- •Колот Наталья Владимировна
- •Компенсация углеводного обмена у кроликов с экспериментальным сахарным диабетом 1 типа при трансплантации островков поджелудочной железы в разные сайты организма
- •Содержание
- •Введение
- •Раздел I
- •1.1. Современные представления о физиологии поджелудочной железы и её роли в жизнедеятельности организма.
- •1.1.1. Эмбриональное становление поджелудочной железы.
- •1.1.2. Инсулин, регуляция его синтеза и секреции.
- •1.1.3. Физиологические эффекты инсулина в организме.
- •1.2. Cахарный диабет 1 типа.
- •1.3. Трансплантация островков поджелудочной железы как метод лечения сахарного диабета 1 типа.
- •1.4. Выживание островков поджелудочной железы в различных сайтах организма.
- •Раздел II
- •2.1. Получение островков поджелудочной железы.
- •2.2. Разделение суспензии клеток и островков поджелудочной железы в градиенте плотности фиколла.
- •2.3. Культивирование островков поджелудочной железы.
- •2.4. Выявление β-клеток островков поджелудочной железы с помощью специфической реакции на дитизон.
- •2.5. Определение базального и стимулированного уровня инсулина в среде культивирования.
- •2.6. Измерение активности α - амилазы в среде культивирования островков поджелудочной железы.
- •2.7. Экспериментальная модель сахарного диабета.
- •2.8. Трансплантация островков поджелудочной железы животным с экспериментальным сд 1 типа.
- •Экспериментальные группы животных:
- •2.9.1. Определение содержания глюкозы в цельной крови.
- •2.11. Определение уровня инсулина в сыворотке крови.
- •2.12. Определение уровня с-пептида в сыворотке крови.
- •2.13. Измерение биохимических показателей в сыворотке крови экспериментальных животных.
- •2.14. Определение показателей крови у экспериментальных животных.
- •2.15. Гистологический анализ образцов.
- •2.16. Реактивы.
- •2.17. Статистическая обработка результатов.
- •3.1. Изучение структурно - функциональных свойств островков поджелудочной железы неонатальных поросят и кроликов in vitro
- •3.3. Использование флуоресцентного красителя DiОc18 для идентификации трансплантата островков поджелудочной железы.
- •3.4. Изучение влияния ксенотрансплантации островков поджелудочной железы интрапортально и внутриселезеночно на функцию печени и селезенки
- •3.4.1. Влияние интрапортальной ксенотрансплантации островков поджелудочной железы на функциональное состояние печени
- •3.4.2. Влияние внутриселезеночной ксенотрансплантации островков поджелудочной железы на функциональное состояние селезенки
- •Заключение
- •Список использованной литературы
МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ УКРИНЫ
ХАРЬКОВСКИЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ
ИМЕНИ В.Н. КАРАЗИНА
Колот Наталья Владимировна
УДК
Компенсация углеводного обмена у кроликов с экспериментальным сахарным диабетом 1 типа при трансплантации островков поджелудочной железы в разные сайты организма
03.00.13 – физиология человека и животных
Научный руководитель:
д.б.н., проф. Бондаренко Т.П.
