Вопрос 47.

Иммунодиагностика. Принципы изготовления и контроля вирусных диагностикумов.

Иммунодиагностика – раздел иммунологии, изучающий и разрабатывающий методы распознавания инфекционных и неинфекционных болезней.

В диагностических целях при обнаружении антител в сы­воротке крови больных используются серологические реакции.

Для постановки таких реакций применяются диагностикумы - препараты, содержащие взвесь обезвреженных микроор­ганизмов или определенные антигены.

Необходимость использования диагностикумов для сероло­гических реакций связана не только с явным их преимущест­вом перед живыми культурами микробов (безопасность в ра­боте), но еще и потому, что для приготовления диагностикумов подбираются штаммы микроорганизмов с высокой чувст­вительностью к антителам и способностью длительно сохра­нять антигенные свойства.

Для инактивации микроорганизмов при приготовлении диагностикумов чаще всего используются химические вещест­ва, особенно формалин, являющийся лучшим консервантом. Убитые нагреванием микробы хуже сохраняют антигенные свойства и применяются редко.

В серологических реакциях для выявления специфических антител применяются: бактериальные, эритроцитарные и вирусные диагностикумы.

Бактериальные диагностикумы - препараты, содержащие цельные микробные клетки (корпускулярные) или из отдельных антигенов микробной клетки (монодиагностикумы): О, Н или Vi – антигены. Используют для постановки простой реакции агглютинации.

Эритроцитарные антигенные диагностикумы - препараты, содержащие растворимые антигены микробной клетки, адсорбированные на эритроцитах, обработанных формалином. Используют для постановки реакций непрямой или пассивной гемагглютинации (РНГА).

Эритроцитарные антительные диагностикумы – препараты, содержащие антитела, адсорбированные на эритроцитах, обработанных формалином. Используют для постановки реакций непрямой обратной гемагглютинации (РОНГА).

Вирусные диагностикумы — препараты, содержащие инактивированные вируссодержащие жидкости (культуральные, из куриных эмбрионов или организма животных, зараженных соответствующим вирусом). Используют для постановки реакции связывания комплемента (РСК) и реакции нейтрализации (РТГА).

Антигены должны отвечать следующим основным требованиям:

- быть в высокой концентрации;

- мало содержать балластных веществ;

- быть безопасны в работе и хорошо сохраняться в лабораторных условиях. Для этого их (в зависимости от вируса и применяемой реакции) подвергают различным методам обработки: замораживанию, оттаиванию с последующим центрифугированием, обработке эфиром, ацетоном (при вирусных энцефалитах), обработке твин-эфиром (при ПГ-3 и др.), обработке гексаметафосфатом натрия (NaPO₃)₆ в определенных зонах PH (при ИРТ, аденоинфекции, вирусной диарее и др.).

В настоящее время в лабораториях используются следу­ющие диагностикумы.

1. Бактериальный диагностикум сальмонелл тифа. Приме­няется в реакции агглютинации для обнаружения антител в сыворотке больных.

2. Сальмонеллезные О-диагностикумы содержат О-антигены различных групп сальмонелл (инактивированных 15%-ным раствором глицерина). Применяются для выявления О-антител при сальмонеллезных инфекциях в реакции агглю­тинации с сывороткой больных.

3. Сальмонеллезные Н-монодиагностикумы. Исполь­зуются в реакции агглютинации для определения заболевания в прошлом (анамнестическая реакция агглютинации) и реже с диагностической целью.

4. Vi — брюшнотифозный диагностикум. Применяется в реакции агглютинации при выявлении брюшноти­фозного бактерионосительства.

5. Единый бруцеллезный диагностикум — взвесь бруцелл (инактивированных фенолом), подкрашенная метиленовым синим. Применяется для определения антител в сыворотках крови больных бруцеллезом животных в реакциях агглютинации Райта и Хеддльсона.

6. Эритроцитарный сальмонеллезный О-диагностикум — взвесь эритроцитов с адсорбированными на них О-антигенами различных групп сальмонелл. Используется для постановки РПГА с сывороткой больного при уточнении клинического диагноза сальмонеллезной инфекции.

7. Эритроцитарный Vi-диагностикум — эритроциты, сенси­билизированные очищенным Vi-антигеном S. typhi, применяет­ся в РПГА при выявлении брюшнотифозного бактерионоси­тельства.

8. Гриппозный диагностикум представляет собой аллантоисную жидкость инфицированных вирусом гриппа (типов А, В) куриных эмбрионов и инактивированную мертиолатом или формалином.

9. Диагностикум вируса клещевого энцефалита получают из суспензии мозга белых мышей, зараженных вирусом кле­щевого энцефалита. Суспензию подвергают центрифугирова­нию (для осветления) и инактивируют химическими вещест­вами.