- •Принципы культивирования микроорганизмов Знакомство с микробиологической лабораторией. Микроскопические методы исследования морфологии бактерий и грибов.
- •Знакомство с микробиологической лабораторией
- •Основные методы выявления микроорганизмов
- •Оборудование микробиологической лаборатории
- •Основные правила поведения и работы в микробиологической лаборатории
- •Приготовление препаратов для микроскопического исследования
- •Методы окраски мазков
- •Знакомство с микроскопической техникой. Работа с биологическим микроскопом.
- •Характеристика культуры по морфологическим и тинкториальным признакам
- •Тема 5. Бактериологические методы исследования.
- •Отбор и доставка материала в лабораторию
- •Бактериологические методы исследования
- •Питательные среды для культивирования бактерий
- •Методы посевов
- •Методы культивирования и выделения чистой культуры бактерий
- •Идентификация бактерий
- •Принципы диагностики микозов
- •Паразитологические методы исследования. Лабораторная диагностика инвазий.
- •Вирусологические методы исследования.
- •Выделение и культивирование вирусов
- •Идентификация вирусов
- •Методы стерилизации и дезинфекции в микробиологической лаборатории.
- •Лабораторная диагностика дисбактериоза
- •Принципы санитарно-бактериологического исследования
- •Организация противоэпидемической работы
- •Основы клинической микробиологии Роль медицинской сестры в системе контроля за госпитальными инфекциями
- •Иммуномикробиологические исследования Серологические реакции в микробиологических и иммунологических лабораториях используют в двух целях:
- •Иммунологические реакции выявления специфических антигенов
- •Иммунологические реакции выявления специфических антител
- •7. Реакция торможения гемагглютинации (ртга).
- •Условные обозначения: - торможение гемагглютинации (пуговка) ; - гемагглютинация (зонтик).
- •9. Реакция гемагглютинации (рга)
- •Реакции связывания комплемента. Риф и ифа.
- •Реакция связывания комплемента
- •Метод флюоресцирующих антител (мфа) или реакции иммунофлюоресценции (риф)
- •Иммуноферментный анализ (ифа)
- •Основы иммунопрофилактики
Иммуномикробиологические исследования Серологические реакции в микробиологических и иммунологических лабораториях используют в двух целях:
-
для серотипирования (сероидентификации) микроорганизмов, токсинов, антигена вообще с помощью известного антитела (иммунной диагностической сыворотки),
-
для серодиагносики - определения природы антитела в сыворотке крови больного при бактериальных, вирусных, реже других инфекционных заболеваниях с помощью известного антигена (диагностикума).
Иммунные диагностические сыворотки - препараты, содержащие известные антитела для определения родовой, видовой и типовой принадлежности антигена. Диагностикумы - препараты, содержащие известный антиген в виде взвеси живых или убитых бактерий, продуктов их расщепления, токсины, вирусы.
Правила забора крови для иммунологического исследования Для серологического исследования у больного натощак берут кровь в количестве 5-6мл из локтевой вены при соблюдении правил асептики. Кровь ставят в термостат на 30-60 мин; образовавшийся кровяной сгусток отделяют от стенки стерильной стеклянной палочкой и оставляют в холодильнике на 18-20 ч. Отстоявшуюся сыворотку осторожно сливают в пробирку (стерильную); в случае примеси эритроцитов ее центрифугируют. Сыворотка может храниться в стерильных условиях в холодильнике до 1 мес. Для более длительного хранения ее замораживают при температуре от -20° до -70°С.
Рис. 1. Сыворотку для определения в ней антител (иммунологическое исследование) получают из крови исследуемого.
Иммунологические реакции выявления специфических антигенов
Реакции агглютинации В этих реакциях принимают участие антигены в виде частиц (микробные клетки, эритроциты и другие корпускулярные антигены), которые склеиваются антителами и выпадают в осадок. Для постановки реакции агглютинации (РА) необходимы три компонента: 1) антиген (агглютиноген); 2) антитело (агглютинин) и 3) электролит (изотонический раствор натрия хлорида). Аг + АТ + электролит = агглютинат
1. Постановка ориентировочной реакции агглютинации (РА) на стекле с целью идентификации бактерий кишечной группы.
