Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Plant-BIOTECH.doc
Скачиваний:
109
Добавлен:
01.05.2015
Размер:
3.62 Mб
Скачать

Калюсна культура Робота 8. Отримання первинного калюсу із різних експлантатів асептичних рослин

Мета роботи: отримати калюсну тканину із експлантатів листкового, стеблового, черешкового і міжвузлового походження; порівняти частоту калюсоутворення на експлантатах різного походження.

Матеріали і обладнання: асептичні рослини картоплі, гвоздики або тютюну, чашки Петрі зі стерильним середовищем для калюсу ( табл. 8 ), стерильні чашки Петрі, скальпелі, пінцети, леза, спирт, спиртівка, ламінар-бокс, парафілм.

ХІД РОБОТИ

1. Стерильним пінцетом витягти рослину із пробірки (картопля, гвоздика) або баночки (тютюн) і помістити її у стерильну чашку Петрі.

2. Підтримуючи рослину пінцетом, скальпелем розрізати її на експлантати: стебло, міжвузля, листок і черешок ( 5-10 мм ).

На листках зробити додаткові надрізи.

3. Експлантати помістити у чашки Петрі з калюсогенним середовищем.

4. Закрити чашку. Підписати.

5. Чашки з рослинним матеріалом культивувати у термостаті при температурі 250+10С.

6. Через 25-30 днів провести візуальне визначення частоти калюсоутворення на експлантатах.

Результати записати у таблицю 12.

Таблиця 12

№ п/п

Тип експлантата

Загальна кількість

експлантатів

Кількість експлантатів, що утворили калюс

Індекс росту

штук

%

Робота 9. Дослідження явища фізіологічної полярності

Полярність - це фізіологічна нерівноцінність протилежних полюсів певної клітини, органа або цілої рослини. У рослин вона виникла як наслідок нерівномірного впливу факторів навколишнього середовища на різні частини рослини. Полярність властива всім рослинним організмам, але найбільшого розвитку досягла у вищих рослин. Найяскравіше полярність виявляється при вкоріненні живців: на верхньому кінці живця розвиваються бруньки, а на нижньому кінці утворюються корені незалежно від положення живця в просторі. Мабуть, у зв’язку з цим калюс утворюється більш інтенсивно на боці експлантата, який на материнській рослині обернений до кореня, тому при отриманні калюсу на фрагментах стебла, шматочках кореня моркви експлантати поміщають на агар апікальною стороною. У разі ізолювання експлантата із бульб (топінамбур, картопля) полярність не має суттєвого значення. Для повного виключення впливу полярності експлантати бульб можна поміщати на середовище тангентально. Крім цього, якщо шматочок тканини досить великого розміру, його варто поміщати в середовище апікальним кінцем, при невеликих розмірах експлантата дотримання умов полярності стає менш важливим.

Мета роботи: ознайомитись із явищем фізіологічної полярності при культивуванні рослинних тканин in vitro.

Матеріали і обладнання: коренеплоди моркви, чашки Петрі зі стерильним середовищем для калюсу №2 ( табл.8 ), стерильні чашки Петрі, скальпелі, пінцети, пробкові свердла, спирт, спиртівка, ламінар-бокс, парафілм.

ХІД РОБОТИ

1. Простерилізувати коренеплоди моркви (робота 5).

2. Стерильним пробковим свердлом вичленити циліндр тканини: там, де гладкий зріз - апікальний кінець, а де надірваний – базальний.

3. Циліндр тканини скальпелем порізати на диски товщиною 1,5-2 мм.

4. Частину дисків помістити на середовище для калюсогенезу апікальною стороною донизу, а другу частину - помістити на середовище базальною стороною донизу.

5. Чашки Петрі з рослинним матеріалом культивувати у термостаті при 250+10С.

6. Через 5-6 тижнів порівняти частоту калюсоутворення на експлантатах моркви у першому та другому варіантах досліду. Частоту калюсоутворення визначають як відсоток експлантатів, які утворили калюс від загальної кількості експлантатів.

Результати записати у таблицю 13.

Таблиця 13

№ п/п

Положення експлантата на середовищі

Загальна кількість експлантатів (штук)

Частота

калюсоутворення

(%)

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]