- •Физиология бактерий
- •Химический состав бактериальной клетки.
- •52 % Составляют белки, 17 % — углеводы, 9 % - липиды, 16 % - рнк, 3 % - днк и 3 % — минеральные вещества.
- •'Классификация бактерий по типам питания и способам получения энергии.
- •Транспорт веществ в бактериальную клетку
- •В зависимости от консистенции питательные среды могут быть:
- •В бактериологической практике используют среды, различные по происхождению.
- •Культивирование бактерий применяют, в частности, для выделения и идентификации чистых культур
- •Методы выделения чистой культуры
- •Выделение чистых культур бактерий (чк)
В зависимости от консистенции питательные среды могут быть:
-
жидкими,
-
полужидкими
-
плотными.
Плотность среды достигается добавлением агара.
Агар — полисахарид, получаемый из водорослей. Он плавится при температуре 100 °С, но при охлаждении остывает при температуре 45-50 °С. Агар добавляют в концентрации 0,5 % — для полужидких сред и 1,5—2 % — для создания плотных сред.
В зависимости от состава и цели применения различают:
-
простые,
-
сложные,
-
элективные,
-
минимальные,
-
дифференциально-диагностические
-
комбинированные среды.
По составу питательные среды могут быть простыми и сложными.
К простым средам относятся пептонная вода, питательный бульон, мясопептонный агар.
На основе этих простых сред готовят сложные, например сахарный и сывороточный бульоны, кровяной агар.
В зависимости от назначения среды подразделяются на элективные, обогащенные, дифференциально-диагностические.
Под элективными понимают среды, на которых лучше растет какой-то определенный микроорганизм. Например, щелочной агар, имеющий рН 9, служит для выделения холерного вибриона. Другие бактерии, в частности кишечная палочка, из-за высокого рН на этой среде не растут.
Среды обогащения — это такие среды, которые стимулируют рост какого-то определенного микроорганизма, ингибируя рост других. Например, среда, содержащая селенит натрия, стимулирует рост бактерий рода Salmonella, ингибируя рост кишечной палочки.
Дифференциально-диагностические среды служат для изучения ферментативной активности бактерий. Они состоят из простой питательной среды с добавлением субстрата, на который должен подействовать фермент, и индикатора, меняющего свой цвет в результате ферментативного превращения субстрата. Примером таких сред являются среды Гисса, используемые для изучения способности бактерий ферментировать сахара.
Комбинированные питательные среды сочетают в себе элективную среду, подавляющую рост сопутствующей флоры, и дифференциальную среду, диагностирующую ферментативную активность выделяемого микроба. Примером таких сред служат среда Плоскирева и висмут-сульфитный агар, используемые при выделении патогенных кишечных бактерий. Обе эти среды ингибируют рост кишечной палочки.
Питательные среды. Применяют для выращивания (культивирования) микроорганизмов в лабораторных или промышленных условиях. Любая питательная среда должна отвечать следующим требованиям:
-
содержать все необходимые для роста и размножения бактерий вещества в легкоусвояемой форме;
-
иметь оптимальные для бактерий физико-химические свойства: рН, влажность, осмолярность и др.
Для жизнедеятельности микробной клетки, безусловно, необходима вода как основной растворитель и среда для протекания всех биохимических реакций.
В бактериологической практике используют среды, различные по происхождению.
Синтетическими питательными средами называют такие, которые состоят из растворов химически чистых соединений в точно установленных дозировках. Преимуществом синтетических сред являются их строго постоянный состав и воспроизводимость.
Полусинтетические среды включают наряду с химически чистыми соединениями переработанные нативные компоненты неопределенного состава — гидролизаты мяса, дрожжевой экстракт и т.д.
Натуральные питательные среды представляют собой неизмененные нативные (природные) компоненты (сыворотка крови, яичный белок и др.).
Различные потребности микробов отдельных видов обусловливают большое разнообразие питательных сред.
По консистенции питательные среды могут быть жидкими, полужидкими, плотными. Для придания плотной консистенции к жидкой среде добавляют агар-агар, представляющий собой продукт переработки особого вида морских водорослей. Агар-агар плавится при 80—86 °С, затвердевает при температуре около 40 "Сив застывшем состоянии придает среде плотность. В плотные среды добавляют 1,5—2 %, в полужидкие — 0,3—0,7 % агар-агара. В некоторых случаях для получения плотных питательных сред используют нативные компоненты (свернувшаяся сыворотка крови, свернувшийся яичный белок), которые сами по себе являются плотными.
Преимуществом плотных питательных сред является возможность получения чистых культур микроорганизмов, а также сообществ микроорганизмов (колоний, бактериальных газонов), имеющих макроскопические размеры.
По целевому назначению питательные среды делят на основные, элективные и дифференциально-диагностические.
К основным относятся среды, применяемые для выращивания многих бактерий. Это пептические гидролизаты мясных, рыбных продуктов, крови животных или казеина, из которых готовят жидкую среду — питательный бульон и плотную — питательный агар. Такие среды также служат основой для приготовления сложных питательных сред — сахарных, кровяных и др., удовлетворяющих пищевые потребности патогенных бактерий.
Элективные питательные среды предназначены для избирательного выделения и накопления микроорганизмов определенного вида (или определенной группы) из материалов, содержащих разнообразную постороннюю микрофлору. При создании элективных питательных сред исходят из биологических особенностей, которые отличают данные микробы от большинства других. Например, избирательный рост стафилококков наблюдается при повышенной концентрации хлорида натрия, холерного вибриона — в щелочной среде и т.д.
Дифференциально-диагностические питательные среды применяют для различения (дифференциации) отдельных видов (или групп) микробов. Принцип составления этих сред основан на различиях в биохимической активности бактерий разных видов вследствие неодинакового набора ферментов.
В состав дифференциально-диагностической среды входят следующие компоненты: а) основная питательная среда, обеспечивающая размножение бактерий, б) определенный углевод (например, лактоза), способность использовать который является диагностическим признаком для данного вида, в) цветной индикатор (например, индикатор Андреде), изменение цвета которого свидетельствует о сдвиге рН среды в кислую сторону вследствие ферментации соответствующего углевода. Дифференциально-диагностические среды широко используют в лабораторных микробиологических диагностических исследованиях для дифференциации и идентификации бактерий.