткие волосы тела, лица, конечностей. Для сравнения представляется не менее 5 -10 волос каждого типа.

Исследование крови Схема исследования крови как вещественного доказательства:

1.Определение наличия крови.

2.Установление видовой принадлежности.

3.Определение индивидуальной принадлежности по изосерологическим системам:

- группы эритроцитарных антигенов - группы сывороточных антигенов - группы ферментных антигенов

4.Геномная идентификация.

5.Установление пола, возраста, регионарного происхождения крови, давности формирования пятен крови, количества излившейся крови и механизм образования следов крови, принадлежит кровь беременной женщине или роженице, живому лицу или трупу.

Исследование следов крови является наиболее частым видом экспертизы вещественных доказательств и составляет около 80 % всех экспертиз. Судебно-медицинская экспертиза крови имеет большое значение при расследовании особо тяжких преступлений: убийств, изнасилований, нанесения телесных повреждений.

Объекты исследования: следы, напоминающие кровяные - пятна, помарки, смывы, соскобы, замытые участки на объектах - без видимых следов.

Исследуются для определения:

Наличия крови: исследование может производиться непосредственно с участками вещественных доказательств, имеющими следы, похожие на кровяные, либо с экстрактами из этих следов - при малых количествах вещества в следе исследование, как правило производится с экстрактом из следа.

В.И. Витер, А.А. Халиков Стр. 305

Методы: по возрастанию чувствительности - микроспектроскопия; хроматография в тонком слое; микролюминесценция.

Вида крови: человека, животного, птицы и т.д. - при получении положительного результата на наличие крови исследуются ранее приготовленные экстракты или новые вытяжки.

Внастоящее время применяется Опти-тест, позволяющий одновременно выявить наличие и вид крови (человека). Он представляет сочетание бензидиновой пробы и преципитирующей реакции.

Методы: кольцепреципитация; встречный иммуноэлектрофорез на агаре или на ацетатцеллюлозных мембранах; реакция в твердой среде; иммунофлюоресценция; выявление антигена Н; определение У-хроматина.

Групповой принадлежности крови: при установлении принадлежности крови человеку, как правило, первоначально определяется принадлежность к той или иной группе крови (по разным серологическим системам) представленных образцов - с целью выбора рациональной серологической системы исследования самих вещественных доказательств с места происшествия. При малых пятнах - исследование только после изучения образцов крови подозреваемых и жертв!!!

Определение антигенных свойств крови имеет значение при доказательстве виновного в совершении преступления подозреваемого, в бракоразводных делах, в делах о подмене детей, при исключении отцовства и материнства.

Существует определенная зависимость наследования индивидуальных факторов крови.

Всудебно-медицинской экспертизе вещественных доказательств

иэкспертизе по поводу спорного отцовства используют метод геномной дактилоскопии.

Врезультате разрушения белкового материала, находящегося в неблагоприятных условиях на вещественных доказательствах, через 1-6 месяцев бывает трудно с помощью белковых систем произвести экспертизу. Кроме того, наличие в образце бактериального загрязнения может привести к неверному определению групповой принадлежности. Определение групповой принадлежности пятен спермы часто бывает затруднительно из-за загрязнения вагинальными выделениями. Протеолитическая активность спермы может привести к деградации белкового материала в образце.

Все белковые системы - это проявления полиморфизма генов в организме индивида. Однако генетическая изменчивость, наблюдаемая на уровне ДНК, значительно выше. Внедрение в практику методов анализа полиморфизма ДНК в следах биологического происхождения является крупнейшим достижением в криминалистике и судебной медицине последних лет.

Первоначально в 1985 году был предложен метод анализа полиморфизма длин рестриктазных фрагментов ДНК, названный геномной дактилоскопией.

Исследования генома человека показали, что для каждого индивида характерен свой, присущий только ему набор вариантов тестируемых гипервариабельных локусов. Вся картина вариантов определяется геномным “отпечатком”, или генетическим “паспортом” - индивидуальной геномной характеристикой личности человека, которому принадлежит анализируемая ДНК. С целью “расшифровки” гипервариабельных локусов был предложен метод рестриктазного анализа, основанный на расщеплении высокополимерной ДНК ферментами рестриктазами. Рестриктазы “разрезают” ДНК внутри или около своих участков узнавания, которые обычно содержат 4- 6 нуклеотидных пар. В результате из каждого вида молекул ДНК образуется свой, присущий только данному виду набор молекул низкомолекулярных поли- и олигонуклеотидных фрагментов. Полученную гетерогенную смесь фрагментов ДНК фракционируют по размеру, далее анализируют непосредственно с помощью окрашивания и изучения в УФ-лучах или опосредованно с помощью гибридизационных методов, применяя соответствующие, меченные радиоизотопами зонды. Применение зондов позволяет выявлять сразу все минисателлиты данного семейства, гомологичного используемому зонду. При этом для каждого человека характерен свой, присущий только ему вариант набора таких, отличающихся по длине минисателлитных фрагментов.

