2. Эмбриональное развитие форели разных генераций

   1. Эмбриональное развитие первой генерации

Исследование состояния икры форели проведено при поступлении ее в хозяйство 29-30 января 2013 г.

Было проведено исследование икринок радужной форели в 10 коробках по следующим показателям: диаметр икры, толщина перивителлинового пространства и длина тел эмбрионов (табл. 1). Наглядно представлена зависимость между диаметром икры и длиной тел эмбрионов на рисунке 1.

Таблица 1

Морфофизиологическая характеристика эмбрионов форели

№ коробки	Диаметр икры, мм	Коэф-фициент вариа-ции, %	Толщина перивител-линового пространства, мм	Коэф-фициент вариа-ции, %	Длина тел эмбрионов, мм	Коэф-фициент вариа-ции, %	Стадии развития
1	5,80±0,08	4,6	0,32±0,05	46,1	10,25±0,31	9,6	26,2 (25-27)
2	5,71±0,09	4,9	0,50±0,04	28,3	10,02±0,22	6,8	26,0 (25-27)
3	5,81±0,15	8,4	0,53±0,05	30,9	10,48±0,18	5,2	26,6 (26-27)
4	5,62±0,16	9,2	0,75±0,05	20,1	9,99±0,30	9,1	25,9 (25-27)
5	5,42±0,05	3,0	0,68±0,04	18,1	9,25±0,12	4,1	25,4 (25-26)
6	5,62±0,07	3,7	0,68±0,03	15,2	9,06±0,15	4,8	25,0 (24-26)
7	5,52±0,07	3,7	0,68±0,05	21,9	9,34±0,12	3,7	25,3 (25-26)
8	5,63±0,07	4,0	0,90±0,05	16,6	9,21±0,08	2,4	25,1 (25-26)
9	5,37±0,07	3,8	0,58±0,05	3,8	8,78±0,11	1,9	24,7 (24-26)
10	5,44±0,08	4,6	0,75±0,06	26,1	8,56±0,12	4,4	24,5 (24-26)
Среднее значение	5,59±0,09		0,64±0,05		9,49±0,17

Диаметр икры составляет от 5,4 до 5,8 мм (в среднем по всем коробкам – 5,59 мм). Наибольший диаметр икры (5,8 мм) наблюдается в коробках № 1 и 3. Наибольший диаметр икры в первых 3-х коробках можно объяснить тем, что данная икра находится на более поздних стадиях развития.

Различия по диаметру икры между коробками № 3 (5,81 мм) и 9 (5,37 мм) статистически достоверны с высшей степенью надежности выводов Р<0,001. То же самое можно с уверенностью сказать о различиях между первой коробкой (5,80 мм) и десятой (5,44 мм), которые также достоверны Р<0,01. Наибольшая вариабельность размеров икринок отмечена для 3-й и 4-й коробок.

Толщина перивителлинового пространства колеблется от 0,3 до 0,9 мм (в среднем – 0,64 мм). Наибольшая толщина в коробке № 8 (0,9 мм). Различия по толщине перивителлинового пространства между коробками со значениями 0,32 мм и 0,90 мм статистически достоверны Р<0,001, но между второй (0,50 мм) и десятой (0,75 мм) коробками не достоверны Р>0,05. Высока вариабельность величины перивителлинового пространства у икры из 1-й коробки (46,1%), это связано с тем, что в данной коробке имеются икринки с существенными различиями по толщине перивителлинового пространства. В некоторых случаях практически отсутствует пространство между желтком и оболочкой (толщина его составляет 0,1-0,2 мм). Это обстоятельство вызывает преждевременный выклев эмбрионов.

Длина тел эмбрионов достоверно больше в первой (10,25 мм) и третьей (10,48 мм) коробках (Р<0,001). Наибольшая вариабельность отмечена в коробках № 1 и 4.

В целом, наиболее развитыми оказались эмбрионы форели в первых трех коробках, на самых низких стадиях развития – зародыши из 9-й и 10-й коробок.

Обнаружена высокая положительная корреляция между диаметром икры и длиной тела эмбрионов (r=0,862±0,18, Р<0,01), т.е. имеется прямая связь между признаками. Это означает, что при увеличении диаметра икры увеличивается длина тела эмбрионов.

Между диаметром икры и перивителлиновым пространством (r=-0,473±0,31, Р>0,05), а также между перивителлиновым пространством и длиной тела эмбрионов (r=-0,568±0,29, Р>0,05) обнаружена отрицательная средняя корреляция, которая означает, что при увеличении одного признака, другой – понижается. В данном случае, при увеличении диаметра икры и длины тел эмбрионов, перивителлиновое пространство уменьшается. Это свидетельствует о том, что в ближайшее время должен наступить выклев вследствие интенсивного роста зародыша и недостатка ему объема перивителлинового пространства для обеспечения себя кислородом.

