Занятие № 10 работа № 1. Количественное определение мочевой кислоты в моче

ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ: мочевая кислота образуется из пуриновых оснований (аденин, гуанин). Выделение мочевой кислоты с мочой зависит от содержания пуринов в пище и от состояния обмена нуклеиновых кислот в организме. Мочевая кислота в виде кислого урата натрия входит в состав подагрических отложений в сухожилиях, хрящах, слизистых оболочках суставных сумок. Метаболит существует в виде 2-х таутомерных форм:

OH O

C C

N C N HN C NH

C-OH C = O

H O - C C N C C NH

H

O

N N

H

Енольная форма Кетонная форма

ПРИНЦИП МЕТОДА: мочевая кислота в щелочной среде восстанавливает фосфорновольфрамовый реактив, который приобретает интенсивный синий цвет. Количество восстановленного фосфорновольфрамового реактива можно определить (титруя) раствором K₃Fe(CN)₆. При этом синий раствор обесцвечивается. Количество использованного K₃Fe(CN)₆ эквивалентно содержанию мочевой кислоты.

ХОД РАБОТЫ: взять две пробирки:

Отмерить	Стандарт	Опыт
Моча Стандартный раствор мочевой кислоты ( 0,5 мг/мл) Раствор NaOH – 20 % раствор Фосфорновольфрамовый реактив	- 2,0 мл 1,0мл 1,0мл	2,0 мл - 1,0 мл 1,0 мл

Титрование каждой пробы раствором К₃Fe(CN)₆ до исчезновения синего цвета.

РЕЗУЛЬТАТ: записать объем K₃Fe(CN)₆, пошедший на титрование.

ВЫЧИСЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТА. Пример:

На титрование стандарта использовано

2мл K₃Fe(CN)₆

На титрование опыта – 3 мл K₃Fe(CN)₆

Составляем пропорцию:

1 мг мочевой кислоты - 2 мл

х мг мочевой кислоты - 3 мл

3 х 1

2 мл мочи содержит = Х = ----------- = 1,5

2

мг/пробе

Суточное выделение мочевой кислоты рассчитывают с учетом суточного диуреза (мужчины –1,5, женщины – 1,2 л.).

ВЫВОД:

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:

У взрослых здоровых людей с мочой за сутки выделяется 1,6 – 6,44 ммоль (0,3 – 1,2 г) мочевой кислоты.

Повышенная экскреция мочевой кислоты (гиперурикурия) наблюдается при: заболеваниях, сопровождающихся ускоренной гибелью клеток (терапия раковых и лейкозных больных цитостатиками, гемобластозы, гемолитические процессы, псориаз, синдром длительного сдавления), токсикозах беременности, алкоголизации, потреблении богатых пуринами продуктов (печень, почки, икра рыб)

Пониженное выведение мочевой кислоты (гипоурикурия) отмечается при: почечной недостаточности, подагре, нефритах, отравлениях свинцом и бериллием, синдроме Дауна.

Дата_______________

ЗАНЯТИЕ № 11

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ АУДИТОРНАЯ РАБОТА

ПО ТЕМЕ «БИОСИНТЕЗ БЕЛКОВ»

Дата: _______________

ЗАНЯТИЕ № 12

РАБОТА № 1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ СУКЦИНАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ

ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ: СДГ один из ключевых ферментов цикла трикарбоновых кислот, прочно связаный с внутренней мембранной митохондрий. Роль кофермента выполняет ФАД, соединенный с белком ковалентной связью. Фермент in vivo окисляет янтарную кислоту (сукцинат):

ФАД ФАДН₂

СООН СООН

СН2 СН

СН2 сукцинатдегидрогеназа СН

(СДГ)

СООН СООН

Сукцинат Фумарат

Работа дает представление о дегидрогеназных реакциях в ЦТК.

ПРИНЦИП МЕТОДА:

Субстрат – янтарная кислота. Конечный акцептор водорода – 2,6-дихлорфенолиндофенол (синий цвет), который при восстановлении превращается в бесцветную лейкоформу. Источником фермента является отмытая мышечная ткань. В опыте (in vitro) ход реакций следующий:

Малонат является конкурентным ингибитором фермента СДГ.

ХОД РАБОТЫ:

А. Получение ферментного препарата.

2 г свежих мышц измельчают ножницами, гомогенизируют с небольшим количеством воды. Мышечную кашицу переносят на двойной слой марли (воронка) и промывают 25 мл воды. Отжатую мышечную массу переносят в пробирку, добавляют 4 мл воды, размешивают стеклянной палочкой и суспензию равномерно разливают в 4 пробирки.

Б. Определение активности фермента.

Взять четыре пробирки и приготовить инкубационные смеси в соответствии со схемой:

№ пробирки отмерить	1	2	3	4
Ферментный препарат (гомогенат ткани) Н2О Малонат Сукцинат 2,6-дихлорфенолиндофенол	1,0 мл кипячение 2 минуты 0,5 мл - 1,0 мл 2 капли	1,0 мл - 0,5 мл - 1,0 мл 2 капли	1,0 мл - 1,5 мл - - 2 капли	1,0 мл - - 0,5 мл 1,0 мл 2 капли
Перемешать. Инкубация 15 минут, при 37о С. в термостате

РЕЗУЛЬТАТ:

ВЫВОД: