Добавил:
ext4sy@mail.ru Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:

2018 ВИР и БИОТ ВЕТ л.з. (методичка)

.pdf
Скачиваний:
17
Добавлен:
30.06.2023
Размер:
3.06 Mб
Скачать

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕУЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ

«РЯЗАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙУНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ П.А. КОСТЫЧЕВА»

(ФГБОУ ВО РГАТУ)

ФАКУЛЬТЕТ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ И БИОТЕХНОЛОГИИ

Вологжанина Е. А.

ВИРУСОЛОГИЯ И БИОТЕХНОЛОГИЯ

УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕСКОЕ ПОСОБИЕ

для лабораторных занятий

для студентов факультета ветеринарной медицины и биотехнологии по специальности 36.05.01 Ветеринария, специализация «Ветеринарная фармация»

квалификация Ветеринарный врач очной / заочной форм обучения

Рязань

2017

Учебно-методические указания для лабораторных работ составлены с учетом требований федерального государственного образовательного стандарта высшего образования по специальности 36.05.01 Ветеринария, утвержденного приказом № 962 Министерства образования и науки Российской Федерации от 03 сентября 2015 г.

Разработчик: доцент

 

кафедры эпизоотологии, микробиологии

 

и паразитологии, к.в.н.

Вологжанина Е. А.

Рассмотрены и утверждены на заседании кафедры эпизоотологии, микробиологии и паразитологии 29 августа 2017 года, протокол № 1

Заведующий кафедрой эпизоотологии,

 

микробиологии и паразитологии, доцент

Кондакова И. А.

Одобрено учебно-методической комиссией факультета ветеринарной медицины и биотехнологии 31 августа 2017 года, протокол № 1

Председатель учебно-методической комиссии

 

по специальности 36.05.01 Ветеринария, доцент

Кулаков В. В.

2

 

СОДЕРЖАНИЕ

 

ВВЕДЕНИЕ

 

5

1 ТРЕБОВАНИЯ К УРОВНЮ ОСВОЕНИЯ ДИЦИПЛИНЫ

8

2 ТЕМЫ ДЛЯ ЛАБОРАТОРНЫХ РАБОТ

9

 

Раздел 1. Общая вирусология

 

Тема 1.1.

Правила работы с вируссодержащим материалом. Правила

9

 

и методы получения и транспортировки вируссодержащего

 

 

материала от больных животных и трупов

 

Тема 1.2.

Индикация вирусов в патологическом материале путем об-

25

 

наружения вирионов и телец-включений

 

Тема 1.3.

Лабораторные животные и их использование в вирусологии

29

Тема 1.4.

Куриные эмбрионы и их использование в вирусологии

42

Тема 1.5.

Культуры клеток, их получение и использование в вирусоло-

53

 

гической практике

 

Тема 1.6.

Титрование вирусов

71

Тема 1.7.

Коллоквиум № 1 (тельца-включения, патологический мате-

86

 

риал, лабораторные животные, куриные эмбрионы, куль-

 

 

туры клеток)

 

Тема 1.8.

Реакция нейтрализации (РН) и реакция диффузной преци-

87

 

питации (РДП)

 

Тема 1.9.

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА), реакция

98

 

непрямой гемагглютинации (РНГА)

 

Тема 1.10. Метод флуоресцирующих антител (МФА)

107

Тема 1.11. Иммуноферментный анализ (ИФА)

116

Тема 1.12. Метод ДНК-зондов

123

Тема 1.13.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

129

Тема 1.14.

Коллоквиум № 2 по серологическим реакциям

136

 

Раздел 2. Частная вирусология

 

Тема 2.1.

Лабораторная диагностика бешенства

137

Тема 2.2.

Лабораторная диагностика оспы

155

 

3

 

Тема 2.3.

Определение вируса ящура в реакции связывания компле-

160

 

мента (РСК)

 

Тема 2.4.

Дифференциация вирусов Ньюкаслской болезни и гриппа

173

 

птиц

 

 

Раздел 3. Общая биотехнология

 

Тема 3.1.