Основное преимущество данной методики заключается в высокой надежности при проведении идентификации личности. Однако первоначально разработанный метод анализа полиморфизма длин рестриктазных фрагментов ДНК имеет ряд существенных ограничений, связанных как с количеством, так и с качеством используемой при анализе ДНК. Для успешного проведения анализа необходимо

В.И. Витер, А.А. Халиков Стр. 307

наличие высокомолекулярной ДНК в количестве 5-10 мкг. Значительно деградированная ДНК (с распадом нити на мелкие цепочки) непригодна для оценки полиморфизма рестриктазных фрагментов. К недостаткам метода также относится длительность проведения анализа (2-4 недели) и в ряде случаев невозможность повторного исследования и сравнения результатов. Для преодоления перечисленных недостатков был предложен метод ферментативной амплификации, т.е. увеличение числа копий строго определенных фрагментов молекулы ДНК в условиях in vitro с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР), что позволило резко повысить чувствительность анализа. Этот метод позволяет быстро, в течении 1-3 дней анализировать образцы, содержащие минимальное количество ДНК различной степени сохранности (небольшое пятно крови, луковица волос и др. объекты).

Успешное сочетание метода полимеразной цепной реакции с геномной дактилоскопией основано на том, что ПЦР позволяет размножить необходимую последовательность ДНК в количестве, достаточном для проведения типирования методом геномной дактилоскопии.

Каждый этап удвоения ДНК в процессе амплификации состоит из трех последовательных ступеней:

1.Денатурация ДНК.

2.Комплементарное связывание праймерной последовательности с соответствующей последовательностью на ДНК-матрице (так называемый отжиг).

3.Синтез ДНК с помощью Taq-полимеразы (достройка прайме-

ра).

Такой подход положен в основу создания диагностических и индивидуализирующих тест-систем. Все они разрабатывались по единому принципу, который заключается в подборе праймеров на основе известной первичной последовательности ДНК (как правило это олиго-нуклеотиды длиной 20-25 нуклеотидов) и выбора оптимальных условий амплификации нужного генетического локуса. Существование в геноме человека гипервариабельных локусов позволило использовать ПЦР для целей высокоточной идентификации личности и определения биологического родства в судебной экспертизе.

Практическое применение геномной “дактилоскопии” в судебной медицине.

Использование технологии геномной “дактилоскопии” в экспертизе спорного отцовства, а также для установления видовой и половой принадлежности биологических объектов и проведения идентификации позволяет выйти на качественно новый, более высокий уровень анализа, поскольку геннодактилоскопические системы обладают потенциалом исключения и избирательностью, которые на несколько порядков выше чем у традиционных маркерных систем.

Геннодактилоскопический тест, направленный на разрешение случаев оспариваемого отцовства, предполагает сравнительный анализ геномных “отпечатков” ребенка, матери и предполагаемого отца. При этом регистрируют все полосы в геномном “отпечатке” ребенка, позиции которых совпадают с материнскими полосами, а оставшиеся полосы у ребенка сопоставляются с геномным “оттиском” мужчины. Если исследуемое трио представляет собой истинную биологическую семью, все не материнские полосы ребенка обнаружатся в геномном “отпечатке” отца. В противном случае часть полос в геномном “отпечатке” ребенка окажется посторонними, т.е. не найдет соответствия в геномном “отпечатке” заявленных родителей. Это стандартный алгоритм решения данной экспертной задачи, который базируется на закономерностях наследования гипервариабельных локусов. В частности, опираясь на менделевский характер наследования можно считать, что все полосы, составляющие геномный “отпечаток” ребенка должны иметь либо отцовское, либо материнское происхождение. Поэтому присутствие у ребенка посторонних фрагментов служит основанием для исключения заявленного родства. Теоретически потенциал исключения мультилокусных систем очень высок - более 99,999%, однако практические результаты очень сильно зависят от технического уровня выполнения экспериментальных процедур.

