- •Нингидриновая рекция
- •Хроматографическое разделение аминокислот на бумаге
- •Занятие 2 Физико-химические свойства белков
- •Вопросы для подготовки к занятию
- •Практическая часть занятия Высаливание белков сыворотки
- •Тепловая денатурация белков
- •Осаждение белков органическими растворителями
- •Осаждение белков органическими кислотами
- •Осаждение белков концентрированными минеральными кислотами
- •Домашнее задание
- •6. Выберите правильный ответ.
- •7.Выберите правильный ответ.
- •8.Выберите правильный ответ.
- •Занятие 3 Белки крови. Методы разделения белков.
- •Вопросы к занятию
- •Практическая работа
- •Домашнее задание
- •Занятие 4 Ферменты. Свойства. Механизм действия.
- •Цель занятия
- •Вопросы для подготовки к занятию
- •Практическая часть Специфичность действия ферментов
- •Влияние температуры на активность фермента
- •Влияние активаторов и ингибиторов на активность ферментов
- •Домашнее задание
- •Занятие 5 Коллоквиум по теме: «Белки. Ферменты»
- •Вопросы для самоподготовки
- •Занятие 6 Введение в обмен веществ. Биохимия питания
- •Лабораторная работа n1
- •Домашнее задание
- •Занятие 7 Минеральные вещества пищи. Региональные патологии, связанные с недостатком микроэлементов в пище и воде
- •Вопросы для самоподготовки
- •Практическая работа Определение кальция в моче трилонометрическим методом
- •Приложение для лечебного и медико-профилактического факультетов
- •Домашнее задание
- •Занятие 8 Сложные белки - хромопротеиды
- •Вопросы для подготовки студентов к занятию
- •Практическая часть
- •Домашнее задание
- •Занятие 9 Обмен хромопротеидов
- •Домашнее задание
- •Занятие 10 Биологическое окисление
- •Вопросы для подготовки к занятию:
- •Домашнее задание
- •Занятие 11 Свободно-радикальное и микросомальное окисление
- •Вопросы для самоподготовки
- •Приложение для педиатрического факультета
- •Домашнее задание
- •Занятие 12 Сложные белки - нуклеопротеиды
- •Вопросы для подготовки к занятию
- •Практическая работа Определение содержания мочевой кислоты в сыворотке крови и моче по методу Мюллера-Зейферта
- •Приложение 1
- •Приложение для педиатрического факультета
- •Занятие 13 Обмен нуклеопротеидов Виды передачи генетической информации
- •Занятие 14 Обмен белков
- •Практическая часть занятия
- •Занятие 15 внутриклеточный обмен аминокислот
- •Вопросы для подготовки к занятию
- •Практическая часть Определение активности алт и аст
- •Домашнее задание
- •Источники и пути обезвреживания аммиака в разных тканях
- •Занятие 16 Индивидуальные пути обмена аминокислот
- •Домашнее задание
- •Приложение для педиатрического факультета
- •Ретенция азота у детей различного возраста
- •Занятие 17 Коллоквиум по теме: «Нуклкопротеиды. Обмен нуклеопротеидов Белки. Обмен белков»
ЧЕЛЯБИНСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ
КАФЕДРА БИОЛОГИЧЕСКОЙ ХИМИИ
РАБОЧАЯ ТЕТРАДЬ ПО БИОЛОГИЧЕСКОЙ ХИМИИ
III СЕМЕСТР
ФАКУЛЬТЕТ_____________________________
сТУДЕНТ_____________________________
ГРУППА_____________________________
ПРЕПОДАВАТЕЛЬ_____________________________
ЧЕЛЯБИНСК
2006-2007
нАСТОЯЩЕЕ УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕСКОЕ ПОСОБИЕ СОЗДАНО КОЛЛЕКТИВОМ КАФЕДРЫ БИОХИМИИ ЧЕЛЯБИНСКОЙ МЕДИЦИНСКОЙ АКАДЕМИИ. сОЗДАНИЕ НАСТОЯЩЕГО ПОСОБИЯ БЫЛО ВЫЗВАНО НЕОБХОДИМОСТЬЮ - ПОМОЧЬ СТУДЕНТАМ В ОСВОЕНИИ СЛОЖНОГО ТЕОРЕТИЧЕСКОГО ПРЕДМЕТА - БИОЛОГИЧЕСКОЙ ХИМИИ.
