- •Лабораторна робота №1
- •Теоретичні відомості
- •Довжини пробігу розчинника
- •Література
- •Лабораторна робота №2
- •Теоретичні відомості
- •Кількісне визначення концентрації білків.
- •Самостійна робота студентів
- •Визначення білку біуретовим методом
- •2.Визначення білку біуретовим методом по Ярош
- •3. Визначення білку за методом Лоурі
- •Література
- •Лабораторна робота №3
- •Теоретичні відомості
- •Самостійна робота студентів
- •Нанесення точок на хроматографічний папір
- •Лабораторна робота №4
- •Теоретичні відомості
- •Будова гема
Самостійна робота студентів
Підготувати листок хроматографічного паперу для хроматографії (відмітити лінію старту та точки 1, 2, 3, 4).
Нанести 1, 2, 3, 4 обєми 0,01 М розчину амінокислоти, причому кожну наступну краплину розчину наносять після повного висушування попередньої. На 5-ту точку наносять один обєм розчину амінокислоти невідомої концентрації.
Занурити хроматограму на кілька секунд у кювету з 0,5%-м розчином нінгідрину в ацетоні.
Просушити хроматограму при кімнатній температурі та прогріти протягом 15 хв. для проявлення забарвлення в сушильній шафі при 600 С.
Зони хроматограми з яскраво-ліловими плямами амінокислот вирізати ножицями, подрібнити та вмістити в окремі пробірки №1, №2, №3 та №4.
Збоку на чистому місці вирізати рівний за розміром кружечок
контрольної зони, також подрібнити та вмістити в пробірку №5.
Елюювати комплексну сполуку амінокислоти з паперу в розчин.
Витримати пробірки протягом 30 хв. в темному місці при кімнатній температурі.
Фотометрувати проти контрольної проби на ФЕК при 540 нм (зелений).
10.На основі знайденої оптичної густини і взятих концентрації
побудувати калібрувальний графік, для чого на осі абсцис відкладають концентрацію амінокислот в мікромолях, а на осі ординат – оптичну густину.
11. Знайти оптичну густину амінокислоти невідомої концентрації та за
калібрувальним графіком визначити її концентрацію.
12.Написати висновок.
Реактиви:
0,01 М розчини амінокислот.
0.015, 0.025, 0.03, 0.035 М розчини амінокислот (для невідомої концентрації).
Суміш розчинників н-бутанол, оцтова кислота, вода в обємному співвідношенні 4:1:5 (40 мл н-бутанолу, 10 мл оцтової кислоти, 50 мл дистильованої води струшують протягом 1-2 хв. в ділильній воронці. Після розшарування нижній шар зливають, а верхній використовують як рухомі фазу).
0,5% -й розчин нінгідрину в ацетоні (95 частин 0,5%-го розчину нінгідрину в ацетоні, 1 частина льодяної оцтової кислоти і 4 частини води змішують безпосередньо перед визначенням).
0,005%-й розчин CuSO45H2O в 75%-му етиловому спирті (5 мг сульфату міді розчиняють в 22 мл води і обєм доводять 96%-м спиртом до 100 мл).
96%-й етиловий спирт.
Стандартні 0,01 М розчини амінокислот (кількість кожної амінокислоти, що відповідає 0,05 М розчину, зважують на аналітичних терезах і розчиняють в 0,01 н розчині соляної кислоти).
Матеріали та обладнання: хроматографічний папір, дозатори з наконечниками, кювета з розчином нінгидрину в ацетоні, пробірки скляні зі штативом, витяжна шафа, термостат з t = 600 С, термостат з кімнатною температурою, ФЕК з довжиною хвилі 540 нм (зелений світлофільтр), лінійка, олівець, ножиці.
Підготовка до проведення лабораторної роботи
Студенти розділяють на бригади по 2 особи, проводять попереднє тренування в нанесенні води на звичайний папір за допомогою дозатора. Олівцем підписують пластинку (прізвище або № бригади).
Хід роботи
На листку хроматографічного паперу олівцем відмічають лінію старту та 4 точки для нанесення розчину амінокислоти відомої концентрації та 5-ту точку для амінокислоти невідомої концентрації.
-
лінія
старту
____х____х____х____х____х____
1 2 3 4 5