Комплемент: краткое определение
Комплементом называют сложный комплекс белков, действующий совместно для удаления внеклеточных форм патогена; система активируется спонтанно определенными патогенами или комплексом антиген: антитело. Активированные белки либо непосредственно разрушают патоген (киллерное действие), либо обеспечивают лучшее их поглощение фагоцитами ( опсонизирующее действие ); либо выполняют функцию хемотаксических факторов, привлекая в зону проникновения патогена клетки воспаления .
Комплекс белков комплемента формирует каскадные системы, обнаруженные в плазме крови. Для этих систем характерно формирование быстрого, многократно усиленного ответа на первичный сигнал за счет каскадного процесса. В этом случае продукт одной реакции служит катализатором последующей, что в конечном итоге приводит к лизису клетки или микроорганизма.
Существует два главных пути (механизма) активации комплемента - классический и альтернативный.
Классический путь активации комплемента инициируется взаимодействием компонента комплемента С1q с иммунными комплексами ( антителами, связанными с поверхностными антигенами бактериальной клетки); в результате последующего развития каскада реакций образуются белки с цитолитической (киллерной) активностью, опсонины, хемоаттрактанты . Такой механизм соединяет приобретенный иммунитет (антитела) с врожденным иммунитетом (комплемент).
Альтернативный путь активации комплемента инициируется взаимодействием компонента комплемента С3b с поверхностью бактериальной клетки; активация происходит без участия антител. Данный путь активации комплемента относится к факторам врожденного иммунитета.
В целом система комплемента относится к основным системам врожденного иммунитета , функция которых состоит в том, чтобы отличить "свое" от "не своего". Эта дифференциация в системе комплемента осуществляется благодаря присутствию на собственных клетках организма регуляторных молекул, подавляющих активацию комплемента.
Реакция связывания комплемента вируса герпеса
Основные принципы РСК идентичны применяемым в вирусологии и микробиологии.
Эту реакцию хотя и нельзя противопоставлять реакции нейтрализации - скорее они дополняют и корригируют друг друга, но она может быть использована для диагностики, так как комплементсвязывающие антитела появляются в первые дни болезни.
В качестве источников антигена используют мозг зараженного животного (мыши), хорионаллантоисную оболочку куриного эмбриона или различные культуры ткани, инфицированные вирусом герпеса. Методика приготовления антигена может быть различной, например, с помощью повторного замораживания и оттаивания. Контрольный антиген приготавливают таким же методом.
Диагностическую ценность представляет исследование парных сывороток, то есть взятых в начале заболевания и в период выздоровления. Кроме того, в опыте используют сыворотки реконвалесцентов и иммунных животных.
Отсутствие или малое содержание комплементсвязывающих антител в первых сыворотках и 2-4 кратное повышение титра во вторых пробах сыворотки указывают на перенесенную герпетическую инфекцию.
Некоторые авторы считают, что РСК - более надежный тест, чем реакция нейтрализации, так как уловить нарастание титра нейтрализующих антител при рецидивирующем герпесе бывает очень трудно.
Повышение титра антител появляется при первичной герпетической инфекции в период выздоровления, поэтому для постановки лабораторного диагноза следует установить: выделение вируса из пораженных участков; обнаружение гигантских клеток с внутриядерными включениями; нарастание титров специфических антител в период выздоровления.
Опытами по изоляции вируса герпеса от больных с первичным вульвовагинитом и изучением антител к гомологичному и гетерологичному штаммам вируса герпеса было показано, что сыворотки, взятые от больных в острой фазе, ведут себя как контрольные. Реконвалесцентные сыворотки обладали высокой нейтрализующей способностью.
Для лабораторной диагностики ВПГ-1 или ВПГ-2 следует проводить культуральные, цитологические, серологические, электронно-микроскопические и иммуннофлюоресцентные исследования. В настоящее время возможно дифференцировать два типа вируса простого герпеса; ВПГ-1 вызывает инфекции полости рта, губ, кератоконъюнктивит, острый некротический энцефалит, ВПГ-2 - герпес гениталий и генерализованную инфекцию новорожденных детей. Идентификацию ВПГ-1 или ВПГ-2 производят с помощью реакции нейтрализации, а также по способности образовывать бляшки в первичной клеточной культуре куриного эмбриона, выращиваемой в 60-миллилитровых чашках Петри. Средой для покрытия бляшек служат среда Игла (MEM), содержащая 5%-ной телячьей сыворотки, 0,9%-ного агара, 0,5 мг/мл прота-минсульфата и антибиотики. Инкубацию осуществляют при температуре 37°С в присутствии 5%-ной углекислоты.
Через 3 дня агар покрывают 3 мл нейтрального красного (1:7500) в фосфатно-буферном растворе (рН 7,2), который добавляют в каждую чашку. Бляшки подсчитывают через 4-5 ч.
На основе реакции микронейтрализации удалось дифференцировать по степени нейтрализации штаммы ВПГ-1 от ВПГ-2. Сыворотки больных в острой стадии и реконвалесцентов в разведении 1:10 испытывают на их нейтрализующую силу. Смесь 100 ЛД50 вируса с сыворотками выдерживают в течение часа при комнатной температуре и вводят интрацеребрально по 0,03 мл мышам или по 0,5 мл в чувствительные тканевые культуры или в скарифицированную роговицу кролика.
Для получения специфических сывороток вирусом герпеса, выращенным на культуре клеток, проводят гипериммунизацию кроликов массой 2-2,5 кг внутривенно и подкожно по 8-9 инъекций с интервалами 3-5 дней. Спустя неделю после последней иммунизации кроликов тотально обескровливают и получают сыворотки, которые инактивируют при 56°С в течение 50 мин и испытывают в реакции нейтрализации. Для опытов используют кроликов, морских свинок, белых мышей и культуры ткани.
Koзлoвa В.И., Пyxнep А.Ф.