Чувствительность эмбрионов к действию различных повреждающих факторов среды, и в первую очередь абиотических факторов, таких как кислородная недостаточность, резкие колебания температуры, выходящие за пределы оптимумов, механические повреждения и другие воздействия, оказывают влияние на ход морфогенетических процессов, нарушая скорости развития отдельных органов, вызывая появление уродливо развитых зародышей, а во многих случаях приводя к летальным исходам (Н. Г. Журавлева, 2009).

У развивающихся эмбрионов могут быть различные нарушения в развитии, такие как: утолщенный кювьеров проток, гематомы, нарушения в развитии печени, «мелкий» зародыш и другие аномалии. Это связано с критическими периодами развития икры, особенно в период перед гаструляцией и на различных стадиях формирования эмбриона (табл. 2).

Таблица 2

Нормально развитые эмбрионы, имеющие нарушения развития, %

№ коробки	Количество исследо-ванных икринок	Утол-щенный кювьеров проток	Гема-томы	Нарушения в развитии печени	«Мелкий» зародыш	Другие анома-лии	Не разви- ваю-щаяся икра	«Норма»
1	29	10,3	3,4	-	-	-	-	86,3
2	29	20,7	13,8	3,4	-	-	-	62,1
3	28	17,9	3,6	10,7	3,6	-	3,6	60,6
4	29	3,4	3,4	3,4	-	3,4	3,4	83,0
5	28	-	10,7	10,7	-	3,6	-	75,0
6	28	-	10,7	-	3,6	3,6	3,6	78,5
7	27	-	7,4	3,7	-	-	-	88,9
8	28	-	7,1	7,1	-	10,7	-	75,1
9	28	-	3,6	7,1	7,1	-	-	82,2
10	28	-	7,1	3,6	-	3,6	-	85,7

В первых 4-х коробках наблюдается утолщенный кювьеров проток, наиболее утолщен во 2-й коробке – 20,7%. Гематомы присутствуют во всех коробках, но наибольший процент – в коробках № 2, 5 и 6 (10,7 и 13,8 %). Нарушения в развитии печени присутствуют практически во всех коробках, наибольшие нарушения наблюдаются в коробках № 3 и 5 (10,7%). В некоторых коробках есть небольшой процент не развивающейся икры.

Наименьшее количество различных нарушений и патологий в развитии наблюдается в коробках № 1, 7 и 10 (около 10-15 %). Наибольшее количество нарушений – в коробках № 2 и 3, практически 40 % патологий из 28-29 просмотренных икринок.

Следует отметить, что в некоторых случаях такие нарушения как утолщенный кювьеров проток, нарушения в развитии печени могут быть компенсированы в процессе дальнейшего развития, а гематомы могли быть получены при взятии проб, то есть количество нормально развивающихся эмбрионов форели может быть несколько выше, чем обозначено в таблице.

2. Эмбриональное развитие четвертой генерации

Исследование икры форели данной генерации проводилось 11 февраля 2013 г. Было выявлено процентное соотношение разных стадий развития (табл. 3), определена вариабельность стадий развития, а также дана морфофизиологическая характеристика икры.

Таблица 3

Процентное соотношение разных стадий развития эмбрионов

Стадия развития	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
24									10
25						11,1		70	80
26	10				22,2	11,1	10	30	10	40
27	50	10	10	100	77,8	77,8	90			40
28	40	90	90							20

Икра находилась на 24—28 стадиях развития. Из данной таблицы видно, что самая ровная по темпам развития икра отмечена в четвёртой коробке (100 % – стадия № 27). Наименее развитые эмбрионы (стадии 24—26) замечены в коробке № 9. Это может быть связано с тем, что перед отправкой партии с икрой в хозяйство, в первую очередь, икра закладывалась в первые коробки.

В таблице 4 представлены данные об изменчивости стадий развития эмбрионов, а также о проценте аномалий развития в каждой коробке.

Таблица 4

Вариабельность стадий развития эмбрионов

№ коробки	Стадии развития				Аномалии развития, % в пробе
	среднее	колебания	коэффициент вариации, %
1	27,3	26-28	2,5	1
2	27,9	27-28	1,1	2
3	27,9	27-28	1,1	0
4	27,0	27	0	5
5	26,8	26-27	1,6	0
6	26,7	25-27	2,7	4,5
7	26,9	26-27	1,2	0

Продолжение таблицы 4

№ коробки	Стадии развития				Аномалии развития, % в пробе
	среднее	колебания	коэффициент вариации, %
8	25,3	25-26	1,9	20
9	25,0	24-26	1,9	0
10	26,8	26-28	2,9	3,7

В среднем во всех коробках эмбрионы находятся на 25, 26 и 27 стадиях развития. Самые развитые эмбрионы отмечены в первых 3-х коробках. По всем коробкам коэффициент вариации невысок. Больше всего аномалий в развитии отмечено в коробке № 8 (20%). В некоторых случаях аномалии не встречаются.

Сведения о диаметре икры, величине перивителлинового пространства, длине тел эмбрионов, а также уровне изменчивости этих показателей приведены в таблице 5.

