2. Собственные исследования

2.1. Материал и методы исследования

Работа выполнялась в условиях кафедры хирургии Воро­нежского государственного аграрного университета имени К.Д. Глинки (ВГАУ) в период с 1999 по 2002 год. Под наблюдением находились беспородные собаки в возрасте 4-5 лет, обоих полов, массой тела 25-30 кг, подобранных по принципу парных анало­гов.

Гематологические, биохимические, бактериологические, морфологические, гистохимические, электронномикроскопиче­ские исследования проводили в лаборатории кафедры хирургии; в Воронежской областной ветеринарной лаборатории; в отделах: микробиологии, вирусологии и иммунологии; физико-

химических методов исследований ВНИВИ патологии, фармако­логии и терапии (г. Воронеж), а также в Воронежском государст­венном техническом университете.

Животных, подобранных для эксперимента, разделили на 3 группы по 10 животных в каждой:

1 группа (опытная). Гнойные раны этих животных лечили комплексным препаратом на основе полимерного геля с лигфо­лом и новокаином.

2 группа (опытная). Инфицированные раны в этой группе собак лечили полимерным гелем с метацидом.

3 группа (контроль). Гнойные раны у этих животных лечили бальзамическим линиментом по А.В. Вишневскому.

Всем экспериментальным животным в области бедра с лате­ральной стороны готовили операционное поле по Пирогову, за­тем под местной инфильтрационной анестезией (Э.И. Веремей, В.М. Власенко, А.Н. Елисеев и др., 2001) по трафарету наносили резаные раны, площадью 400 мм2. Скальпелем с ограничителем заданной глубины (до 3 см) рассекали кожу, фасции и мышцы. После остановки кровотечения рану инфицировали методом орошения, 2 мл взвеси из суточной культуры патогенного Staphy­lococcus aureus (1 мл взвеси содержал 1 млрд. микробных тел). Через 48 часов в ране наблюдалось выраженное острое гнойное воспаление. Раны заживали по вторичному натяжению, без нало­жения сближающих швов (П.И. Толстых, 1976; А.В. Николаев, 1979; О.Н. Разданов, 1987; Б.Н. Арутюнян, 1990).

Планиметрические методы исследования проводили по ме­тодике Л.П. Поповой (1942), для чего контуры раны обводили на стерильном стекле, прижатом к последней, а затем переносили на миллиметровую бумагу и определяли площадь исследуемой ра­ны. Уменьшение площади раны измеряли на 5,10,12,15 и 20 су­тки. Полученные данные обрабатывали методом вариантной ста­тистики по Стьюденту, вычисляли процент ускорения заживле­ния ран у животных опытной серии по отношению к контролю по формуле:

(t2 - t|) х 100 : t], где: t{ - время полного заживления в кон­трольной серии; t2 - время полного заживления в опытных сери­ях.

По данной формуле определяли также темп очищения ран от гнойных и некротических масс в зависимости от применяемо­го метода лечения.

Отношение уменьшения раневой поверхности опытной се­рии по сравнению с контролем вычисляли по формуле:

(S2 - S1) х 100 : S1, где: S1 - площадь раны в контрольной серии; S2 - площадь раны в опытных сериях.

Цитологический анализ мазков-отпечатков проводили по М.П. Покровской и М.С. Макарову (1942). Мазки-отпечатки го­товили путем осторожного 2-х кратного прикладывания стериль­ного предметного стекла к одному и тому же участку раневой по­верхности, предварительно очистив его сухим марлевым тампо­ном. Отбор материала проводили на 3,5,7 и 10 сутки после начала лечения. Мазки-отпечатки сушили на воздухе, фиксировали спирт-эфиром и окрашивали азур-эозином по методу Романов­ского-Гимза.

