Основы биотехнологии растений

Культура растительных клеток и тканей

Учебное пособие

2002

Основы биотехнологии растений. Культура клеток и тканей: Учебное пособие / Составители: Сорокина И.К., Старичкова Н.И., Решетникова Т.Б., Гринь Н.А.

Рекомендовано к изданию УМК биологического факультета СГУ им. Н.Г.Чернышевского; кафедрой методики преподавания биологии и экологии.

СОДЕРЖАНИЕ:

Введение . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Тема 1. Техника культивирования растительного материала на искусственных питательных средах. Работа 1. Организация биотехнологической лаборатории . . . . . . . . . . . Работа 2. Приготовление питательных сред для культивирования клеток и тканей in vitro. .. Работа 3. Способы стерилизации в биотехнологии . . . . . . . . . . . . . . . . . Работа 4. Способы стерилизации растительных эксплантов. . . . . . . . . Работа 5. Техника работы в ламинаре при культивировании стерильных проростков. . . Тема 2. Микроклональное размножение растений и получение безвирусного посадочного материала Работа 1. Вычленение апикальных меристем и регенерация растений. . Работа 2. Пролиферация побегов и микрочеренкование стерильных проростков. . Работа 3. Индукция корнеобразования при микроклональном размножении растений. . . Работа 4. Получение микроклубней картофеля in vitro. . . . . . . . . . . . . . . Работа 5. Иммуноферментный анализ. Тестирование растительного материала на содержание вирусов. Работа 6. Получение безвирусного посадочного материала методом термотерапии в сочетании с культивированием апикальных меристем. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Работа 7. Получение безвирусного посадочного материала методом химиотерапии в сочетании с методом апикальных меристем. Тема 3. Дедифференциация и каллусогенез в культуре растительных клеток и тканей. Работа 1. Получение каллусов из листьев табака. . . . . . . . . . . . . . . . . Работа 2. Получение каллусов из незрелых зародышей и узлов кущения пшеницы. . . . Работа 3. Получение каллусов из корешков фасоли. . . . . . . . . . . . . . . . Работа 4. Субкультивирование каллусов. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Тема 4. Суспензионные культуры. Работа 1. Получение и культивирование суспензии. . . . . . . . . . . . . . . . . Работа 2. Подсчет плотности суспензии. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Работа 3. Определение степени агрегированности и жизнеспособности суспензии. . . Работа 4. Получение клеточных клонов на агаризованных средах. Метод плейтинга. . . . Тема 5. Гормональная регуляция в культуре клеток и тканей. Работа 1. Индукция органогенеза и соматического эмбриогенеза в каллусной ткани табака под действием фитогормонов. . . . . Работа 2. Индукция деления клеток и роста клеток растяжением под действием ауксина и гиббереллина. Тема 6. Культура гаплоидных клеток. Работа 1. Получение каллусов из пыльников вишни и яблони. . . . . . . . Работа 2. Получение растений – регенерантов из пыльцевых каллусов вишни. . . Терминология. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Приложение. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Список литературы. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

Введение

Современная биотехнология – это наука и отрасль производства, развиваю-щаяся в трех основных направлениях:

– молекулярная биология и генетическая инженерия; – микробиология и микробиологическая промышленность; – культура клеток и тканей in vitro.

Клеточные технологии, основанные на культивировании in vitro орга-нов, тканей, клеток и изолированных протопластов высших растений, могут облегчить и ускорить традиционный процесс создания новых сортов и видов. Они предлагают принципиально новые пути, такие как сомаклональная изменчивость, мутагенез на клеточном уровне, клеточная селекция, соматическая гибридизация для создания генетического разнообразия и отбора форм с искомыми признаками. Кроме того, клеточные технологии эффективны в создании безвирусного материала вегетативно размножаемых растений. В данном пособии представлены наиболее простые для освоения студентами биологических и сельскохозяйственных специальностей способы культивирования растений in vitro : метод апикальной меристемы; получение каллусов, суспензий и растений – регенерантов как на диплоидном, так и гаплоидном уровне. По каждой теме предусмотрены: минимум теоретического материала, методика выполнения работы, перечень необходимого оборудования и реактивов. После каждой темы приводятся контрольные вопросы. Использование данного пособия не исключает подготовку к занятиям по другой учебной литературе.