Приведена зависимость между диаметром икры и длиной тел эмбрионов (рис. 2).

Таблица 5

Морфофизиологическая характеристика икры и эмбрионов форели

№ коробки	Диаметр икры			Толщина перивител-линового пространства			Длина тел эмбрионов
	мм	коэффициент вариации, %	мм		коэффициент вариации, %	мм		коэффициент вариации, %
1	4,88±0,06	4,2	0,53±0,04		26,8	10,75±0,22		6,6
2	5,23±0,08	5,0	0,44±0,05		38,9	12,00±0,17		4,4
3	5,22±0,08	4,7	0,48±0,06		37,8	11,93±0,18		4,9
4	5,44±0,07	3,9	0,55±0,03		19,6	10,64±0,10		2,9
5	5,28±0,06	3,7	–		–	10,72±0,17		4,9
6	5,40±0,07	3,9	–		–	10,55±0,14		4,0
7	5,29±0,07	4,1	–		–	10,98±0,15		4,5
8	5,67±0,15	8,1	–		–	9,53±0,13		4,4
9	5,58±0,12	6,7	–		–	9,35±0,14		4,6
10	5,41±0,08	4,4	–		–	10,93±0,27		7,9
Среднее значение	5,34±0,08		0,50±0,05			10,74±0,17

Диаметр икры составляет от 4,88 до 5,67 мм (в среднем – 5,34 мм), наибольший – в коробке № 8 (5,67 мм). Разница по диаметру икры между 4,88 мм (1-я коробка) и 5,67 мм (8-я коробка) статистически достоверна (Р<0,001). Наиболее высокая вариабельность этого признака у икры из 8-й коробки (коэффициент вариации – 8,1 %).

Толщина перивителлинового пространства определена только в первых 4-х коробках, она составляет от 0.44 до 0,55 мм (Р>0,05).

Длина тел эмбрионов колеблется от 9,4 до 12 мм. Наибольшая длина тел эмбрионов достоверно больше во второй коробке (Р<0,001).

По четвертой генерации не было выявлено прямой положительной взаимосвязи между диаметром икры и длиной тел эмбрионов (r=-0,619±0,28, Р>0,05).

3. Эмбриональное развитие пятой генерации

Пятая генерация икры форели поступила на ИВК 22.02.13. Исследовано было всего 2 коробки с икрой. В таблице 6 представлена морфофизиологическая характеристика икры.

Таблица 6

Морфофизиологическая характеристика икры

№ ко-робки	Диаметр икры		Толщина перивителлинового пространства			Длина тел эмбрионов			Стадия развития
	мм	коэф-фициент вариации, %	мм	коэф-фициент вариации, %	мм		коэф-фициент вариации, %	№		коэф-фициент вариации, %
1	5,40±0,06	3,3	0,35±0,04	36,3	12,00±0,12		3,1	28		0
2	5,28±0,05	2,9	0,26±0,03	34,5	11,94±0,14		3,4	28		0
Среднее значе-ние	5,34±0,06		0,30±0,04		11,97±0,13

Все исследованные эмбрионы находились на 28 стадии развития. Из 99 просмотренных икринок не обнаружено ни одной неправильно развивающейся. Икра и эмбрионы форели ровные, хорошего рыбоводного качества. Однако, у 5 % икры отмечено очень маленькое (0,1 мм) перивителлиновое пространство, у 32 % – оно составляет 0,2 %.

Разница по диаметру икры, по толщине перивителлинового пространства и по длине тел эмбрионов статистически не достоверна (Р>0,05).

Выводы

На основании проведенного исследования можно сделать следующие выводы:

1. При рассмотрении всех трех генераций были изучены морфофизиологические показатели икры (диаметр икры, толщина перивителлинового пространства, длина тел эмбрионов), выявлены аномалии развития.

2. Установлена высокая положительная связь между диаметром икры и длиной тела эмбрионов (r=0,862±0,18, Р<0,01 ), а также между толщиной перивителлинового пространства (r=-0,568±0,29, Р>0,05). Данная связь характерна только для первой генерации икры.

3. Вся икра, поступившая в хозяйство, находилась на 24-28 стадиях развития.

4. Пятая генерация икры характеризуется наиболее высокими рыбоводными качествами – достаточный диаметр икры, длина тел эмбрионов и отсутствие аномалий в развитии.

В целом, можно сделать следующее заключение:

Для рыбоводного хозяйства икра должна поступать от хороших производителей, икра должна инкубироваться в оптимальных для нее условиях, должны соблюдаться условия перевозки.

Необходимо проводить исследование нарушений эмбрионального развития икры для того, чтобы можно было предъявить претензии поставщику или перевозчику.

Коэффициент вариации должен быть как можно ниже, т.е. различные показатели (диаметр икры, длина тел эмбрионов, стадии развития) должны быть наиболее выровнены.

По 1-й генерации анализ наличия аномалий развития показал, что большинство из них наступило в результате нарушений условий транспортировки.