10

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Методы исследования можно разделить на две большие группы:

1. По объекту исследования

2. По задачам

По объекту исследования:

1. Методы исследования живых клеток и тканей

1. непосредственно в организме (in vivo)

2. в культуре клеток и ткани – в пробирке (in vitro)

3. суправитальное исследование

• суправитальное - исследование живых клеток, выделенных из организма

II. Методы исследования фиксированных клеток и тканей

1. светооптическая микроскопия

2. гистохимическое исследование - выявление в срезах

веществ разной химической природы (ДНК, РНК, гликоген,

импрегнация серебром, эластические волокна и т.д.)

3. иммуногистохимическое исследование – с применением

антител к исследуемым антигенам

4. электронно-микроскопические исследования - исследова-

ние клеточных ультраструктур

По задачам:

1. Качественные методы - выявление структур

Методы:

1. светооптический

2. электронно-микроскопический

3. гистохимический

4. иммуногистохимический

2. Количественные методы – изучение размеров или числа структур

Методы:

1. Морфометрический (количественная электронная микроскопия, количественная гистохимия)

2. иммунофенотипирование

3. цитогенетический

4. авторадиографический

5. ДНК-цитометрия

Светооптический метод (традиционная качественная гистология)

Две части:

1. приготовление гистологических препаратов

2. микроскопия гистологических препаратов

Этапы приготовления гистологических препаратов:

1. Врачебные

2. Лаборантские

Врачебный этап:

1. забор материала -

- максимально должен отражать изучаемый объект

(столько кусочков, сколько необходимо)

- как можно более свежий

- кусочек не более 1 куб. см

- щадящее - острый инструмент, не сдавливать

2. маркировка

- простым карандашом ФИО, № истории болезни

3. фиксация

- цель – предотвратить разложение ткани

- закрепить прижизненные структуры

- формалин - 10%, нейтральный

- объем фиксатора должен быть в 20-100 раз

больше фиксируемого кусочка

- время фиксации – не менее 12 часо до

нескольких суток (для иммуногистохими

- не более 24 часов)

2. Лаборантские

4. проводка материала

а. промывка - отмывают от формалина

• в проточной воде до 1 часа

б. обезвоживание

- обеспечивает проникновение парафина

• проводка по спиртам восходящей крепости до абсолютного спирта (от 60 до 100 градусов)

в. уплотнение - парафиновая заливка материала - заливка в расплавленный до 56 гр парафин

г. формирование блока

• когда парафин застыл, вырезают кусочек ткани

• насаживают на деревянную или пластмас-

совую основу

5. приготовление срезов

• на микротомах

1. санные

2. роторные (серийные срезы)

3. замораживающие (срочные исследования)

6. окрашивание среза

красители:

1. основные - структуры ими окрашивающиеся

называют базофильными (ядро – гематоксилином – в

фиолетовый цвет)

2. кислые - структуры ими окрашивающиеся

называются - оксифильными или ацидофильными

(цитоплазма – эозином – розовый цвет)

3. специальные

жир - судан Ш - оранжевый

эластические волокна - орсеином- коричневые

нервная ткань - соли серебра – черная

(импрегнация)