1. Трехсахарная среда Олькеницкого

Ингредиенты

Питательный агар, рН 7,2-7,4 - 1000 мл

Лактоза - 1,0 г

Аммоний-железо (II) сульфат (Соль Мора) - 0,2 г

Натрий тиосульфат (Гипосульфит) - 0,3 г

Сахароза - 10,0 г

Глюкоза - 1,0 г

Мочевина - 10,0 г

Феноловый красный, 0,4% водн. р-р - 4,0 мл

Приготовление раствора индикатора: феноловый красный - 0,1 г

растворяют в 25,0 мл стерильной дистиллированной воды. Раствор

можно хранить в холодильнике до 10 дней.

Приготовление среды. Соль Мора и гипосульфит растворяют

предварительно в дистиллированной воде в пробирках, углеводы и

мочевину также растворяют отдельно в дистиллированной воде в колбе

на водяной бане. Все ингредиенты добавляют к расплавленному агару,

размешивают и фильтруют через стерильную марлю, устанавливают рН

7,2-7,4; вносят индикатор и разливают по 5-6 мл в пробирки.

Стерилизуют при 0,5 атм. 20 минут или текучим паром 3 дня

подряд по 20 минут. Среду охлаждают в скошенном положении для

получения столбика высотой 2,5 см и косяка длиной 4 см. Готовая

среда - бледно-розового цвета.

Ход исследования

Сеют уколом в столбик и штрихом по скошенной поверхности.

Инкубируют при 37°С 18-20 часов.

Кислотообразование вызывает появление желтой окраски,

разложение мочевины (увеличение рН) - покраснение; образование

сероводорода приводит к почернению в столбике.

2. Трехсахарная среда с мочевиной

(Модификация среды Олькеницкого)

Ингредиенты

Среда Гисса с лактозой и индикатором - 45,0 г

ВР (сухая)

Глюкоза - 1,1 г

Сахароза - 10,0 г

Мочевина - 10,0 г

Натрий тиосульфат (гипосульфит) - 1,0 г

Аммоний-железо (II) сульфат (Соль Мора) - 0,2 г

Дистиллированная вода - до 1000 мл.

Приготовление. Среду разливают в пробирки по 5-7 мл,

стерилизуют при 0,5 атм. 15 минут.

Ход исследования

Посев и инкубацию проводят как для среды Олькеницкого.

Кислотообразование изменяет цвет среды на голубой (до интенсивного

синего); культуры, гидролизующие мочевину, не изменяют окраски

среды или придают ей розовато - красный цвет; образование

сероводорода вызывает почернение среды в столбике.

3. Среда Кристенсена с мочевиной

Ингредиенты

Раствор I.

Пептон - 1,0 г

Натрий хлористый - 5,0 г

Глюкоза - 1,0 г

Калий фосфорнокислый однозамещенный - 2,0 г

Феноловый красный (раствор 1:500) - 6,0 мл

Мочевина - 20,0 г

Дистиллированная вода - 100,0 мл

рН 6,8-6,9, стерилизуют фильтрованием через фильтр Зейтца.

Раствор II.

Агар-агар - 15,0 г

Дистиллированная вода - 900,0 мл

Стерилизуют при 0,5 атм. 15 минут.

Приготовление. К охлажденному до 50-55°С раствору II добавляют

100 мл раствора I, перемешивают, разливают асептически в

стерильные пробирки, среду охлаждают в наклонном положении для

получения столбика и косяка. Готовая среда желтого цвета.

Ход исследования

Делают массивный посев по всей поверхности косяка. Инкубируют

при 37°С. Производят учет через 2, 4, 6 часов и на следующий день.

В отдельных случаях при отрицательных результатах наблюдают до 4-7

дней (возможны замедленные реакции). Положительный результат -

красное окрашивание.

4. Среда для выявления декарбоксилаз аминокислот

Ингредиенты

Пептон - 5,0 г

Дрожжевой экстракт - 3,0 г

или

Аутолизат дрожжей - 12,0-15,0 мл

или

Диализат дрожжей - 12,0-15,0 мл

Глюкоза - 1,0 г

Бромтимоловый синий, 1,6% спиртовой раствор - 1,0 мл

Дистиллированная вода - 1000 мл

Приготовление. Основу среды делят на 3 части, к одной из них

добавляют 1% L-лизина, ко второй части - 1% L-орнитина; третью

часть используют как контрольную (без добавления аминокислот). При

использовании DL-аминокислот их добавляют в концентрации 2%, так

как энтеробактерии проявляют активность в отношении L-изомеров.

Все порции среды разливают по 2-3 мл в серологические

пробирки. Стерилизуют при 0,5 атм. 30 минут. Готовая среда имеет

светло-зеленый цвет.

Ход исследования

Посев производят минимальными дозами с косяка 16-18-часовой

агаровой культуры в среды с аминокислотами и в контрольную среду.

После посева во все пробирки вносят стерильное вазелиновое масло

(слоем 4-5 мм) для получения более надежных и четких результатов.

Инкубируют при 37°С. Большинство положительных реакций у

энтеробактерий выявляется на первые-вторые сутки, предельный срок

наблюдения 4 суток.

При декарбоксилировании аминокислот, положительном результате,

среда приобретает синий цвет за счет накопления щелочных

продуктов. При отрицательном результате цвет среды желтый; в

контрольной пробирке должна быть желтая окраска среды (в

результате подкисления среды за счет ферментации глюкозы).