Лабораторные работы / Лабораторная7 Физиология лейкоцитов
.docxФедеральное государственное автономное
образовательное учреждение
высшего профессионального образования
«СИБИРСКИЙ ФЕДЕРАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»
Институт фундаментальной биологии и биотехнологии
институт
Базовая кафедра биотехнологии
кафедра
Лабораторная работа №7
Физиология лейкоцитов
Физиология человека и животных с основами высшей нервной деятельности
дисциплина
____________________________________________________
____________________________________________________
Преподаватель:
Студент:
Красноярск 2019
Тема работы: Физиология лейкоцитов. Определение СОЭ, группы крови, резус фактора.
Цель работы: Познакомиться с методиками подсчета лейкоцитов и их значением для организма.
Оборудование: спирт, йод, вата, стерильный скарификатор, капилляры Сали, раствор цитрата натрия, 3-5% раствор уксусной кислоты с добавлением метиленового синего, камера Горяева, покровное стекло, пипетка на объем 1 мл, обезжиренные предметные стекла (обезжиривание стекол производят смесью Никифорова), краска Романовского-Гимза, фосфатный буфер рН 7,4, этиловый спирт.
Ход работы:
Работа № 1. Определение количества лейкоцитов в крови.
Определение количества лейкоцитов так же как и эритроцитов осуществляется в камере Горяева. Разведение крови производят в 20 раз 3-5% уксусной кислотой. При этом эритроциты разрушаются и не мешают счету.
Пипеткой отмерьте 0,4 мл разводящего раствора (3-5% раствора уксусной кислоты), подкрашенной метиленовым синим и перенесите в чистую пробирку.
Кровь забирайте в капилляр Сали, наполняя его самотеком до метки (0,02). Кончик капилляра вытрите и перенесите кровь в пробирку с разводящим раствором. Получается разведение 1:20. Подсчет количества лейкоцитов производите в 5 больших квадратах камеры Горяева (лабораторная работа «Физиология красной крови»). Расчет количества лейкоцитов в 1 мкл крови осуществляется с учетом разведения, объема камеры и числа подсчитанных квадратов:
Х=(Nх4000х200)/80
Полученное количество лейкоцитов обычно выражают в количестве на 1л крови (полученный результат умножается на 10^6 ).
Вывод: Полученное число лейкоцитов равно 11 x 10^9 , данный показатель может быть обусловен различными физиологическими отклонениями, так и лейкоцитозом. Норма 7-9 х 10^9.
Работа №2. Изучение морфологии лейкоцитов.
Исследование морфологии лейкоцитов производят микроскопированием мазков крови, окрашенных по Романовскому. Принцип метода окраски мазков состоит в избирательном поглощении веществами клетки трех красящих веществ – азура, метиленового синего и эозина. Азур имеет амфотерноосновную реакцию, метиленовая синька – щелочную, эозин – кислую.
Каплю крови поместите на край чистого обезжиренного предметного стекла и сделайте мазок с помощью другого предметного стекла со шлифованным краем. Вторым предметным стеклом со шлифованным краем прикоснитесь к капле крови и как только капля, коснувшись подвижного стекла, разойдется по линии соприкосновения стекол, верхним стеклом, держа его под углом 45, проведите по первому стеклу в направлении от капли, чтобы получился мазок.
Мазок должен быть достаточно тонким, чтобы клетки крови располагались в один слой; в то же время следует избегать чрезмерного надавливания, для избежания деформации лейкоцитов. Приготовленные мазки высушивают на воздухе и затем фиксируют и окрашивают с использованием нескольких способов.
Вариант 1 фиксация и окраска мазка (классческий)
Вариант 2 фиксация и окраска мазка (ускоренный способ)
Окрашенный и высушенный мазок исследуйте под микроскопом с иммерсией.
В поле зрения основную площадь занимают безъядерные эритроциты и один – несколько лейкоцитов с ядрами.
