Контрольні запитання і завдання

1. Що таке генетична трансформація?

2. Які існують способи генетичної трансформації?

3. Що таке плазміда?

4. Що таке вектор?

5. Охарактеризуйте Ti-плазміду.

6. Що таке Т-ДНК?

7. Яка організація векторів на основі Ті-плазмід?

8. Назвіть переваги використання векторів на основі ДНК-вмісних вірусів рослин.

9. Які недоліки використання векторів на основі ДНК-вмісних вірусів рослин?

10. Перерахуйте основні методи перенесення чужорідних генів у рослини.

11. Які переваги “прямого перенесення генів”?

12. Охарактеризуйте метод біологічної балістики як найперспективніший спосіб генетичної трансформації рослин.

Практичний курс Приготування і стерилізація живильних середовищ

Живильне середовище - основний фактор успішного культивування ізольованих органів, тканин і клітин рослин. Основними компонентами живильних середовищ є мінеральні солі (макро- і мікроелементи), джерело вуглеводневого живлення (звичайно сахароза або глюкоза), вітаміни і регулятори росту (табл.8).

Таблиця 8

Середовища для культивування in vitro рослин і калюсної тканини

Компоненти	Середовище для рослин - МС	Калюсне середовище №1*	Калюсне середовище №2**
NH4NO3	1650	1650	1650
KNO3	1900	1900	1900
CaCl22H2O	440	440	440
MgSO47H2O	370	370	370
KH2PO4	170	170	170
FeSO4·7H2O	27,8	27,8	27,8
Na2EDTA·2H2O	37,3	37,3	37,3
H3BO3	6	6	6
ZnSO47H2O	8,6	8,6	8,6
CuSO45H2O	0,025	0,025	0,025
CoCl26H2O	0,025	0,025	0,025
KI	0,83	0,83	0,83
Na2MoO42H2O	0,25	0,25	0,25
MnSO44H2O	22,3	22,3	22,3
Мезоінозит	100	100	100
PP	0,5	0,5	0,5
B1	0,1	0,1	0,1
B6	0,5	0,5	0,5
НОК			2
2,4-Д		3	2
Кінетин		1	1
Сахароза	30000	25000	25000
Агар	0,7%	0,7%	0,7%
рН	5,6 – 5,8

* - середовище для калюсу картоплі

** - середовище для калюсу гвоздики, тютюну, топінамбура, сої, моркви

Живильні середовища готують на бідистильованій або дистильованій воді.

Середовища за консистенцією бувають тверді, або агарові, і рідкі залежно від цілей досліджень.

Робота 1. Приготування маточних розчинів для середовища Мурасиге і Скуга (мс)

Мета роботи: Приготувати маточні розчини макро- і мікросолей, вітамінів, фітогормонів, Fe-хелату.

Матеріали і обладнання: NH₄NO₃ , KNO₃ , CaCl₂, Mg SO₄·7H₂O, KH₂PO₄, H₃BO₃, MnSO₄·4H2O, ZnSO₄·4H₂O, KI, Na₂MoO₄·2H₂O, CuSO₄·5H₂O, CoCl₂·6H₂O, FeSO₄·7H₂O, Na₂EDTA·2H₂O, спирт, 1N НCl i 1N КOH, ваги, магнітний змішувач, плитка, лопатки (шпателі), лабораторний посуд - стакан або колба об’ємом 1 л, мірні циліндри 500 мл, 100 мл, мірні піпетки - 5 мл, 1 мл, пляшки з темного скла - 1 л, 100 мл, 50 мл, 25 мл.

Для розчинів макросолей і вітамінів бажано стерильний посуд.

ХІД РОБОТИ

1. Приготувати розчини макро- і мікросолей.

Маточні розчини макросолей готують у концентраціях, що у 10 разів перевищують потрібні, а маточні розчини мікроелементів – у концентраціях у 100 разів більших.

Макро МС - 1 л розчину солей; по 100 мл розчину солей на 1 л середовища.

NH₄NO₃ 16,5 г

KNO₃ 19,0 г

CaCl₂ 3,3 г

Mg SO₄·7Н₂О 4,2 г

KH₂PO₄ 1,7 г

Мікро МС - 100 мл розчину солей; по 1 мл розчину солей на 1 л середовища.

H₃BO₃ 620 мг

MnSO₄·4H₂O 2,23 г

ZnSO₄·4H₂O 860 мг

KI 83 мг розчиняти окремо

Na₂MoO₄·2H₂O 25 мг розчиняти окремо

CuSO₄·5H₂O 2,5 мг

CoCl₂·6H₂O 2,5 мг

2. Приготувати розчин Fe-хелат.

100 мл розчину; по 5 мл на 1 л середовища.

FeSO₄·7H₂O 557 мг

Na₂EDTA·2H₂O 745 мг

Наважки розчинити окремо у бідистиляті, злити і довести до кипіння.

3. Приготувати розчини фітогормонів: 2,4-Д і кінетин.

Розчини фітогормонів готують таким чином: цитокініни (кінетин, зеатин, БАП) спочатку розчиняють у невеликій кількості 1N розчину лугу або кислоти, ауксини (ІОК, НОК, 2,4-Д) - у краплі етанолу, підігрівають і додають відповідний об’єм бідистильованої води; гібереліни розчиняють у бідистильованій воді.

Концентрація 1 мг/мл.

4. Приготувати розчини вітамінів В₁, В₆ і РР.

Розчиняти у бідистильованій воді.

Концентрація 1 мг/мл.