Рис. 2. РА на стекле.
На предметное стекло наносят каплями:
1-ая капля: - агглютинирующая сыворотка к возбудителям дизентерии; 2-ая капля: - агглютинирующая сыворотка к возбудителям брюшного тифа; 3-ья капля: - физиологический раствор (контроль). Добавляют в каждую каплю исследуемую чистую культуру бактерий. Перемешивают.
Примечание: положительный результат - наличие хлопьев агглютината, отрицательный - отсутствие хлопьев агглютината Заключение: Исследуемые бактерии являются возбудителями брюшного тифа.
2. Учет результатов РНГА, поставленной с целью обнаружения ботулотоксина.
Возбудитель ботулизма - Clostridium botulinum вырабатывает токсины семи сероваров (А, B, C, D, E, F, G), однако чаще других встречаются серовары А, В, Е. Все токсины отличаются по антигенным свойствам и могут быть дифференцированы в реакциях типоспецифическими сыворотками. Для этой цели можно поставить реакцию пассивной (непрямой) гемагглютинации с сывороткой больного, в которой предполагается наличие токсина, и эритроцитами, нагруженными антителами антитоксических противоботулинических сывороток типов А, В, Е. Контролем служит нормальная сыворотка.
Рис. 3. Постановка и результат РНГА.
Учет. В положительном случае эритроциты оседают на дне лунки в виде ровного слоя клеток со складчатым или зазубренным краем (перевернутый зонтик), в отрицательном - оседают в виде пуговки или колечка.
Вывод: В сыворотке больного обнаружен ботулотоксин тип Е.
Реакция преципитации – это формирование и осаждение комплекса растворимого молекулярного антигена с антителами в виде помутнения, называемого преципитатом. Он образуется при смешивании антигенов и антител в эквивалентных количествах. Реакцию преципитации ставят в пробирках (реакция кольцепреципитации), в гелях, питательных средах и др.
3. Постановка и учет реакции кольцепреципитации для определения видовой принадлежности кровяного пятна.
Постановка. В узкую пробирку №1 диаметром 0,5 см с неразведенной преципитирующей сывороткой против белков крови человека в количестве 0,3-0,5 мл, держа ее в наклонном положении, пастеровской пипеткой медленно по стенке наслаивается такой же объем антигена (экстракт кровяного пятна). В пробирку №2 приливают преципитационную сыворотку против белков барана, в пробирку №3 - физиологический раствор (контроль) и добавляют также, как в первую пробирку антиген. Пробирки осторожно, чтобы не смешать жидкости, ставят вертикально. При правильном наслоении преципитиногена на сыворотку четко обозначается граница между двумя слоями жидкости. Постановка реакции обязательно сопровождается контролями сыворотки и антигена. Учет. Результаты реакции учитывают в зависимости от вида антигена и антител через 5-10 мин, 1-2 ч или через 20-24 ч. В случае положительной реакции в пробирке на границе между сывороткой и исследуемым экстрактом появляется преципитат в виде кольца белого цвета.
Рис. 4. Реакция кольцепреципитации.
4. Определение токсигенности коринебактерий дифтерии в реакции преципитации в агаре.
Эта издавна используемая реакция преципитации, предложенная для определения токсичности коринебактерий дифтерии, ставится на фосфатно-пептонном агаре в чашке Петри. Вдоль ее посередине помещают полоску стерильной фильтровальной бумаги, смоченной антитоксической сывороткой. После подсушивания на расстоянии 1 см от края полоски бляшками диаметром 10 мм подсевают выделенные культуры. В одной чашке можно сеять от 3 до 10 культур, одна из которых, контрольная, должна быть заведомо токсигенной. Посевы помещают в термостат.
Учет реакций проводят через 24-48-72 ч. Если культура токсигенная, на некотором расстоянии от полоски бумаги возникают линии преципитата, совпадающие с линиями преципитата контрольной культуры. Они имеют вид «стрел-усиков», которые хорошо видны в проходящем свете.
Рис. 5. Реакция преципитации в агаре.