- •Микробиологическая диагностика дифтерии
- •I. Микроскопический метод
- •II. Бактериологический метод
- •Определение протеолитических свойств
- •Ускоренные методы диагностики
- •Определение токсигенности дифтерийных бактерии
- •Дифференциация различных видов бордетелл
- •Микробиологическая диагностика коклюша
- •I. Микроскопический метод
- •II. Бактериологический метод
- •Основные различия между коклюшными палочками и бактериями септического бронхита.
- •Серологический метод диагностики коклюша
II. Бактериологический метод
Дифтерийные бактерии требовательны к питательным средам. Для их выделения и накопления используется комплекс специальных элективных и дифференциально-диагностических сред.
СВЕРНУТАЯ СЫВОРОТКА РУ: На этой среде бактерии дают шероховатые R-формы, напоминающие в комплексе шагреневую кожу.
ТЕЛЛУРИТОВЫЕ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНЫЕ СРЕДЫ
(Селективные питательные среды для коринебактерий, содержащие калия теллурит (К2ТеО3). Бесцветная соль теллура, находящаяся в питательной среде, восстанавливается коринебактериями в металл, окрашивающий колонии в черный цвет и угнетающий рост ряда сопутствующих микробов).
Дифтерийные бактерии обладают выраженной способностью восстанавливать теллуровокислый калий до металлического теллурита. Для выявления этой способности в среды добавляется дифференцирующий компонент-2% раствор теллурита калия следующего состава: дистиллированная вода-100 мл; теллурит калия (K2FeO4)-2 г. Раствор стерилизуют кипячением 30 минут. Для приготовления сред можно использовать также готовый 2% раствор теллурита калия в 40% глицерине, выпускаемый в ампулах для клинических теллуритовых проб.
СЫВОРОТОЧНО-ТЕЛЛУРИТОВЫИ АГАР: КРОВЯНО-ТЕЛЛУРИТОВЫЙ АГАР: СРЕДА КЛАУБЕРГА:
По характеру роста на теллуритовых средах удается отдифференцировать дифтерийные бактерии как внутри вида, так и от других микроорганизмов.
Дифференциация дифтерийных палочек от других микробов на теллуритовых и хинозольной средах |
||
Бактерии |
Характер роста на средах |
|
теллуритовых |
хинозольной |
|
Дифтерийные бактерии |
серые, розеткообразные |
синие |
тип гравис |
с радиальностью |
|
тип митис |
черные, матовые, гладкие |
|
тип интермедиус |
серо-черные, гладкие |
|
Ложнодифтерийные бактерии Гофмана |
серые, блестящие, выпуклые, конусовидные |
голубоватые |
Дифтериоиды Ксероза |
серо-черные, как истинные дифтерийные |
бесцветные |
Стафилококки |
черные, влажные, блестящие |
- |
ХИНОЗОЛЬНУЮ СРЕДУ БУЧИНА готовят по следующей прописи: на 100 мл воды добавляют 3 г хлористого натрия, 1,5 г, глюкозы, 1 мл 3% раствора цистина в 1% растворе соды, 2 мл водного раствора хинозола (1:1000), 0,08 г индикатора водноголубого, 4,0 сухого питательного агара. Смесь растворяют при нагревании. Устанавливают pH = 7,4-7,6. Охлаждают до +50 °C, добавляют 5 мл дефибринированной крови и, соблюдая стерильность, разливают в чашки Петри.
СРЕДА ТИНСДАЛЯ-САДЫКОВОЙ является селективной средой для дифтерийных бактерий. Посторонняя микрофлора на ней не растет или развивается очень скудно. Другим преимуществом среды является то, что она не нуждается в добавлении крови. Ее состав следующий: 100 мл мартеновского или обычного мясопептонного агара, 15-20 мл нормальной лошадиной сыворотки, 12 мл 1% раствора цистина (сначала растворить в 0,1 N р-ре NaOH, потом в воде), 11-12 мл 0,1N HCl (для нейтрализации NaOH); 1,8 мл 2% раствора теллуристого калия и 1,8 мл 2,5% раствора гипосульфита натрия.
Дифтерийные бактерии обладают рядом характерных биохимических признаков. Они хорошо ферментируют глюкозу и крахмал, высвобождают значительные количества активной цистиназы, выявляемой в пробе Пизу. Вместе с тем, названные микроорганизмы инертны в отношении сахарозы и не имеют фермента уреазы, обнаруживая отрицательную пробу Закса. Очень важным видовым признаком этих микробов является токсигенность. С эпидемиологической точки зрения, весьма существенное значение имеет серологическая неоднородность дифтерийных бактерий и наиболее широкое участие в распространении инфекции I и VI серологических типов. Это необходимо учитывать при диагностике дифтерии.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ УГЛЕВОДОЛИТИЧЕСКОИ АКТИВНОСТИ дифтерийных бактерий производится на комплексе углеводных сред, состоящих из 1% пептонной воды с pH-7,6, в которую добавляют различные углеводы: 0,5% сахарозы, 0,5% глюкозы, 0,2% крахмала. В качестве индикатора используется реактив Андреде (кислый фуксин, обесцвеченный щелочью).
Среды разливают по 2 мл и стерилизуют текучим паром 3 дня подряд :по 30 минут. До работы они бесцветны, при ферментации углеводов - краснеют.
На углеводных сывороточно-водных средах, основа которых состоит из дистиллированной воды (80 мл) и сыворотки (20 мл), углеводолитические свойства культур проявляются плохо и ферментация углеводов идет очень медленно.