5% (5 Мл крови на 100 мл питательной среды) дефибринированной

бараньей, лошадиной или кроличьей крови, цитратной или

дефибринированной крови человека без антибактериальных препаратов.

Смесь тщательно перемешивают, чтобы не образовалось пены,

и разливают в стерильные чашки Петри, предварительно подогретые в

термостате, слоем 3-4 мм. Слой агара должен быть равномерно

окрашен в красный цвет. Хранят не более двух недель в целлофановых

мешках при 4°-6°С.

Агар с гретой кровью (шоколадный агар)

Принцип. Прогревание крови способствует освобождению из

эритроцитов факторов роста X (гемин) и V

(никотинамидадениндинуклеотид), необходимых для культивирования

гемофилов.

Приготовление. 1. К 100 мл расплавленного и охлажденного до

80°С питательного агара, рН 7,4, добавляют 10 мл дефибринированной

крови лошади или человека (без консервантов), тщательно

перемешивают, после чего помещают в водяную баню и, постоянно

встряхивая, держат при температуре 70°С-80°С до тех пор, пока цвет

агара не станет шоколадным (25-30 мин.).

2. 5 мл дефибринированной крови кролика и 100 мл питательного

агара тщательно взбалтывают и ставят на 2-3 минуты в водяную баню

при 80°С. Затем добавляют еще 5 мл крови и вновь ставят в водяную

баню на 2-3 минуты. При приготовлении шоколадного агара следует

обратить внимание на правильный прогрев, при слишком слабом

прогреве агар будет иметь коричнево-красный цвет, при слишком

сильном - темно-коричневый. Шоколадный агар должен иметь

светло-коричневую окраску. Среду разливают в чашки Петри. Хранят

не более двух недель в целлофановых мешках при 4°-6°С.

Сахарный бульон

Приготовление среды. К 100 мл питательного бульона, рН

7,2-7,4, прибавляют 1 г глюкозы. Стерилизуют текучим паром 3 дня

подряд по 30 минут или при 0,5 атм. 30 минут.

Сывороточный бульон

Приготовление среды. К 80 мл стерильного питательного бульона,

рН 7,2-7,4, стерильно добавляют 20 мл лошадиной или бычьей

сыворотки. Среду разливают в пробирки по 5 мл, выдерживают 2 суток

в термостате для контроля стерильности, а затем хранят в

холодильнике.

Сывороточный агар

Приготовление среды. В качестве основы используют 1,5% агар,

рН 7,4, тиамин-цистин-глутаминовый; для коринебактерий -

питательный агар, рН 7,6. К 90 мл расплавленного и остуженного до

температуры 50°С агара добавляют 10 мл инактивированной при

температуре 56°С в течение 30 минут сыворотки, консервированной

хлороформом, или без консерванта. После перемешивания среду

разливают в чашки. Среда годна к употреблению только в течение 48

часов при хранении ее в холодильнике. Перед посевом чашки,

хранившиеся в холодильнике, должны быть подогреты до температуры

37°С.

Среда Тароцци

Приготовление среды. Нежирное мясо или печень (можно плаценту)

нарезают мелкими кусочками и заливают трехкратным количеством

питательного бульона, рН 7,4-7,6. Кипятят 30 минут. Затем бульон

фильтруют, а кусочки мяса или печени промывают на сите

водопроводной водой и просушивают фильтровальной бумагой.

Распределяют во флаконы по 15-20 г (8-10 кусочков) и в пробирки по

2-3 кусочка печени или мяса и заливают по 300 мл бульона во

флаконы и по 5-6 мл в пробирки. Стерилизуют 30 мин. при 1 атм.

Желточно-солевой агар

Приготовление среды. В качестве основы используют элективный

солевой агар для стафилококков. По прописи, указанной на этикетке,

готовят 1,8-2% агар, рН 7,2-7,4. К расплавленному и охлажденному

до 45°-50°С агару, соблюдая правила асептики, добавляют 20%

желточной взвеси (асептически извлеченный из яйца желток

взбалтывают с 200 мл изотонического раствора хлорида натрия).

Смешивают тщательно агар с желточной взвесью, разливают по 20 мл в

чашки Петри. Хранят в холодильнике в течение двух недель.

Среда Хью-Лейфсона

Принцип. Среда позволяет уловить изменения рН даже при слабом

окислении углеводов, что достигается заменой аминокислот

питательной среды пептоном. В этой среде отсутствуют щелочные

продукты расщепления аминокислот, которые могут нейтрализовать

кислые продукты при утилизации углеводов.

Ингредиенты

Пептон - 2,0 г

Натрий хлористый - 5,0 г

Калий фосфорнокислый двузамещенный (К2НРО4) - 0,3 г

Глюкоза - 10,0 г

Агар - 3,0 г

Бромтимоловый синий - 0,03 г

Дистиллированная вода - 1000,0 мл

Приготовление среды. К воде прибавляют пептон, натрий

хлористый и агар. Смесь подогревают до расплавления агара. Затем

добавляют калий фосфорнокислый двузамещенный и глюкозу. Продолжают

кипятить 2-3 минуты. Смесь подщелачивают 20% раствором едкого

натра до рН 7,4-7,5, доводят объем среды до первоначального и

добавляют 3 мл 1% водного раствора бромтимолового синего. Среду

фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают по 10-15 мл в

стерильные пробирки. Стерилизуют при 0,5 атм. 20 минут. Цвет среды

до стерилизации - синий, после автоклавирования -

травянисто-зеленый, рН 7,1-7,2. При кислом рН среда желтеет.

Среда Сабуро

Приготовление. На 1 л дистиллированной воды 10,0 г пептона,