Лейкоциты крупнее эритроцитов по размерам; ядра окрашены в фиолетовый цвет. Нейтрофилы имеют бледно-розовую цитоплазму с нейтрофильными гранулами, окрашивающимися в розово-фиолетовый цвет. Палочкоядерные нейтрофилы, являющиеся более молодыми клетками, имеют ядро в виде изогнутой па лочки. У зрелых нейтрофилов ядро вследствие перекручивания разделено на ряд сегментов, связанных очень тонкими, иногда почти незаметными нитями. У эозинофилов и базофилов цитоплазма окрашена очень слабо. Базофилы в цитоплазме содержат крупные темные фиолетовые или ультрамариновые гранулы, часто закрывающие отдельные участки ядра. Ядро базофилов неправильной формы, окрашивается в фиолетово-розовый цвет. Клетки лимфоцитов округлые, с круглым или овальным ядром, которое окружено или очень узким (малые лимфоциты) или более широким (средние и большие лимфоциты) пояском цитоплазмы. Моноциты крупнее лимфоцитов, большей частью круглой, иногда неправильной формы, с хорошо выраженной цитоплазмой. Цитоплазма моноцитов серо-голубая.
Лейкоцитарная формула:
|
Палочкоядерные Нейтрофилы |
Сегментоядерные Нейтрофилы |
Эозинофилы |
Базофил |
Лимфоцит |
Моноцит |
% |
3 |
60 |
2 |
1 |
30 |
4 |
Норма % |
2-5 |
55-68 |
1-4 |
0,25 – 0,75 |
25 – 35 |
6-8 |
Вывод: В исследуемом мазке показатели в пределах нормы, наблюдается незначительный базофилёз.
Работа №3. Определение СОЭ.
Метод основан на определении высоты столба плазмы крови, стабилизированной цитратом натрия, над осевшими за 1 час форменными элементами: среди которых преобладают эритроциты, в капилляре Панченкова.
Набрали стабилизированную кровь в каппиляр, оставили на 1 час.
СОЭ = 22 мм,
Вывод: показатель немного выше нормы, исследуемая кровь скорее всего принадлежит женщине.
Работа № 4. Определение группы крови системы АВ0.
Под группами крови АВО понимают различные сочетания антигенов (агглютиногенов), находящихся в эритроцитах, и антител по отношению к ним (агглютининов), находящихся в плазме крови.
Метод определения группы крови системы АВ0 основан на смешивании капли крови с раствором, содержащим агглютинины - антитела против антигенов А и В (агглютиногенов).
Исследование группы крови производите в цельной крови, забранной из пальца. На планшет в разные лунки индивидуальными пипетками нанесите растворы анти-А и анти-В по одной большой капле (0,1 мл). Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01-0,03мл).
Стеклянной палочной (разными концами в каждой лунке) смешайте кровь с реагентами. За ходом реакции наблюдайте визуально при легком покачивании пластины в течение 3 мин.
Анти - А |
Анти - B |
Тип крови |
- |
- |
0 (1) |
+ |
- |
А (2) |
- |
+ |
B (3) |
+ |
+ |
AB (4) |
«+» - наличие агглютинации, «-» - отсутствие агглютинации
Вывод: В исследуемой крови наблюдалась агглютинация в лунках с раствором анти – а , в лунке с анти-б реакция не развивалась, следовательно исследумая кровь принадлежит к 2 группе крови (А).
Работа № 4. Определение резус-фактора.
Определение резус-принадлежности заключается в выявлении в эритроцитах крови человека наличия или отсутствия особого белка (антигена), названного резус-фактором.
Исследование группы крови производите в цельной крови, забранной из пальца. В лунку эмалированного планшета внесите большую каплю (0,1 мл) реагента – раствора с антирезусными антителами. Рядом поместите маленькую каплю исследуемой крови (0,01-0,03мл). Стеклянной палочкой кровь смешайте с реагентом.
Результат реакции в лунках может либо положительным, либо отрицательным.
Вывод: Агглютинация присутствует, резус фактор исследуемой крови положительный.