Опыт 5. Реакция Адамкевича.

Реакция Адамкевича позволяет обнаружить в белке триптофан. Эта реакция основана на способности триптофана в кислой среде реагировать с глиоксиловой кислотой с образованием продуктов конденсации, окрашенных в красно-фиолетовый цвет.

В пробирку вносят 5 капель раствора белка и 5 капель ледяной концентрированной уксусной кислоты, в которой как примесь содержится глиоксиловая кислота. Раствор вначале слегка нагревают, затем охлаждают и по стенке пробирки (осторожно!) приливают 10 капель концентрированной серной кислоты таким образом, чтобы не произошло смешивания жидкостей. Через несколько минут на границе двух слоев появляется красно-фиолетовое кольцо.

Напишите уравнение реакции конденсации триптофана с глиоксиловой кислотой.

Опыт 6. Реакция Сакагучи.

Реакция Сакагучи позволяет обнаружить в белке аминокислоту аргинин. Эта реакция основана на способности присутствующей в молекуле аргинина гуанидиновой группировки окисляться в щелочной среде (в присутствии гипобромита натрия) и образовывать с α-нафтолом хиноидные соединения, окрашенные в красный цвет.

К 5 каплям раствора белка приливают 5 капель 10%-ного раствора гидроксида натрия, 3 капли 0,1%-ного спиртового раствора α-нафтола и по каплям 2%-ный раствор гипобромита натрия. Жидкость окрашивается в красный цвет.

Напишите уравнение реакции взаимодействия окисленной гуанидиновой группировки с α-нафтолом с образованием окрашенного хиноидного соединения.

Опыт 7. Реакция Фоля.

Реакция Фоля позволяет обнаружить в молекуле белка серусодержащие аминокислоты (цистеин, цистин). Реакция основана на способности аминокислот, содержащих серу, в щелочной среде при нагревании образовывать сульфид натрия, который с плюмбитом натрия дает черный или бурый осадок сульфида свинца.

1-2 мл раствора белка кипятит 2-3 минуты с двойным объемом 10%-ного раствора гидроксида натрия. Затем прибавляют 1-2 капли 5%-ного раствора ацетата свинца. Выпадает черный или бурый осадок.

Напишите уравнения реакций взаимодействия цистеина с гидроксидом натрия, образования плюмбита натрия и образования сульфида свинца.

Результаты проведенных опытов оформите в виде следующей таблицы:

№ п/п

Название реакции

Используемые реактивы

Наблюдаемое окрашивание

Какие группы или аминокислоты обнаружены в белке

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 5.

КОАГУЛЯЦИЯ БЕЛКОВ.

Белки в растворах находятся в коллоидном состоянии. Устойчивость белковой молекулы в растворе обусловлена наличием двух факторов – заряда белковой молекулы и гидратной оболочки вокруг нее.

Удаление этих факторов приводит к сближению и склеиванию коллоидных частиц, вследствие чего увеличивается их размер и они выпадают в осадок. Такой процесс называется коагуляцией белков. Различают обратимую и необратимую коагуляцию.

Обратимая коагуляция

Если после устранения факторов, вызвавших коагуляцию, белок-коллоид может снова возвратиться в прежнее природное, т.е. нативное, состояние, то такая коагуляция называется обратимой.

Обратимая коагуляция белков под действием солей щелочных и щелочноземельных металлов называется высаливанием.

Для высаливания чаще всего используют сульфат аммония, отличающийся очень высокой растворимолстью в воде. Иногда более удобно использовать сульфат натрия, хлорид натрия и другие соли.

Высаливание происходит потому, что ионы, образующиеся в большом количестве при диссоциации солей щелочных металлов, строят свои гидратные оболочки за счет разрушения таких же оболочек у молекул белка. Этому также способствует адсорбция ионов солей на заряженных молекулах белка, что приводит к снижению зарядов этих молекул.

При разбавлении коагулированных растворов белка водой белок вновь переходит в растворенное состояние. После высаливания белка можно удалить диализом соль и получить белковой препарат в очищенном виде.

Некоторые белки высаливаются при разных концентрациях тех или иных солей, поэтому метод высаливания используется для фракционирования белков и получения их в кристаллическом виде.