ГБОУ ВПО «Владивостокский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития РФ

Кафедра биологической химии, клинической лабораторной диагностики, общей и клинической иммунологии

Комплект учебно-методических материалов к учебно-методическому комплексу по «Биологической химии – биохимии полости рта»

Для специальности 060201 - Стоматология

Курс I

Семестр 2

Методические указания

по подготовке к практическому занятию

(для студентов)

Модуль II

Тема: « Строение и функции ДНК, РНК. Биосинтез и катаболизм нуклеотидов»

Составитель:

к.б.н., доцент О.А.Артюкова

Рецензент:

к.б.н., доцент Т.Н. Лемешко

Утверждены

на методическом совещании кафедры

от 25 января 2012 г.

Протокол № 6

Владивосток

2012

Практическое занятие № 7

Тема: «Строение, функции ДНК, РНК. Биосинтез и катаболизм нуклеотидов»

(лабораторно-практическое занятие)

Мотивация: Уметь применять знания о строении и функционировании нуклеиновых кислот и биосинтезе белка для объяснения механизмов онтогенеза, клеточной дифференцировки, патогенеза вирусных заболеваний, злокачественного роста, наследственных болезней и заболеваний с наследственной предрасположенностью.

Цель обучения, воспитания и развития: Получить представление о судьбе нуклеиновых кислот (как эндогенных, так и экзогенных) в организме, образовании конечных продуктов обмена; уметь использовать эти знания для объяснения причин нарушений пуринового обмена и биохимических методах коррекции.

Задачи, обучения, воспитания и развития: студент должен

1. Уметь писать формулы: аденин, цитозин, тимин, урацил, АМФ, ГМФ, ЦМФ, ТМФ,

УМФ, синтез пуриновых нуклеотидов (от рибозо-5-фосфата до 5-фосфорибозиламина)

2. Знать пределы физиологических колебаний биохимических показа­телей:

суточная экскреция мочевой кислоты с мочой

3. Знать и уметь объяснять значения терминов: подагра, гиперурикемия,

гипоурикемия, гиперурикурия (урикозурия), синдром Леш-Нихана, ксантинурия,

оротацидурия

Этапы проведения занятия:

1. Вводная часть

2. Основная часть занятия: лабораторная работа,

общие и индивидуальные задания для СДС

3. Заключительная часть занятия

Теоретические вопросы:

1. Пути синтеза пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов, ферменты, регуляция.

2. Нарушение синтеза пиримидиновых нуклеотидов: оротацидурия.

3. Катаболизм пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов. Химизм расщепления пиримидиновых оснований до конечных продуктов и превращения пуринов в мочевую кислоту

4. Патология обмена пуриновых нуклеотидов: подагра. Генетические нарушения. Синдром Леша-Нихана.

5. Нуклеопротеины: роль в явлениях наследственности, общая характеристика белковых и полинуклеотидных компонентов. Строение хроматина.

6. Структура и функции ДНК, разных видов РНК.

7. Денатурация и ренативация нуклеиновых кислот.

8. Методы исследования ДНК (метод молекулярной гибридизации, ПЦР и др.). Использование ДНК технологий в медицине.

Ориентировочная основа деятельности студентов (оод) для проведения лабораторной работы: Ферментативное определение мочевой кислоты в сыворотке крови и моче

Принцип метода: Мочевая кислота (МК) под действием фермента уриказы превращается в аллантоин с образованием СО₂ и Н₂О_2. Образовавшаяся перекись водорода в присутствии 3,5-дихлор-2-гидроксибензолсулфоната (ДХГБС) и 4-аминоантипирина под действием фермента пероксидазы превращается в окрашенный продукт реакции (красный квинон), количество которого прямо пропорционально количеству МК.

Порядок выполнения работы:

Реактивы	Опытная проба	Калибровочная проба
Рабочий реагент (ферменты, хромогены)	1 мл	1 мл
Сыворотка крови, Моча (разведение 1/5)	0,025 мл	-
Калибратор (раствор МК 500 мкмоль/л)	-	0,025 мл

Пробы перемешать, выдержать в течение 10 минут при температуре 37^о и измерить оптическую плотность опытной пробы (Е_оп) и калибровочной пробы (Е_кал) против воды на ФЭК при длине волны 520-550 нм.

Расчет:

1. Содержание МК в сыворотке крови рассчитывается по формуле

С_кровь = (Е_оп : Е_кал) х 500,

где 500 – концентрация МК в калибраторе (мкмоль/л)

2. Содержание МК в суточной моче (уровень экскреции) рассчитывается

по формуле С_моча = (Е_оп х 500 х 5 х V) : (Е_кал х 1000),

где 5 – коэффициент разведения мочи;

V – объем суточной мочи (мужчины – 1,5 л; женщины – 1,2 л)

1000 – коэффициент пересчета мкмоль в моль;

500 – концентрация МК в калибраторе (мкмоль/л).

Содержание в норме	Женщины	Мужчины
Сыворотка крови	140 – 310 мкмоль/л (0,14 – 0,31 ммоль/л)	200 – 420 мкмоль/л (0,2 – 0,42 ммоль/л)
Моча (экскреция)	1,5 – 4,5 ммоль/сут (270 – 600 мг/сут)

Изменение концентрации мочевой кислоты в биологических жидкостях:

Гиперурикемия – повышение концентрации мочевой кислоты в крови

Гиперурикурия – увеличение выделения мочевой кислоты с мочой (урикозурия)

Гипоурикурия - уменьшение выделения мочевой кислоты с мочой