Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Культивирование клеток теория.docx
Скачиваний:
40
Добавлен:
21.09.2022
Размер:
81.84 Кб
Скачать

21.Устройства для приготовления питательных сред.

Ответ. При приготовлении сред следует использовать строго чистую посуду, которая не содержит посторонних веществ – щелочей или окислов, а также ржавчины. Оптимально использовать эмалированные, стеклянные или алюминиевые емкости. При необходимости приготовления больших объемов сред используют специальные варочные котлы или реакторы. Перед началом приготовления посуду тщательно моют, вытирают и просушивают. Стеклянные емкости предварительно необходимо прокипятить в хлор водородной кислоте. Посуду для приготовления питательных сред запрещено использовать для других целей. Основные компоненты большинства питательных сред – это продукты животного и растительного происхождения. Для приготовления питательных бульонов используют мясную воду или перевары от кислотного или ферментативного гидролиза. Чаще всего используют панкреатический перевар Хоттингера, гидролизаты казеина и кормовые дрожжи. На их основе готовят различные среды. Варка. Может осуществляться на открытом огне, на водяной бане, с использованием автоклава или варочного котла, которые нагреваются при помощи пара. Установление оптимальной величины pH. Выполняют с применением индикаторных бумажек. Прибор используемый для этой операции – потенциометр или компаратор, которые представляют собой штативы с отсеками для пробирок и набора стандартов pH. При этом в пробирках сравнивают цвета жидкостей с эталонным цветом. Осветление. Эта операция проводится, если в процессе приготовления среда становится мутной или темнеет. Для осветления можно использовать белок куриного яйца, смешанный с двойной порцией воды, который предварительно тщательно перемешивают и кипятят. Иногда для этих целей используют сыворотку крови. Разлив. Осуществляется в специальные пробирки, объемом 3-5 или 10 мл. Это могут быть также флаконы или колбы, специальные бутылки. Если для стерилизации сред используется температура выше 100°С, то их разливают в сухие чистые емкости. Если для стерилизации используется меньшая температура, то разлив осуществляют в стерильные емкости. Для разлива используют воронку, на конце которой есть резиновая трубка с зажимом Мора.Фильтрация. Проводят для жидких и расплавленных желатиновых сред. Для этого используют влажные фильтры на основе бумаги или материи. Агаровые среды труднее фильтровать из-за того, что их застывание происходит достаточно быстро. Вместо этого для агаровых сред чаще всего используют отстаивание, с расплавлением в автоклаве. Стерилизация. Режим стерилизации выбирают с учетом указаний к рецепту и в зависимости от компонентного состава. Примерная схема стерилизации приведена в таблице. Контроль. Стерильность контролируют, используя термостат. Для этого среду ставят в него на двое суток. При отсутствии при осмотре признаков роста среду считают стерильной и отправляют ее на химический контроль. Химический – следующий вид контроля, благодаря которому окончательно устанавливают pH. Его проводят в химической лаборатории. Следующий вид контроля – биологический, с помощью которого определяют питательные свойства среды. Хранение сред осуществляется при комнатной температуре, в специально предназначенных для этого шкафах. Составы с кровью или витаминами хранят в холодильниках.