Основы и методы культивирования микроорганизмов-

178

 

продуцентов

 

 

Тема 3.2.

Приготовление питательных сред, посев микроорганизмов

196

 

их подсчет

 

 

Раздел 4. Частная биотехнология

 

Тема 4.1. Современная классификация биопрепаратов

207

Тема 4.2.

Диагностические препараты

217

Тема 4.3. Биотехнология изготовления вакцин

219

Тема 4.4.

Биотехнология изготовления гипериммунных сывороток и

224

 

иммуноглобулинов

 

3 ФОРМА ПРОМЕЖУТОЧНОГО КОНТРОЛЯ ЗНАНИЙ СТУДЕНТОВ

229

СПИСОК РЕКОМЕНДОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

230

Основная литература

230

Дополнительная литература

230

Периодические издания

231

Перечень ресурсов информационно-телекоммуникационной сети

231

«Интернет»

 

 

 

4

ВВЕДЕНИЕ

Учебно-методическое пособие для лабораторных работ предназначено для студентов третьего курса очной и заочной форм обучения факультета ветеринарной медицины и биотехнологии по специальности 36.05.01 Ветеринария квалифика-

ция Ветеринарный врач по дисциплине «Вирусология и биотехнология». Учебно-

методическое пособие включают в себя несколько разделов: введение, темы для лабораторных работ, цели и содержание лабораторных занятий, форма промежу-

точного контроля знаний студентов, список рекомендованной литературы.

Цель изучения учебной дисциплины - это овладение теоретическими основа-

ми вирусологии и приобретение знаний и навыков профилактики и диагностики вирусных болезней животных, а также возможность дать студентам теоретиче-

ские знания и практические навыки по основным промышленным методам произ-

водства биопрепаратов, выявления, выделения, разделения, очистки и конструи-

рования биологически активных веществ, а также создания новых активных форм организмов, отсутствующих в природе.

Задачи учебной дисциплины:

1. Изучение особенностей биологии вирусов и взаимодействия их с заражае-

мым организмом.

2. Усвоение основных принципов диагностики вирусных болезней живот-

ных.

3. Овладение современными вирусологическими методами лабораторной ди-

агностики.

4. Ознакомление с природой и многообразием биотехнологических процес-

сов, достижениями биотехнологии в области ветеринарии.

5.Изучение технологии получения производственных питательных сред для культивирования различных микроорганизмов.

6.Изучение условий, влияющих на скорость микробиологических процессов,

рост и развитие микробных популяций.

7. Оптимизация микробного процесса.

5

8. Отработка практических навыков по выделению производственных штам-

мов микроорганизмов, их селекции, хранения, использования для промышленного изготовления вакцин и антигенов.

9. Изучение технологии приготовления терапевтических и диагностических сывороток, гамма-глобулинов, пробиотиков, антибиотиков, ферментов и витами-

нов.

10.Изучение технологии получения рекомбинантных ДНК, генно-

инженерных вакцин и моноклональных антител и их использования в ветеринар-

ной медицине.

11. Изучение методов контроля, стандартизации и сертификации биопрепа-

ратов и аттестации производственных линий.

12. Изучение устройства основного производственного оборудования для приготовления питательных сред и лекарственных форм препаратов; ознакомле-

ние с подразделениями биопредприятий, организаций и управлением биологиче-

ским производством с использованием современной электронной техники.

13. Изучение перспективных и экологически безопасных технологических процессов, основанных на использовании микроорганизмов.

Дисциплина «Вирусология и биотехнология» является дисциплиной базовой части (Б1.Б.21) и преподается на третьем курсе в шестом семестре. Студент дол-

жен иметь представление о принципах и закономерностях проведения общих ви-

русологических исследований при изучении природы, строения и физико-

химических свойствах вирусов, их культивирования в условиях лаборатории, во-

просы современной классификации вирусов, патогенеза, иммунитета, лаборатор-

ных методов диагностики отдельных вирусных болезней и их специфическую профилактику.

