Приложение наставление по применению набора компонентов «ХламиОрн» для выявления антигенов рода Chlamydia методом прямой иммунофлуоресценции

1. Общие положения

   1. Набор «ХламиОрн» предназначен для диагностики орнитоза, пситтакоза, пневмоний, абортов, полиартритов, энцефалитов, кератоконъюнктевитов домашних и сельскохозяйственных животных, вызванных микроорганизмами рода Chlamydia. Основным свойством диагностического набора «ХламиОрн» является способность выявлять антигены рода Chlamydia в биоматериале, взятом от больных животных.

   2. Диагностический набор представляет собой трехкомпонентную систему для постановки прямой иммунофлуоресценции с целью выявления хламидийных антигенов в клинических образцах от больных животных и предназначен для проведения 90 анализов.

2. Состав набора.

   1. Набор включает:

      1. Лиофилизированные моноклональные антихламидийные иммуноглобулины, меченные флуоресцеинизотиацианатом, с синькой Эванса и азидом натрия, сухая гомогенная аморфная масса синевато-сиреневого цвета (компонент №1) – 1 флакон по 0,1 см³.

      2. Растворитель для лиофилизированных иммуноглобулинов, прозрачная бесцветная жидкость (компонент №2) – 1 флакон по 4 см³.

      3. Жидкость для заключения препарата, вязкая прозрачная маслянистая жидкость (компонент №3) – 1 флакон по 4 см³.

   2. Набор хранят в сухом, темном месте при 2-8 °С. Срок годности набора 18 мес. со дня выпуска при соблюдении указанных условий хранения. При нарушении целостности флаконов набора, изменении цвета его компонентов, нарушении этикеток набор бракуют и уничтожают.

3. Приготовление реагентов.

   1. Приготовление растворов №1 и 2. Вскрывают флакон с моноклональными антихламидийными антителами (комп.1) и флакон с растворителем (комп.2), смешивают и растворяют содержимое в течение 1-2 мин при комнатной температуре, слегка встряхивая флакон. Растворенный реагент хранят в темноте при температуре 2-8 °С в течение 6 недель. Замораживание допускается.

4. Приготовление мазков для исследования.

   1. Отбор материала.

   2. Приготовление мазка-отпечатка. Непосредственно после взятия материала готовят мазок-отпечаток, касаясь поверхности лунки предметного стекла. Приготовленный мазок высушивают на воздухе.

   3. Фиксация мазка. Высушенный мазок фиксируют в 96%-ном этаноле в течение 5 мин, либо наносят на мазок 0,1 см³ацетона до полного испарения. Стекло с фиксированным мазком может храниться при температуре минус 10 °С не более 7 сут.

5. Проведение реакции прямой иммунофлуоресценции (ПИФ).

   1. Постановка ПИФ.

      1. На фиксированный препарат с помощью микропипетки наносят 30 мкл меченных иммуноглобулинов и помещают во влажную камеру на 30 мин при 37 °С.

      2. Препарат промывают проточной водопроводной водой и высушивают на воздухе.

      3. На подсушенный препарат наносят 30 мкл жидкости для заключения препаратов, закрываят чистым покровным стеклом, помещают между двумя слоями фильтровальной бумаги и с усилием надавливают на покровное стекло для удаления пузырьков воздуха.

      4. Микроскопирование препаратов. Препарат микроскопируют в люминесцентном микроскопе при комбинации светофильтров С3 24-3. ФС 1-2, БС 8-3 при использовании окуляра 10 и объектива с маслянной иммерсией90.

   2. Учет результатов ПИФ.

      1. Результат считается положительным, если в препарате регистрируют ярко-зеленое свечение в виде образований правильной круглой формы с ровными краями, размером около 300 мкм (приблизительно 1/100 размера интактной клетки), расположенных внеклеточно. Эпителиальные клетки окрашены в ярко-красный цвет.

      2. Результат считается отрицательным, если в препарате отсутствует специфическое свечение при обязательном наличии не менее 10 эпителиальных клеток в целом во всех просмотренных полях.

      3. Животных, в пробах от которых получены положительные результаты ПИФ, считают инфицированными хламидиями.

6. Санитарные правила работы. Работу с материалом проводят в соответствии с «Правилами работы и охраны труда в ветлабораториях», утвержденными 14.01.75.

7. Правила представления рекламации.

   1. В случае несоответствия препарата указанным в настоящем наставлении требованиям, а также при отсутствии реакции с положительным контролем, применение диагностикума данной серии прекращают и один набор направляют с нарочным (или пересылают) во Всероссийский государственный научно-ис­сле­до­ва­тель­ский институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (123922, Москва, Д-22, Звенигородское шоссе, д.5)в соответствие с указанием ГУВ Минсельхоза России «О порядке предъявления рекламации на ветпрепараты отечественного производства и закупаемые по импорту» от 8 мая 1992 г. № 22-7/28. Второй экземпляр сопроводительного письма направляют на предприятие-изготовитель.

НТД на «ХламиОрн» утверждена Департаментом ветеринарии 16.05.1997 № 13-7-2/953 ТУ 9388-070-00008064-97