в РАБОЧУЮ ТЕТРАДЬ ВНЕСЕНЫ ТЕМЫ ВСЕХ ЗАНЯТИЙ iii СЕМЕСТРА, ВНЕСЕНЫ ЛАБОРАТОРНЫЕ РАБОТЫ, ЧТО ЗНаЧИТЕЛЬНО ДОЛЖНО ОБЛЕГЧИТЬ ПОДГОТОВКУ СТУДЕНТА К ЗАНЯТИЮ. сТУДЕНТ СМОЖЕТ ПОЗНАКОМИТЬСЯ ЗАРАНЕЕ С ТОЙ ЛАБОРАТОРНОЙ РАБОТОЙ, КОТОРУЮ ЕМУ ПРЕДСТОИТ ВЫПОЛНИТЬ. в НЕЙ СФОРМУЛИРОВАН ПРИНЦИП МЕТОДА, ЧТО ПОМОЖЕТ СТУДЕНТУ НЕ ПРОСТО ВЫПОЛНИТЬ РАБОТУ, НО И ОСМЫСЛИТЬ ее.
кАЖДОЕ ЗАНЯТИЕ ИМЕЕТ ПРИЛОЖЕНИЕ ЛИБО ОБЩЕЕ ДЛЯ ВСЕХ ФАКУЛЬТЕТОВ, ЛИБО ДЛЯ каждого факультета, ЧТО ЗНАЧИТЕЛЬНО ЭКОНОМИТ ВРЕМЯ ПРЕПОДАВАТЕЛЯ НА ЗАНЯТИИ, ДАВАЯ ВОЗМОЖНОСТИ ДЛЯ РАССМОТРЕНИЯ И ЗАКРЕПЛЕНИЯ МАТЕРИАЛА.
сТУДЕНТ МОЖЕТ САМОСТОЯТЕЛЬНО ПРОВЕРИТЬ КАЧЕСТВО СВОЕЙ ПОДГОТОВКИ К ЗАНЯТИЮ, РЕШИВ СИТУАЦИОННЫЕ ИЛИ ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ. нЕВОЗМОЖНОСТЬ ОТВЕТА НА ВОПРОСЫ ДОМАШНИХ ЗАДАНИЙ ДОЛЖНО НАСТОРОЖИТЬ СТУДЕНТА О НЕКАЧЕСТВЕННОЙ ПОДГОТОВКЕ МАТЕРИАЛА ПО ДАННЫМ ВОПРОСАМ.
жЕЛАЕМ УСПЕХА В ИЗУЧЕНИИ ПРЕДМЕТА БИОЛОГИЧЕСКОЙ ХИМИИ!
Занятие 1
Химический состав и строение простых белков
Цель занятия. Освоить некоторые методы выделения белков из мышечной ткани.
Проанализировать аминокислотный состав выделенных из мышечной ткани белков, используя цветные реакции на белки и аминокислоты.
Вопросы для самоподготовки
Белки: элементный и аминокислотный состав. Физиологическая роль белков.
Гидролиз белков (кислотный, щелочной, ферментативный, полный и частичный).
Качественное обнаружение белков с помощью цветных реакций (биуретовой, нингидриновой).
Хроматографические методы изучения аминокислотного состава гидролизатов белков.
Практическая часть занятия
Биуретовая реакция
Принцип метода: реакция основана на том, что в щелочной среде в присутствиеи солей меди белки дают фиолетовое окрашивание, обусловленное образованием комплекса ионов меди с пептидной группировкой. Реакция позволяет обнаружить наличие пептидной связи в исследуемом веществе, и является универсальной реакцией для обнаружения веществ белковой природы.
Ход работы: в пробирку наливают 1-2 мл раствора белка, добавляют 1-2 мл 10% раствора NaОН и 1-2 капли 1% раствора CuSO4.
Результат:
Вывод:
Нингидриновая рекция
Принцип метода: основан на том, при нагревании с a-аминокислотами, а также полипептидами нингидрин образует фиолетово-розоватое окрашивание. При нагревании с нингидрином аминокислоты подвергаются окислительному дезаминированию идекарбоксилированию, при этом выделяется углекислый газ, аммиак, образуется альдегид, восстановленный нингидрин конденсирует с аммиаком и окисленным нингидрином, образуя окрашенное соединение.
