Р и с. 1. Схемы постановки РИФ прямым и непрямым методами.

5 Учет результатов РИФ

При определении результатов реакции учитывают яркость, цвет и структуру свечения.

Интенсивность свечения оценивают по четырехкрестовой системе:

(++++) — яркая, сверкающая флуоресценция изумрудно-зеленого цвета;

(+++) — яркая флуоресценция зеленого цвета; (++) — слабая флуоресценция желтовато-зеленого цвета;

(+) — очень слабая флуоресценция неопределенного цвета;

(—) — объект не флуоресцирует.

9

Р и с. 2. Свечение клеток, пораженных вирусом

Кроме того, в бактериологии обязательно учитывают локализацию свечения. Бактерии, окрашенные люминесцирующей сывороткой, меченной изотиоцианатом флуоресцеина, имеют яркое зеленое свечение по периферии клетки в виде ободка или ореола, центральная часть светится слабо.

Такое свечение называется специфическим в отличие от неспецифического, когда все тело клетки светится равномерно. Чем более выпукло лежит бактерийная клетка в препарате, тем резче ободок.

Объяснить такое свечение можно тем, что с единицы площади «периферии» клетки на сетчатку глаза наблюдателя проецируется в несколько раз больше антител, чем с центральной части клетки микроба.

Следует иметь в виду, что у пластичных клеток (лептоспиры, вибрионы) нет контура или он заметен слабо.

У клеток, погруженных в тканевую жидкость, и у молодых бацилл сибирской язвы контур обычно выражен нерезко.

Таким образом, реакция оценивается:

(++++) — очень яркая сверкающая флуоресценция по периферии микробной клетки, четко контрастирующая с темным телом клетки;

(+++) — яркая флуоресценция периферии клетки; (++) — слабое свечение периферии клетки;

(+) — нет контрастного свечения периферии тела микробной клетки.

10