Предшествующие дисциплины: биологическая химия, иммунология, биоло-

гия с основами экологии, ветеринарная микробиология и микология, латинский язык.

Последующие дисциплины: эпизоотология и инфекционные болезни, патоло-

гическая анатомия и судебно-ветеринарная экспертиза, организация ветеринарно-

6

го дела, заразные болезни мелких животных и птиц, ветеринарно-санитарная экс-

пертиза.

Область профессиональной деятельности: сохранение и обеспечение здоро-

вья животных и человека, профилактику особо опасных болезней животных и че-

ловека, улучшение продуктивных качеств животных, диагностику и профилакти-

ку болезней различной этиологии, лечение животных, судебно-ветеринарную экс-

пертизу, ветеринарно-санитарную экспертизу, государственный ветеринарный надзор, разработку и обращение лекарственных средств для животных.

Объекты профессиональной деятельности: сельскохозяйственные, домаш-

ние, лабораторные, экзотические, дикие и промысловые животные, птицы, пчелы,

рыбы, гидробионты и другие объекты морского и речного промысла, клеточные культуры, микробиологические и вирусные штаммы, сырье и готовая продукция животного и растительного происхождения, продукция пчеловодства, корма и кормовые добавки, места их заготовки и хранения, лекарственные средства и био-

логические препараты, технологические линии по производству препаратов, про-

дуктов и кормов, помещения для содержания животных, пастбища, водоемы,

убойные пункты, скотомогильники, транспортные средства для перевозки живот-

ных, а также предприятия по производству, переработке, хранению, реализации пищевых продуктов и кормов животного и растительного происхождения.

Виды профессиональной деятельности: врачебная; экспертно-контрольная;

организационно-управленческая; производственно-технологическая; проектно-

консультативная; научно-исследовательская.

7

1. ТРЕБОВАНИЯ К УРОВНЮ ОСВОЕНИЯ ДИЦИПЛИНЫ

Процесс изучения дисциплины направлен на формирование следующих ком-

петенций в соответствии ФГОC ВО по данной специальности:

 

 

Компетенции

 

 

Знать

 

Уметь

Иметь навыки

индекс

 

формулировка

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

способностью и готовностью

 

 

 

 

 

 

 

к

оценке

морфофункцио-

патоморфологическую

осуществлять ме-

постановки лабора-

 

нальных,

физиологических

 

характеристику

воз-

тоды лабораторной

торного диагноза на

ОПК-3

состояний и патологических

будителей вирусных

диагностики вирус-

вирусные инфекции

 

процессов в организме чело-

 

инфекций

 

ных инфекций

 

 

века для решения профес-

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

сиональных задач

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

умением

правильно пользо-

 

 

 

 

 

 

 

ваться

медико-технической

 

 

 

 

 

 

 

и

ветеринарной

аппарату-

 

 

пользоваться вете-

 

 

рой, инструментарием

и

 

 

владения техникой

 

 

 

ринарной

аппара-

 

оборудованием в лаборатор-

 

 

лабораторных ис-

 

ветеринарную

аппа-

турой,

инструмен-

 

ных, диагностических и ле-

следований с целью

ПК-2

ратуру, инструмента-

тарием,

 

оборудо-

чебных

целях и

владением

 

постановки диагно-

 

рий, оборудование

ванием

в

лабора-

 

техникой клинического

ис-

за

 

 

 

торных

и

диагно-

 

следования

животных,

на-

 

 

 

 

 

 

стических целях

 

 

значением

необходимого

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

лечения

в

соответствии

с

 

 

 

 

 

 

 

поставленным диагнозом

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

способностью и готовностью использовать нормативную документацию, принятую в ветеринарии и здравоохранении (законы Российской

ПК-12

Федерации, технические регламенты, международные и национальные стандарты, приказы, правила, рекомендации, указании, терминологию, действующие международные квалификации)

нормативную документацию, принятую в ветеринарии

использовать нормативную документацию, принятую в ветеринарии

владения нормативной документацией, принятой в ветеринарии

8

2.ТЕМЫ ЛАБОРАТОРНЫХ РАБОТ

РАЗДЕЛ 1. ОБЩАЯ ВИРУСОЛОГИЯ

Тема 1.1. Правила работы с вируссодержащим материалом. Правила и

методы получения и транспортировки вируссодержащего материла от боль-

ных животных и трупов

Цель: изучить правила работы с вируссодержащим материалом, способы по-

лучения патологического материала при вирусных инфекциях, правила его транс-

портировки от больных животных и трупов.

