Контроль инертности хроматографических систем для повышения точности количественного анализа методом стандартной добавки

Морозова Т.Е.

Санкт-Петербургский государственный университет,

Санкт-Петербург, Россия.

Аспирант 3г.

t-morozova07@yandex.ru

Научный руководитель: Зенкевич И.Г.

Важнейшим вариантом такого способа количественного хроматографического анализа как метод внутреннего стандарта является метод стандартной добавки, в котором в качестве стандартов выбирают соединения уже присутствующие в образце. В этом способе не требуется предварительных операций градуировки приборов или определения градуировочных коэффициентов аналитов. Главным же преимуществом этого метода является то, что он позволяет компенсировать сорбционные эффекты матиц, которые значительно искажают результаты определения содержания целевых аналитов [1].

При использовании вместо одной нескольких последовательных стандартных добавок точность определений методом стандартной добавки закономерно повышается, так как такой вариант позволяет учитывать не только эффекты матриц, но и возможную нелинейность детектирования, а также недостаточную инертность хроматографических систем [2]. Последний эффект, также приводящий к существенному искажению результатов количественного анализа, в наибольшей степени проявляется при определении следов полярных аналитов.

Настоящая работа посвящена проверке применимости метода последовательных стандартных добавок (на разных примерах) для компенсации матричных эффектов, нелинейности детектирования и недостаточной инертности хроматографических систем с использованием различных алгоритмов обработки данных.

Литература

[1] Зенкевич И.Г., Морозова Т.Е. Аналитика и контроль 14(3), 164-171 (2010)

[2] Зенкевич И.Г., Макаров Е.Д., Макаров А.А., Климова И.О. Аналитика и контроль 10(2), 175-183 (2006)

Химическое повышение стабильности днк-диагностики, основанной на использовании гексахлорфлуоресцеин- меченных олигонуклеотидов

Мосина А.Г.

Московский государственный университет тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова,

Москва, Россия.

Аспирант 3г.

AlenaGMosina@yandex.ru

Научный руководитель: Позмогова Г.Е.

Прогресс в области разработки и внедрения медицинских микроаналитических методов диагностики, например, в генодиагностике, в значительной мере обусловлен использованием олигодезоксирибонуклеотидов, снабженных флуоресцентными метками. Полимеразная цепная реакция в реальном масштабе времени (РВ-ПЦР), подразумевает, в частности, использование синтетических олигодезоксирибонуклеотид–зондов. Зонд избирателен к определённому участку целевой ДНК и снабжен одновременно флуоресцентной меткой и гасителем флуоресценции так, что и в свободном состоянии, и в комплексе с ДНК флуоресценция погашена. В процессе ПЦР происходит расщепление зонда, а регистрируемый сигнал флуоресценции возрастает в зависимости от исходного содержания мишени. Чувствительность и достоверность метода РВ-ПЦР во многом определяется качеством и надежностью работы зондов.

Гексахлорфлуоресцеиновая метка (HEX) широко используется в ПЦР-диагностике, в особенности, в мультиплексных вариантах. Нами было показано, что все зонды, несущие HEX-метку, содержат 20-30 % примеси, обладающей искаженными флуоресцентными свойствами. Было обнаружено, что в структуре HEX гетероциклический кислород замещается в процессе постсинтетического аммонолиза на азот с образованием акридинового (ACR-) производного. Некоторые HEX-олигонуклеотиды не удается эффективно отделить от ACR-содержащих примесей с помощью обращено-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ОФ-ВЭЖХ). Мы решили, что нужно изменить метод деблокирования так, чтобы гексахлорфлуоресцеиновый флуорофор не модифицировался. Было установлено, что добавление различных количеств трет-бутиламина к концентрированному водному раствору аммиака значительно препятствуют образованию ACR-производных. В результате, профили хроматографического разделения становятся проще и выходы НЕХ-зондов увеличиваются более чем на 25%.