Для бактериологического исследования взятый после обычного туалета с 1 см раневой поверхности на границе со здо­ровой тканью тампоном материал помещали в пробирку с 0,5 мл стерильного физиологического раствора. Тампон ополаскивали в жидкости путем встряхивания пробирки в течение 10 минут, за­тем отжимали о внутренние стенки пробирки и удаляли. Жид­кость многократно перемешивали пипеткой. Отдельной пипеткой на чашку с питательными средами МПБ, МПА с 8-10% раство­ром хлорида натрия и 5% дифибринированной крови, агар Эндо и мясопептонный печеночный бульон Китт-Тароцци. После инку­бации посевов при 37 градусах в течение 18-20 часов подсчиты­вали общее количество микробных колоний на твердых пита­тельных средах, а в среде Китт-Тароцци - наличие роста анаэро­бов. Для определения типов микробов из выросших колоний про­водят микроскопию препаратов - мазков с последующей окра­ской по Грамму (В.Л. Байрак, В.М. Беляев, С.С. Гительсон, 1980).

Чувствительность выделенных культур к антибиотикам оп­ределяли методом дисков по общепринятой методике.

Для морфологических и биохимических исследований кровь брали из V. Saphena утром перед кормлением, нанесением ран и спустя 3,7,10,15 и 20 суток от начала лечения.

Исследования проводили различными методами. Количест­во эритроцитов определяли с помощью счетчика микрочастиц «Пикоспель» (Франция), гемоглобин - гемометром Сали. Лейко­грамму выводили по общепринятой методике в мазках крови, ок­рашенных по Романовскому-Гимзе (И.П. Кондрахин, Н.В. Кири­лов, А.Г. Малахов и др., 1985).

В сыворотке крови определяли общий белок рефрактомет­рически, белковые фракции - нефелометрическим методом по Олду и Маккорду в модификации С.А. Карпюка (1962).

Для гистологического исследования кусочки тканей из вос­паленных участков ран животных фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина. После проводки в спиртах возрастаю­щей крепости материал заливали в целлоидин - касторовое масло - парафин. Резали на ротационном микротоме. Срезы толщиной 8 мкм окрашивали гематоксилином и эозином по Ван-Гизону. Фибрин выявляли по Шуенинову, бактерии - карболовым тиони­ном по Николя. Для дифференцировки клеточных элементов кро­ви срезы окрашивали азур П - эозином (Э. Пирс, 1962; Р. Лилли, 1969; Г.А. Меркулов, 1969; А.И. Кононский, 1976).

Для электронномикроскопического исследования образцы тканей, сразу же после иссечения из раны фиксировали в 2,5% глютаровом альдегиде на 0,114 М коллоидиновом буфере на хо­лоде с последующей дофиксацией в 1%-ном фиксаторе на том же буфере. Материал обезвоживали в ацетоне возрастающей кон­центрации и заливали в ЭПОН - 812. Срезы готовили на ультра­микротоме «Тесла», контрастировали цитраном свинца и уранил­ацетатом. Просматривали в электронном микроскопе БС-500 (ЧССР).

Для сканирующей электронной микроскопии материал фик­сировали в 2,5% растворе глютаральдегида на 0,2 М какодилат­ном буфере. Отмытые объекты постфиксировали 2% раствором четырехокиси осмия в 0,2 М какодилатном буфере. Постфикси­рованный материал отмывали в дистиллированной воде, а затем обезвоживали в спиртах восходящей крепости; из абсолютного этанола объект проводили через серию амилацетатэтаноловых смесей восходящей концентрации. Обезвоженный материал вы­сушивали в сжиженном N20 (36,5° С; 71,4 атм.). Поверхность объекта покрывали электропроводящим слоем, состоящим из золота и просматривали в электронном микроскопе «Тесла» БС-300 (ЧССР). Фотографировали на «Фото-64».

Результаты исследований подвергнуты математической об­работке с использованием стандартных программ статистическо­го анализа для IBM PC. Достоверность результатов определялась по параметрическому критерию Стьюдента и непараметрическо­му критерию Вилкоксона-Манна-Уитни (И.А. Ойвин, 1960; Е.В. Гублер, А.А. Генкин, 1973; А.И. Венчиков, 1974; В.Ю. Урбах, 1975).