Ход работы: к 0,5 мл раствора белка добавить 5 капель 0,2 % водного раствора нингидрина и прокипятить 2-3 минуты.
Результат:
Вывод:
Хроматографическое разделение аминокислот на бумаге
Определение содержания отдельных амнокислот методом хроматографии на бумаге важно для изучения обмена белков и аминокислот в организме. С помощью бумажной хроматографии можно легко провести разделение аминокислот, содержащихся в гидролизате различных белков, сыворотке крови, моче и т.д.
Принцип метода. Основан на том, что различные растворители (Н-бутанол СН3СООН; фенол, насыщенный водой и др.), смачивая хроматографическую бумагу, создают на ней две фазы: неподвижную водную фазу и подвижную фазу органического растворителя. Неподвижная водная фаза образуется в силу значительной гигроскопичности бумаги, т.е. свойства задерживать определенное количество влаги на поверхности волокон целлюлозы. Органический растворитель, двигаясь по бумаге, увлекает за собой аминокислоты, которые перемещаются с различной скоростью. Она зависит от способности аминокислот растворяться в органическом растворителе (или воде). От избирательной адсорбции, от окружающей температуры, сорта бумаги, растворителя и ряда других факторов.
Хроматографию проводят в герметических камерах, насыщенных парами растворителя.
Для проведения восходящей хроматографии на нижний конец хроматографической бумаги наносят определенный объем исследуемого раствора, высушивают, нижний край бумаги помещают в растворитель и бумагу закрепляют в этом положении. Камеру закрывают. Растворитель поднимается по бумаге и увлекает за собой аминокислоты. При этом происходит разделение аминокислот из смеси. После того, как фронт растворителя по бумаге достигнет определенного уровня, бумагу вынимают из камеры, высушивают, а аминокислоты проявляют с помощью нингидрина.
Скорость передвижения аминокислот на бумаге характеризуется коэффициентом распределения Rf. Это отношение расстояния от места нанесения аминокислоты до середины ее пятна (А) к расстоянию от места нанесения смеси аминокислот до фронта растворителя (Б) А
Rf.= ----
Б
Rf. является величиной, характерной для каждой аминокислоты, и постоянен при данных условиях опыта.
Ход работы. На конце полоски фильтровальной бумаги размером 1х15см сделать прокол иглой, продеть нитку, завязать петлю. На противоположном конце простым карандашм, отступив от края на 1 см, нанести кружок, в который наносят смесь аминокислот.
На дно пробирки, не задевая стенок, поместить 1,5 мл растворителя. Придерживая за нитку, опустить бумажку до соприкосновения ее нижнего краяс ратворителем и закрыть пробирку, чтобы бумажка висела на нитке, касаясь нижним краем растворителя. Через час бумагу вынимают, просушивают, смачивают 0,5% раствором нингидрина в ацетоне, снова просушивают, и помещают в термостат на 15 минут при температуре 55°С в темноте. Отмечают появление фиолетовых пятен. Проводят расчет для каждой аминокислоты.
Результат.
Вывод.
Домашнее задание:
Повторить классификацию и строение аминокислот (знать формулы)
Повторить типы связей в молекулах белка, стабилизирующих первичную, вторичную, третичную и четвертичную структуры.
Знать образование ди-, три- и полипептидов и их название.
Повторить методы изучения аминокислотного состава белков с помощью цветных реакций и хроматографии.
Литература:
Лекции по курсу биологической химии
Северин Е.С. Биохимия . М. 2003
Николаев А.Я. Биологическая химия. 2001
Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. 1998
Строев Е.А.Биологическая химия. 1986
Северин Е.С., Алейникова Т.Л., Осипов Е.В.. Биохимия. М. 2000
Северин Е.С., Николаев А.Я. Биохимия. Краткий курс с упражнениями и задачами. М. 2001
СПИСОК ДОПОЛНИТЕЛЬНОЙ ЛИТЕРАТУРЫ:
Страйер Л. Биохимия М. Мир. 1984
Уайт А., Хенглер Ф. Смит Э. и др. Основы биохимии, М. 1981
Марри Р. Греннер Д. Биохимия человека, 1993