- •Принципы систематики:
- •11. Классификация патогенных прокариот по Берджи.
- •12. Принципы устройства иммерсионного, люминесцентного, электронного микроскопов. Типы микроскопических препаратов.
- •13. Основные формы микроорганизмов. Этапы приготовления микроскопических препаратов. Способы фиксации.
- •14. Методы микробиологических исследований. Бактериоскопический метод диагностики инфекционных заболеваний.
- •Структура прокариотной клетки
- •16. Характеристика клеточной стенки микробов.
- •17. Защитные приспособления микроорганизмов. Способы выявления капсул. Капсульные бактерии. Способы выявления спор. Спорообразующие бактерии. Микро- и макрокапсула бактерий
- •Окраска по Бурри-Гинсу:
- •Спора и спорообразование у бактерий
- •18. Жгутики бактерий. Определение подвижности.
- •19. Волютиновые зёрна. Химический состав. Функции. Способы окраски.
- •20. Простые и сложные методы окраски. Механизм окраски по Граму.
- •Окраска по Граму (механизм)
- •21. Морфология и ультраструктура спирохет. Методы микроскопии.
- •22. Актиномицеты. Систематическое положение. Роль в природе. Идентификация.
- •23. Морфология, классификация и способы обнаружения грибов.
- •24. Риккетсии. Таксономия патогенных риккетсий. Особенности размножения. Способы выявления.
- •25. Хламидии. Таксономия патогенных риккетсий. Особенности морфологии и развития. Способы выявления.
- •28. Микоплазмы. Таксономия. Особенности строения и размножения. Методы обнаружения.
- •29. Метаболизм бактерий. Транспорт питательных веществ. Типы питания.
- •30. Основные принципы конструирования питательных сред. Классификация.
- •31. Бактериологический метод диагностики.
- •32. Ферменты бактерий. Классификация. Практическое использование биохимической активности микроорганизмов для видовой идентификации.
- •33. Рост и размножение бактерий. Фазы размножения бактерий в закрытых системах.
- •34, 35 Классификация микроорганизмов по типу дыхания. Культивирование анаэробных бактерий. Этапы выделения культур анаэробных бактерий.
- •Культивирование и выделение чистых культур анаэробных бактерий.
- •Физические методы.
- •1. Регенерация (кипячение) жидких питательных сред.
- •2.Посев в «высокий столбик».
- •3.Выращивание культур в анаэростатах.
- •Химические методы.
- •1. Добавление в среду редуцирующих и легко окисляемых веществ.
- •Биологические методы.
- •Особенности выделения чистых культур анаэробных микроорганизмов.
3.Выращивание культур в анаэростатах.
Анаэростаты представляют собой металлические цилиндрические сосуды с герметически закрывающейся крышкой, в которой имеется ниппель для соединения его с насосом с помощью вакуумной резиновой трубки. Из анаэростата вакуумным насосом откачивается воздух. Степень разреженности воздуха контролирует манометр.
Аппарат Киппа. Более старый способ замены воздуха индифферентным газом, например водородом.
Химические методы.
1. Добавление в среду редуцирующих и легко окисляемых веществ.
Добавляют кусочки паренхиматозных органов ( печень, селезенка и др. ), глюкозу, аскорбиновую кислоту, цистеин. Применяют и неорганические восстановители: сульфиды, сероводород, цитраты.
2.Химическое поглощение кислорода воздуха происходит при добавлении, например щелочного раствора пирогаллола в особых приборах, примером которого может служить свеча Омелянского - стеклянный прибор в форме свечи. Внутрь помещают одну пробирку с жидкой средой с посевом анаэробов (среда Китта-Тароции). На дно прибора наливают щелочной раствор пирогаллола. Сверху прибор закрывают стеклянным колпачком и парафинируют;
3. Для образования водорода и углекислого газа, необходимых для роста облигатных анаэробов используются специальные пакеты, при добавлении воды в которые происходит активация с выделением соединений, которые связывают кислород воздуха (газогенераторные пакеты).
Биологические методы.
1.Совместное выращивание анаэробов и аэробов - Метод Фортнера. В основе метода лежит комбинированный посев культур анаэробов и аэробов. Посев производят в чашку Петри с толстым слоем сахарного кровяного агара (агар Цейсслера), который разделяют посредине чашки прокаленным стерильным скальпелем, вырезая небольшую полоску агара по диаметру. На одну половину среды засевают культуру аэробных бактерий, на другую - анаэробных. Чашку парафинируют и помещают в термостат. При росте аэробы поглощают кислород и создают тем самым условия для роста анаэробных бактерий.
2. Использование в питательных средах биологических редуцирующих веществ (кусочков печени, почек, крови, и др.).
Среда Китта-Тароции. Состав: МПБ, кусочки печени, глюкоза. Готовую среду сверху заливают слоем вазелинового масла и стерилизуют. Посев материала производят пастеровской пипеткой под слой масла.
Среда Цейсслера. Состав: МПА, 1% глюкоза, 20% дефибринированной крови. Используется для получения изолированных колоний анаэробных микроорганизмов, а также для изучения гемолитической активности бактерий.
Особенности выделения чистых культур анаэробных микроорганизмов.
Посевы с целью выделения анаэробной микрофлоры, как спорообразующей (клостридии), так и неспорообразующей (бактероиды, пептококки), производят в строго анаэробных условиях. Первичные посевы делают на обогатительные среды (тиогликолевую, Китта—Тароцци), затем пересевают на плотные среды: сахарный кровяной агар в чашки Петри, в высокий столбик сахарного питательного агара или другие среды для получения изолированных колоний. После инкубации посевов в анаэробных условиях из образовавшихся колоний бактерий готовят мазки, окрашивают, микроскопируют, а затем пересевают на среду Китта — Тароцци и агаровые среды для выделения чистой культуры. При выделении спорообразующих анаэробных бактерий (клостридии) первоначальные посевы прогревают на водяной бане при температуре 80 °С в течение 20 мин для уничтожения веге-тативных клеток посторонней микрофлоры, которая может присутствовать в исследуемом материале