Лабораторная работа №1

Организация микробиологической лаборатории

Методы окраски микроорганизмов

Морфология бактерий: кокки, палочковидные бактерии

I. Вопросы для обсуждения.

1. Организация микробиологической лаборатории и правила работы. Проработка инструкций о правилах работы с микроорганизмами.

2. Техника приготовления микробиологических мазков.

3. Простые и сложные методы окраски микроорганизмов. Окраска по методу Грама.

4. Устройство микроскопа и правила работы с ним.

5. Принципы систематики, категории бактерий.

6. Характеристика основных форм бактерий: шаровидных и палочковидных.

II. Работа, выполняемая студентами.

1. Приготовление мазков из культур: Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Micrococcus luteus.

Приготовление мазка начинают с обезжиривания чистого предметного стекла; для этого рабочую поверхность стекла натирают мылом, которое затем удаляют тканью. На обезжиренное стекло наносят небольшую каплю физиологического раствора или воды и в нее вносят с помощью бактериологической петли, соблюдая правила асептики, исследуемый микробный материал, который распределяют по поверхности площадью около 2 см тонким слоем. После этого мазок полностью высушивают на воздухе и фиксируют в пламени спиртовки в течение нескольких секунд мазком вверх.

2. Окраска мазков по методу Грама (Синева).

Для этого необходимо приготовить фиксированный мазок. Затем:

1. на фиксированный мазок накладывают фильтровальную бумажку, пропитанную генцианвиолетом, и заливают небольшим количеством воды, при этом краситель быстро диффундирует и окрашивает мазок, окраску ведут 1-2 мин;

2. генцианвиолетовую бумажку удаляют, не промывая препарата водой, наносят раствор Люголя, и, не промывая препарата водой, опускают 2-3 раза в стаканчик с 96% этанолом (20 сек), препарат тщательно промывают водой для удаления спирта;

3. окрашивают мазок водным фуксином – 1 мин;

4. промывают водой и высушивают препарат фильтровальной бумагой, микроскопируют в иммерсионной системе.

Грамположительные микроорганизмы окрашиваются в сине-фиолетовый цвет, грамотрицательные – в светло-красный (розовый).

Микроскопия мазков в иммерсионной системе (объектив 90).

При микроскопии препаратов с иммерсионным объективом необходимо:

- на окрашенный и высушенный мазок нанести небольшую каплю иммерсионного масла и поместить препарат на предметный столик;

- повернуть револьвер и установить иммерсионный объектив 90, осторожно опустить тубус микроскопа вниз до погружения фронтальной линзы иммерсионного объектива в каплю масла; установить ориентировочный фокус при помощи макрометрического винта (работать с осторожностью); провести окончательную фокусировку препарата микрометрическим винтом, который рекомендуется вращать не более чем в пределах одного оборота;

- после окончания работы необходимо тщательно, с помощью специальной тряпочки вытереть масло с иммерсионного объектива, перевести револьвер на малый сухой объектив 8, отключить осветитель, закрыть микроскоп.

3. Микроскопия мазков в иммерсионной системе (объектив 90).

4. Зарисовка просмотренных препаратов.

5. Просмотр демонстрации, оформление и подпись протокола у преподавателя.