При судебно-медицинском исследовании вещественных доказательств в одном случае проводилась идентификация следов крови. По данным судебно-следственных органов гр-н В. подозревался в убийстве гр-на Б. Наряду с исследованием белковых систем была проведена геномная “дактилоскопия”. Типирование проводили по двум гипервариабельным участкам ДНК. После анализа данных,

В.И. Витер, А.А. Халиков Стр. 309

было установлено с вероятностью ошибки не более 0,36%, что кровь на вещественных доказательствах принадлежит гр-ну В. Таким образом, вопрос, интересовавший следствие был разрешен.

В другом случае по данным прокуратуры, был обнаружен труп гр-ки Т. При судебно-биологическом исследовании в содержимом ее влагалища обнаружено присутствие спермы. В изнасиловании и убийстве гр-ки Т. подозревался гр-н Г. Проведение экспертизы по эритроцитарным системам не привело к позитивному результату. При проведении геномной дактилоскопии типирование геномной ДНК осуществлялось по четырем локусам - Аро В, Д I7S 30, Д IS 80, Д 9S 49 из образцов крови подозреваемого Г., спермы из влагалища Т., ее образцов крови. Результаты, полученные после анализа длин амплифицированной ДНК, позволили исключить происхождение спермы во влагалище гр-ки Т. от подозреваемого Г.

На основе практических результатов проведенных экспертиз, можно сделать вывод о довольно высокой достоверности результатов при использовании полимеразной цепной реакции с типированием не менее 3-4 гипервариабельных локусов с последующим высчитыванием вероятности ошибки.

Внедрение в практику судебно-медицинской экспертизы методов геномной дактилоскопии означает развитие нового периода в производстве экспертиз по идентификации объектов биологического происхождения и родственных отношений на качественно более высоком уровне, чем обычные рутинные методы исследования.

Установление половой принадлежности крови основано на выявлении особенностей хромосом в ядрах клеток белой крови человека. Установлено, что у женщин наличествует две одинаковые половые хромосомы (XX), у мужчин разные - X и У. Возможно решение о половой принадлежности крови по выявлению в ядрах лейкоцитов глыбок полового хроматина (телец Бара), имеющих вид “барабанных палочек”. У мужчин эти включения встречаются относительно редко.

Установление происхождения крови от взрослого человека или младенца основано на различии гемоглобина крови, выявляемого физико-химическими и электрофоретическими методами. Гемоглобин новорожденного на 70-80% состоит из плодного или фетального гемоглобина, и лишь на 20-30% из гемоглобина, характеризующего взрослого человека. Постепенно это соотношение меняется и к кон-

цу первого года жизни составляет около 1-2% фетального гемоглобина, что характерно для крови взрослых людей.

Региональное происхождение крови - определяется по обнаружению в ней примесей клеток тех тканей, откуда произошло кровотечение. Доказательством наличия менструальной крови, кроме наличия клеток слизистой оболочки матки, является обнаружение фермента фибринолизина. Метод может быть использован только при наличии свежей крови без каких либо примесей (спермы, слюны и др.).

Для определения давности происхождения пятна крови используют изменение свойств гемоглобина при “старении” пятна и снижение активности некоторых ферментов крови с течением времени. Методы относительно сложны и трудоемки, требуют дефицитных реактивов.

Определение количества излившейся крови представляет сложную задачу в связи с рядом факторов, затрудняющих ее рёшение. На результат влияют характер и структура материала, на котором сформировалось пятно, степень пропитывания и др. Основным методом являет определение сухого остатка крови в пятне с последующим перерасчетом на объем жидкой крови.

Для выявления беременности, бывших родов и аборта (прерванной беременности) по пятнам крови используются гормональный и ферментативный методы Они достаточно сложны и дорогостоящи. В ряде случаев не дают однозначного ответа.

Дифференциация следов крови от живых людей и трупов возможна в пределах до 45 суток с помощью метода основанного на выбросе в кровь трупа тканевых изоферментов, отсутствующих в крови живого человека. Появившись спустя 15-20 минут после смерти они, достигают максимума концентрации через два часа и являются специфическим диагностическим признаком. Ценность метода велика. Однако его сложность затрудняет внедрение в следственную и экспертную практику.

Исследование спермы Исследование спермы в жидком виде, в мазках, в семенных пят-

нах производится при расследовании половых преступлений, при определении способности к оплодотворению, в бракоразводных и алиментных делах.