У щавеля кислого(Rumex acetosa)
Оборудование: препаровальные иглы, скальпель, предметные и покровные стекла, пипетка, два бюкса, два химических стакана, световой микроскоп (ув. 15x90).
Реактивы: краситель ацеторсеин, смесь Карнуа (3 части этилового спирта , 1 часть Л.У.К.), иммерсионное масло.
Объект: мужские и женские растения щавеля кислого.
Ход работы
У щавеля, сняв с поверхности стебля тонкий слой эпидермиса, зафиксируйте его в смеси Карнуа. Отдельно зафиксируйте эпидермис с женских растений, отдельно — с мужских. Расположив зафиксированные срезы на предметном стекле, окрасьте объект ацеторсеином (15—20 мин). Срез должен быть небольшим и очень тонким (его рекомендуется измельчить препаровальной иглой). Окрашенный объект покройте покровным стеклом и постарайтесь получить давленый препарат. При увеличении (х90) рассмотрите ядра с женских и мужских растений. В некоторой доле клеток мужских растений удастся обнаружить глыбки полового хроматина. Вспомните, в каких клетках человека может быть обнаружен половой хроматин.
Работа 3. Определение полового хроматина в клетках слизистой оболочки
Ротовой полости человека
Оборудование: металлический шпатель, предметные и покровные стекла, пипетка, вата, световой микроскоп (ув. 15x90).
Реактивы: этиловый спирт 70%, краситель ацеторсеин 1% раствор.
Объект: клетки слизистой оболочки ротовой полости человека.
Ход работы
1. Половой хроматин изучают в клетках, выявляемых в соскобах со слизистой оболочки полости рта. Стерильным металлическим шпателем каждый студент индивидуально делает соскоб слизистой ротовой полости, затем материал переносится на предметное стекло, размазывается по поверхности тем же шпателем и высушивается. Полученный препарат окрашивается 1 %-ным раствором ацеторсеина в течение нескольких минут. Препарат заключают в канадский бальзам, глицерин-желатин или используют как временный, накрыв покровным стеклом.
2. Полученный препарат изучают в световом микроскопе с увеличением 90х10, 90х15 или 60х15. Половой хроматин выявляется у женщин в ядрах клеток слизистой оболочки в виде темно-окрашенного тельца вблизи ядерной оболочки. Расположение ядер на препарате может быть таким, что половой хроматин окажется вне плоскости видимости, следовательно, эта структура выявляется в ядрах не всех клеток. Необходимо изучить под микроскопом не менее 100 клеток и записать, в каком количестве из них выявляется половой хроматин. В среднем 30% ядер на препарате слизистой женщины будут иметь эту структуру. В соскобе слизистой ротовой полости мужчин половой хроматин не выявляется, т.к. у особей мужского пола только одна Х-хромосома, которая находится в активном состоянии (рис.3).
3. Сделайте рисунки клеток, в ядрах которых имеется половой хроматин, и клеток, в которых половой хроматин отсутствует.
Рис. 3 Половой хроматин в клетках слизистой оболочки
ротовой полости женщины (а) и его отсутствие у мужчины (б).
Тема 3. Изучение митоза и мейоза у растений.
Центральный момент полового процесса – мейоз, который приводит у растений к образованию гаплоидных клеток: микро- и макроспор. Знакомство с основными особенностями мейоза состоялось при изучении основного курса генетики. Задача полевой практики дать сравнительную оценку поведения хромосом в митозе и мейозе, используя при этом методы быстрого приготовления микропрепаратов тканей растений. Для изучения процессов митоза и мейоза можно использовать такие растения как ячмень, рожь, горох, конские бобы и особенно лук сеянец (Alium sepium). Последний объект особенно удобен по следующим причинам: небольшое число хромосом (8 бивалентов); в соцветии в центре располагаются более молодые цветки, по периферии более продвинутые в развитии пыльников, поэтому в течение длительного времени у этого растения могут быть найдены все фазы мейоза; период цветения длительный, и на конец,
растения могут быть выращены в любое время года в лабораторных условиях. Процесс митоза у этого растения можно пронаблюдать изготовив микропрепарат кончиков корней пророщеной луковицы.
Работа 1. Изучение митоза у растений
Оборудование: стеклянные банки на 250 мл, предметные и покровные стекла, препаровальные иглы, скальпель, световой микроскоп (ув. 15х90), фильтровальная бумага, спиртовка, спички.
Объект: кончики корней пророщенного лука.
Реактивы: краситель ацеторсеин или ацетокармин.
Ход работы
Луковицы прорастить на водопроводной воде в банках на 250 мл. Проращивают около недели до появления корешков длиной около 1 см. Приготовление препарата начинается с того, что на предметном стекле с помощью препаровальной иглы отрывают самый кончик корня и на него наносят несколько капель ацеторсеина. Окрашивание и фиксация длятся 5—10 минут. Затем производят мацерацию тканей, для чего препарат на спиртовке слегка подогревают (но не кипятят). Проверяют нужную степень нагревания прикосновением предметного стекла к руке: стекло должно быть теплым. Эту операцию повторяют 2—3 раза. Если краска испарится, ее нужно добавить. Затем окрашенный корешок накрывают покровным стеклом и сильно надавливают большим пальцем руки. Чтобы убрать избыток краски, выступающей из-под покровного стекла, препарат накрывают фильтровальной бумагой. Для распределения клеток тонким слоем можно рекомендовать слегка покатать карандаш по покровному стеклу. Препарат готов для просмотра.
Запишите методику приготовления препарата. Зарисуйте и определите наблюдаемые вами стадии митоза.
Работа 2. Изучение мейоза у растений
Оборудование: предметные и покровные стекла, препаровальные иглы, скальпель, световой микроскоп (ув. 15х90), фильтровальная бумага, спиртовка, спички.
Реактивы: краситель ацеторсеин или ацетокармин.
Объект: пыльца из зрелых пыльников цветка лука (Alium sepium); мейоз в пыльниках лука идет в еще нераспустившемся зеленом бутоне; или ржи (Secale cereale), колосья собирают в конце мая начале июня.
Ход работы
Взять пыльник цветка лука и поместить его на предметное стекло. Пыльник раздробить препаровальной иглой, тщательно распределив по стеклу его содержимое, стенки пыльника удалить со стекла. Нанести на раздробленный пыльник несколько капель ацеторсеина и накрыть покровным стеклом примерно на 10 мин. Для лучшего окрашивания препарат подогреть на спиртовке. Найти хорошо прокрашенные клетки с различными четко дифференцируемыми стадиями мейоза. Зарисовать и определить все наблюдаемые стадии мейоза. Особое внимание следует обратить на стадию профазы 1.