Определение активности аспартатаминотрансферазы (АсАт) в сыворотке крови по Кингу

Задание 1. Провести количественное определение активности АсАТ в сыворотке крови по методу Кинга.

Принцип. Метод базируется на развитии окраски, которая возникает при взаимодействии 2,4-динитрофенилгидразина с щавелевоуксусной и пировиноградной кислотой.

Ход работы. В одну пробирку наливают 0,2 мл сыворотки крови (опытная проба), в другую 0,2 мл дистиллированной воды (контрольная проба). Затем в обе пробирки прибавляют 0,5 мл раствора аспарагиновой кислоты и 0,5 мл раствора α-кетоглутаровой кислоты и ставят на 60 мин в термостат при 37°С. После инкубации в обе пробирки прибавляют по 1 мл 2,4- динитрофенилгидразина для прекращения процесса трансаминирования и снова ставят их в термостат на 15 мин, после чего прибавляют по 10 мл 0,4н NaOH, перемешивают и оставляют стоять 1-2 мин до появления окраски. Интенсивность окраски определяют на ФЭК (зеленый светофильтр), фотометрируют опытную пробу против контрольной. По калибровочной кривой определяют активность АсАТ.

Оформление работы. Записать в протокол реакцию, которая катализируется аспартатамино-трансферазой. Рассчитать активность фермента и оценить полученные результаты.

Клинико-диагностическое значение. Широкое распространение и высокая активность трансаминаз в органах и тканях человека, а также сравнительно низкие величины базальной активности этих ферментов в крови стали основанием для определения их уровня в сыворотке крови человека при поражениях сердца, печени. Органические нарушения при острых и хронических заболеваниях сопровождаются деструкцией клеток и приводят к выходу трансаминаз в кровь. Так, при инфаркте миокарда уровень АсАТ сыворотки крови уже через 3-5 ч после приступа резко увеличивается в 20-30 раз (норма 0,1-0,45 ммоль/(ч∙л)). При поражениях печени (цирроз, гепатит) более характерным является повышение в крови активности АлАТ (норма 0,1-0,68 ммоль/(ч∙л)). В клинике трансаминазный тест используют не только для диагностики заболеваний, но и для прогноза и проверки эффективности лечения.

Література

1. Губський Ю.І. Біологічна хімія. – Київ-Тернопіль: Укрмедкнига, 2000. – С. 236-240.

2. Губський Ю.І. Біологічна хімія. Підручник. – Київ-Вінниця: Нова книга, 2007. – С. 288-295.

3. Гонський Я.І., Максимчук Т.П., Калинський М.І. Біохімія людини: Підручник. – Тернопіль: Укрмедкнига, 2002. – С. 407-411.

4. Вороніна Л.М. та ін. Біологічна хімія. – Харків: Основа, 2000. – С. 332-337.

5. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. – М.: Медицина, 1998. – С. 431-440.

6. Биохимия: Учебник / Под ред. Е.С. Северина. – М.: ГЭОТАР-МЕД, 2003. – С. 469-476.

7. Николаев А.Я. Биологическая химия. – М.: ООО Медицинское информационное агентство, 1998. – С. 309-313.

8. Практикум з біологічної хімії / Бойків Д.П., Іванків О.Л., Коби-лянська Л.І. та ін./За ред. О.Я. Склярова. – К.: Здоров’я, 2002. – С.146-167.

9. Лабораторні та семінарські заняття з біологічної хімії: Навч. посібник для студентів вищих навч. закл. / Л.М. Вороніна, В.Ф. Десенко, А.Л. Загайко та ін. – Х.: Вид-во НФаУ; Оригінал, 2004. – С. 194-195.