2 Методы оценки иммунного статуса
Иммунологическое обследование человека сводится к оценке
состояния иммунной системы (схема 19.1), выявлению чужеродных
или собственных антигенов, обнаружению признаков клеточных
и гуморальных специфических иммунных реакций.
Оценка иммунного статуса организма начинается с ориентировочного
клинического (первого) этапа, на котором врач собирает
и оценивает иммунологический анамнез: частоту инфекционных заболеваний,
характер их течения, выраженность температурной реакции,
наличие очагов хронической инфекции, признаков аллергизации.
Далее оцениваются результаты клинического анализа крови: содержание
гранулоцитов, моноцитов, лимфоцитов. С помощью бактериологических,
вирусологических и серологических исследований выявляется
бактерио- или вирусоносительство.
На втором этапе в иммунологической лаборатории проводится
исследование крови с использованием иммунологических тестов 1-го
и 2-го уровней.
Тесты 1-го уровня позволяют выявить грубые нарушения со стороны
иммунной ситемы путем определения в крови процентного
содержания и абсолютного количества Т -и В-лимфоцитов, уровня
иммуноглобулинов крови, оценки показателей неспецифической защиты
организма.
Для выявления и подсчета Т-и В-лимфоцитов наиболее точными
являются методы, состоящие в выявлении поверхностных маркеров —
антигенов системы CD, которые были рассмотрены в разделе 13.1.
К этим антигенам биопромышленность готовит стандартные моноклональные
антитела и наборы реактивов, позволяющие в имму-
нолюминесцентных и цитотоксических тестах (см. далее) выявить Ти
В-лимфоциты, их субпопуляции, другие клетки иммунной системы.
Так, маркером Т-лимфоцитов служит антиген CD3, В-лимфоцитов —
CD22, хелперных Т-лимфоцитов — CD4, цитотоксических лимфоцитов
— CD8, естественных киллеров — CD 16, CD56.
Т- и В лимфоциты выявляют также по их способности фиксировать
на своей поверхности эритроциты барана или мыши, образуя
видимые под микроскопом структуры, именуемые розетками
(см. рис. 13.4). В-лимфоциты, обладающие рецепторами для иммуноглобулина
G и комплемента могут быть выявлены также по способности
формировать розетки с эритроцитами, нагруженными
этими белками. Содержание в крови здорового взрослого человека
Т-клеток — 4 0-70%, В-лимфоцитов — 10-30% общего числа лимфоцитов.
Некоторые лимфоциты (около 5%) не имеют маркеров Тили
В-клеток. Это нулевые лимфоциты, утратившие рецепторы. Их
число возрастает при некоторых заболеваниях.
Кроме того, к тестам 1-го уровня относится определение концентрации
сывороточных иммуноглобулинов IgM, IgG и IgA. Для
этого используются антисыворотки к тяжелым цепям иммуноглобулинов
разных классов, реакция преципитации (тест иммунодиффузии
— см. 19.2) или нефелометрия и турбидометрия, выявляющие
взаимодействие иммуноглобулина с антителами по светорассеянию
или мутности. Уровень сывороточных иммуноглобулинов отражает
функциональное состояние В-системы иммунитета.
Для оценки факторов неспецифической защиты организма определяют
фагоцитарную активность лейкоцитов крови. О фагоцитарной
активности судят по способности клеток к фагоцитозу нейтральных
частиц латекса, эритроцитов или микробных клеток. При этом
вычисляют процент фагоцитирующих клеток (фагоцитарное число) и
среднее число частиц поглощенных одним фагоцитом (фагоцитарный
индекс).
Тесты 2-го уровня позволяют провести более тщательный анализ
для уточнения характера дефекта, выявленного на предыдущем этапе
с помощью ориентировочных тестов. К ним относится определение
субпопуляций Т-лимфоцитов (CD4+ и CD8+), их соотношений, оценка
их функциональной активности, супрессорного потенциала, анализ
цитокинов и их рецепторов. Функциональная активность лимфоцитов
может быть оценена по количеству бластных форм, нарастающих
после активации клеток.
Потенциальную способность лимфоцитов к активации оценивают
после стимуляции митогенами, фитогемагглютином и др., культивируемых
вне организма клеток. Количество бластных форм может
быть определено при микроскопии. Более точен и чувствителен радиометрический
метод, оценивающий интенсивность включения радиоактивных
предшественников (тимидина) в ДНК культивируемых
клеток. Для оценки иммунной защиты слизистых используется определение
секреторных иммуноглобулинов IgA.
Уровень активности фагоцитов оценивают по их способности к
ферментативной обработке поглощенных клеток. Наиболее распространен
так называемый НСТ-тест, основанный на выявлении способности
клеток восстанавливать бесцветный реактив нитросиний тетразоль
в краситель, окрашивающий активную клетку в синий цвет.