Содержание:

устройство вирусологической лаборатории;

техника безопасности в вирусологической лаборатории;

методы консервации вирусов;

патологический материал, направляемый в лабораторию при вирусных инфекциях;

упаковка вирусного материала для транспортировки в лабораторию;

транспортировка вирусного материала в лабораторию;

подготовка вирусного материала к исследованию (ткани и органы, смы-

вы, фекалии, моча, корочки и чешуйки, стенки афт, кровь).

Вирусологические отделы призваны осуществлять лабораторную диагности-

ку вирусных инфекций, контролировать заболеваемость животных, вызываемую вирусами, а также учитывать состояние и напряженность специфического пост-

инфекционного и поствакцинального противовирусного иммунитета, участвовать в проведении профилактических мероприятий в борьбе с вирусными заболева-

ниями животных. При организации и оборудовании вирусологических лаборато-

рий учитывается специфика работы с вирусами, клеточными культурами и кури-

ными эмбрионами, требующая строжайшей асептики.

Размещать лабораторию желательно в 2-хэтажном здании или в изолирован-

ном отсеке. На 1 этаже располагаются гардероб с индивидуальными шкафами,

санпропускник, санузлы, склад лабораторного оборудования, материалов и посу-

ды, приемник канализационных вод с установкой для их обезвреживания, вива-

9

рии для здоровых и подопытных животных с вытяжными шкафами, автоклавная и моечное помещение. 2 этаж отводят под лабораторные помещения: для культиви-

рования культур клеток, для серологических и вирусологических исследований,

для аппаратуры, под термостатную, комнаты для заведующего лабораторией и со-

трудников. Здание, состоящее не менее чем из 5-6 комнат. Под лабораторию от-

водят светлое помещение. Комнаты, где работают с вирусным материалом, долж-

ны быть хорошо освещены и состоять из двух отделений (предбоксника не менее

4 м2 и бокса не менее 9 м2), разделенных стеклянной перегородкой с дверью. В

боксах: только столы, стулья и принадлежности для работы. Поверхность столов покрывают стеклом, пластиком или нержавеющей сталью, а над рабочим местом устанавливают бактерицидные лампы, у входа в бокс резиновый дезковрик, про-

питанный дезраствором. В предбокснике стерильные халаты, шапочки, косынки,

маски и тапочки, оборудование, соответствующее назначению бокса (термостат,

микроскоп и инвертированный микроскоп, холодильник, водяную баню, центри-

фугу и пр.).

Площадь лаборатории делят на «заразную» зону - осуществляются манипу-

ляции с патогенными биологическими агентами и их хранение, и «чистую» зону -

не проводятся манипуляции с патогенными биологическими объектами.

В «чистой» зоне располагаются: гардероб для верхней одежды; помещения для проведения подготовительных работ (препараторская, моечная, приготовле-

ние и розлив питательных сред и др.); стерилизационная; помещение с холодиль-

ной камерой или холодильниками для хранения питательных сред и диагностиче-

ских препаратов; комната отдыха и приема пищи; комната для работы с докумен-

тацией и литературой; кабинет заведующего; комната для надевания рабочей одежды; подсобные помещения; туалет.

В «заразной» зоне располагаются: помещение для приема и регистрации ма-

териала; боксы; комнаты для проведения бактериологических исследований;

комнаты для проведения микологических исследований; комнаты для проведения серологических исследований; комната для люминесцентной микроскопии; ком-

ната для проведения зооэнтомологических работ; комната для гельминтологиче-

10