Харьков - 2008
Содержание
Перечень условных обозначений……………………………………………..…5
Введение…………………………………………………………………………..6
I раздел. Обзор литературы……………………………………………………..17
1.1. Современные представления о физиологии поджелудочной железы и ее роли в жизнедеятельности организма………………………………………….17
1.1.1.Эмбриональное становление поджелудочной железы…………………………………………………………………………….18
1.1.2. Инсулин, регуляция его синтеза и секреции……………………..21
1.1.3. Физиологические эффекты инсулина в организме………………25
1.2. Cахарный диабет 1 типа…………………………………………………….30
1.3. Трансплантация островков поджелудочной железы как метод лечения сахарного диабета 1 типа………………………………………………………..37
1.4. Выживание островков поджелудочной железы в различных сайтах организма…………………………………………………………………………43
II радел. Материалы и методы исследований………………………………….49
2.1. Получение островков поджелудочной железы……………………………49
2.2.Разделение суспензии клеток и островков поджелудочной железы в градиенте плотности фиколла…………………………………………………..50
2.3. Культивирование островков поджелудочной железы……………………50
2.4. Выявление β-клеток островков поджелудочной железы с помощью специфической реакции на дитизон……………………………………………51
2.5. Измерение базального и стимулированного уровня инсулина в среде культивирования…………………………………………………………………51
2.6. Измерение активности α - амилазы в среде культивирования островков поджелудочной железы………………………………………………………….52
2.7. Экспериментальная модель сахарного диабета…………………………...52
2.8. Трансплантация островков поджелудочной железы животным с экспериментальным СД 1 типа………………………………............................52
2.9. Исследование показателей углеводного обмена у кроликов с экспериментальным СД 1 типа до и после трансплантации………………….54
2.9.1. Измерение содержания глюкозы в цельной крови………………54
2.9.2. Проведение внутривенного теста на толерантность к глюкозе…54
2.9.3. Измерение уровня гликозилированного гемоглобина в крови….54
2.9.4. Определение содержания глюкозы в моче……………………….55
2.10. Идентификация трансплантата при использовании флуоресцентного полиметинового красителя DioC18…………………………………………….55
2.11. Определение уровня инсулина в сыворотке крови…………………..….56
2.12. Определение уровня С-пептида в сыворотке крови………….…………56
2.13. Измерение биохимических показателей в сыворотке крови экспериментальных животных………………………………………………….57
2.14. Определение показателей крови у экспериментальных животных…….57
2.15. Гистологический анализ образцов………………………………………..57
2.16. Реактивы……………………………………………………………………58
2.17. Статистическая обработка результатов…………………………………..58
III раздел. Собственные результаты и их обсуждение………………………..59
3.1. Изучение структурно - функциональных свойств островков поджелудочной железы неонатальных поросят и кроликов in vitro…………60
3.2. Алло - и ксенотрансплантация островков поджелудочной железы неоанатальных животных в различные сайты организма кроликов с экспериментальным СД 1 типа…………………………………………………83
3.3. Использование флуоресцентного маркера DiOC18 для идентификации трансплантата островков поджелудочной железы………………..………….125
3.4. Изучение влияния ксенотрансплантации островков поджелудочной железы интрапортально и внутриселезеночно на функцию печени и селезенки..............................................................................................................132
3.4.1. Влияние интрапортальной ксенотрансплантации островков поджелудочной железы на функциональное состояние печени.....................133
3.4.2. Влияние внутриселезеночной ксенотрансплантации островков поджелудочной железы на функциональное состояние селезенки................150
Заключение..........................................................................................................163
Выводы………………………………………………………………………….174
Список литературы……………………………………………………………..176
ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
АлАт - аланинаминотрансфераза
АлТц - аллотрансплантация
АДФ - аденозиндифосфат
АКТГ - адренокортикотропный гормон
АсАт - аспартатаминотрансфераза
АТФ - аденозинтрифосфат
БСА – бычий сывороточный альбумин
ГЛЮТ – глюкозный транспортер
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ИЛ - интерлейкин
ИНФ - интерферон
ИФР - инсулиноподобный фактор роста
КсТц - ксенотрансплантация
ЛПОНП - липопротеины очень низкой плотности
НАДФ · Н - никотинамидфосфат восстановленный
НАД · Н - никотинамид восстановленный
ОПЖ - островки поджелудочной железы
ПЖ - поджелудочная железа
ПОЛ - перекисное окисление липидов
РНК - рибонуклеиновая кислота
СД - сахарный диабет
СОЭ – скорость оседания эритроцитов
ФНО - фактор некроза опухоли
цАМФ - циклический аденозинмонофосфат
ЩФ - щелочная фосфатаза
HbA1с – гликозилированный гемоглобин