1. Общие представления о микробиологических методах

ИССЛЕДОВАНИЯ

Для выделения микроорганизмов из производственных и природных субстратов, поддержания в активном состоянии чистых культур, приготовления рабочих культур с целью передачи в производство и в лабораторной практике часто пользуются методами посева и пересева.

Посевом (или инокуляцией) называется внесение части исследуемого материала в стерильную питательную среду.

Пересев - перенос уже выращенных клеток из одной среды в другую (стерильную).

Обычно микроорганизмы выращивают при определенной постоянной температуре в термостатах или термостатных комнатах.

Культивирование при определенной температуре называется инкубацией, или инкубированием.

Выращивают микроорганизмы в стеклянной посуде: пробирках, колбах или чашках Петри. В пробирках микроорганизмы культивируют как в жидких, так и в плотных средах, в чашках Петри - на плотных средах, а в колбах -на жидких питательных средах.

2. Посев на плотные среды

Посев на чашки Петри производят следующим образом:

1. Расплавляют на водяной бане стерильную питательную среду, содержащую агар или желатину.

2. Затем сосуд со средой берут в правую руку, вынимают из него пробку, зажимают ее мизинцем и безымянным пальцами левой руки.

3. Обжигают горло сосуда в пламени горелки и, приоткрыв большим и средним пальцами левой руки крышку чашки Петри, быстро наливают в чашку расплавленную среду в таком количестве (20-39 мл), чтобы дно чашки было полностью покрыто. Крышку тотчас закрывают.

4. Чашку оставляют на горизонтальной поверхности до тех пор, пока не застынет среда.

5. Обжигают горлышко колбы в пламени горелки, затем обжигают ватную пробку. Если конец ватной пробки загорится, то не следует ее бросать. Пробку нужно быстро внести в колбу, где вата сама потухнет. Если в момент посева ватная пробка упадет на стол или на пол, то нужно взять новую стерильную пробку.

6. Посев в твердую среду можно производить шпателем Дригальского, петлей либо пипеткой (пастеровской или градуированной).

7. На чашке Петри делают надпись: название культуры и дату посева. Надписывают чернилами или карандашом по стеклу или наклеивают этикетку. Засеянные пробирки помещают в термостат для выращивания при постоянной температуре.

3. Методы количественного учета микроорганизмов

О росте микроорганизмов в естественных субстратах или питательных средах судят по количеству клеток или биомассе в единице объема. Выбор метода для определения числа клеток или биомассы зависит от цели исследования, свойств питательной среды или субстрата, а также от особенностей роста и морфологии микроорганизмов.

Число клеток в единице объема можно определить непосредственным подсчетом их под микроскопом (метод прямого счета) либо косвенно, учитывая рост микроорганизмов на плотных (чашечный метод Коха) и в жидких (метод предельных разведений) питательных средах.

Подсчитать клетки микроорганизмов под микроскопом можно, используя счетные камеры, капилляры Перфильева, препараты фиксированных и окрашенных клеток, приготовленные на предметных стеклах или мембранных фильтрах. Однако при этом определяются чаще всего и живые и мертвые клетки, поэтому результаты подсчета могут быть не точными. Кроме того, одно только наблюдение микроорганизмов под микроскопом не позволяет судить о том, какие процессы проводят они в данном субстрате.

В отличие от подсчета клеток под микроскопом, методы высева на плотные и в жидкие питательные среды дают возможность определить только число жизнеспособных клеток в популяции.