Лабораторная работа № 14.2 Определение количества лейкоцитов в крови
Цель: определить количество лейкоцитов в 1 л крови.
Объект исследования: человек.
Оборудование и материалы: игла-скарификатор, микроскоп, смеси-тель для забора крови, счетная камера с сеткой Горяева, покровное стекло, стеклянная чашечка, 3% раствор уксусной кислоты (подкрашенный мети-леновой синью), марлевые салфетки, вата, спирт, настойка йода, почкообраз-ный тазик.
Порядок выполнения. Обработать и проколоть палец так же, как указано в лабораторной работе № 14.1. Набрать кровь в смеситель для лейкоцитов до метки «0,5». Из чашечки в смеситель набрать раствор уксусной кислоты, подкрашенной метиленовой синью до метки «11» (разведение в 20 раз). Затем снять резиновую трубку, захватить меланжер между большим и средним пальцами и сильно встряхнуть в различных направлениях. Кислота разрушает оболочки эритроцитов и лейкоцитов. От лейкоцитов остаются их ядра, которые окрашиваются метиленовым синим и становятся хорошо видны при подсчете.
Притереть покровное стекло к камере для подсчета форменных элементов. Первую каплю разведенной крови выпустить из смесителя на ватку и следующей каплей заполнить счетную камеру. Подсчитать количество лейкоцитов в 50 больших квадратах, что соответствует 800 малым квадратами (можно подсчитать количество лейкоцитов в 25 больших квадратах, и удвоить полученную величину). Считать при малом увеличении (×8 или ×10). Порядок подсчета лейкоцитов в квадратах следующий: первый ряд – слева направо, второй ряд – справа налево, третий ряд – слева направо и т.д. Количество лейкоцитов в 1 л крови определить по формуле:
где: Л – искомое число лейкоцитов; N – число подсчитанных лейкоцитов.
Для подсчёта лейкоцитов крови может быть использован пробирочный метод, предложенный Н.М. Николаевым. Для этого в лабораторную пробирку (сухую и чистую) длиной от 10 см и поперечником до 1 см наливают заранее 0,4 мл раствора уксусной кислоты (1–3%) с помощью градуированной пипетки на 1–2 мл.
Набирают из пальца кровь в капилляр от гемометра Сали до метки: 20 мм3 и добавляют в пробирку. Тем самым в пробирке с уксусной кислотой получается требуемое разведение лейкоцитов в 20 раз.
Перед подсчётом проводится размешивание отстоявшейся разведенной крови в течение 2–3 минут. При этом пробирку зажимают между указательным, средним и большим пальцами левой руки и размешивают энергичным встряхиванием.
После размешивания забирают из пробирки круглым спаянным концом тонкой стеклянной палочки каплю жидкости и вносят ее под притёртое стекло счетной камеры. Дав отстояться крови в камере, через 2–3 минуты приступают к подсчёту.
Результаты. Указать подсчитанное количество лейкоцитов.
Выводы. Сравнить полученное число лейкоцитов с их нормальным содержанием в крови. В норме у взрослого человека в крови содержится (4–9)∙109/л лейкоцитов.
Лабораторная работа № 14.3 Определение содержания гемоглобина гематиновым методом (метод Сали)
Цель: определить содержание гемоглобина в крови.
Объект исследования: человек.
Оборудование и материалы: игла-скарификатор, гемометр Сали, капилляр для забора крови при определении содержания гемоглобина, 0,1 N раствор соляной кислоты, марлевые салфетки, вата, спирт, настойка йода, дистиллированная вода, почкообразный тазик.
Порядок выполнения. Гемометр Сали (Рис. 14.4) представляет собой штатив, задняя сторона которого сделана из матового стекла. В штативе имеются три гнезда, в которые вставлены пробирки одинакового диаметра. Боковые пробки запаяны и содержат стандартный раствор гемоглобина (167 г/л), являясь эталоном для сравнения.
Средняя открытая пробирка предназначена для исследуемой крови и градуирована. На пробирке встречаются три типа градуировки: грамм/литр (г/л), грамм-проценты (г%) и относительные единицы (ед).
В среднюю пробирку гемометра налить до нижней круговой метки «10» 0,1 N раствор соляной кислоты. Соединить капилляр с резиновой трубкой. Набрать кровь из пальца в капилляр до метки «20» (первую каплю крови снять ватой).
Рис. 14.4. Гемометр Сали:
1 – корпус – стойка, 2 – крышка, 3 – винты, 4 – запаянные пробирки со стандартным раствором, 5 – градуированная пробирка, 6 – матовое стекло
Конец капилляра обтереть ватой, затем осторожно, не вызывая образования пены, выпустить кровь в кислоту. После этого содержимое пробирки перемешать, ударяя пальцем по ее концу, и оставить стоять 5–10 мин. Это время необходимо для полного превращения гемоглобина в солянокислый гематин, окрашивающий раствор в коричневый цвет. Спустя указанное время, к раствору в пробирке постепенно прибавлять, постоянно перемешивая, по каплям дистиллированную воду до тех пор, пока окраска жидкости в пробирке не будет совершенно одинаковой с окраской стандарта гемометра. Когда цвет раствора во всех пробирках станет одинаковым, определить, какой цифре по шкале соответствует уровень солянокислого гематина в средней пробирке. Деления по шкале гемометра показывают количество гемоглобина в граммах на 100 мл крови (г%). Перевести результаты в г/л.
Результаты. Указать найденное количество гемоглобина в г/л.
Выводы. Сравнить найденное количество гемоглобина с нормой.
В норме содержание гемоглобина у взрослого мужчины составляет 140–170 г/л, у женщин этот показатель ниже (120–150 г/л).
Следует отметить, что на современном уровне развития методов диагностики не ограничиваются определением общего количества гемоглобина. Решающее диагностическое значение имеет определение качественного состава гемоглобина (карбоксигемоглобин, метгемоглобин, гликозилированный гемоглобин и др.).