2.Разрушение кл. И экстракция. Центр-е

Ц. применяется для разделения неоднородных ж. сред.

Ц. позволяет разделить смесь, состоящую из 2 или более компонентов с разной удельной плот., если по крайней мере один из этих компонентов - жидкость.

Разделение веществ с помощью Ц. основано на разном поведении частиц в центробежном поле. В центробежном поле частицы, имеющие разную плотность, форму или размеры, осаждаются с разной скоростью.

Ц. можно выделять кл. органеллы из гомогенатов тканей. Основные компоненты кл. осаждаются в следующей последовательности: сначала целые кл. и их фрагменты, затем ядра, хлоропласты, митохондрии, лизосомы (или другие микротельца), микросомы (фрагменты гладкой и шероховатой эндоплазматической сети) и, наконец, рибосомы.

частицы одинаковой массы, но различной формы осаждаются при разных скоростях.

Препаративное Ц. заключается в выделении биол-го материала для последующих б-х. исследований (для изучения их морфологии, структуры и биолог. активности). Выделяют таких биолог. макромолекул, как ДНК и белки, из предварительно очищенных препаратов.

Аналитическое Ц. применяется главным образом для изучения чистых и практически чистых препаратов макромолекул или частиц, например, рибосом. Тогда используется небольшое количество материала, а седиментация исследуемых частиц непрерывно регистрируется с помощью специальных оптических систем. Метод позволяет получать данные о чистоте, молекулярной массе и структуре материала.

3. Разделение белков путем осаждения

Чтобы осадить белок из раствора, надо лишить его обоих факторов стабилизации: и заряда, и гидратной оболочки.Способы осаждения делятся на две группы:ОСАЖДЕНИЕ НАТИВНЫХ БЕЛКОВ Чтобы сохранить нативность белковой молекулы, ее заряд можно устранить только одним способом: приблизить рН среды к изоэлектрической точке белка (ИЭТ), а для большинства белков нашего организма ИЭТ находится в слабокислой среде. Другой фактор стабилизации - гидратную оболочку можно устранить разными способами.ВЫСАЛИВАНИЕ- это осаждение Б высокими концентрациями нейтральных солей щелочных и щелочноземельных металлов, поскольку такие соли очень гидрофильны и обладают в высоких концентрациях водоотнимающими св-вами. Чаще это NaCl, Na₂SO₄, (NH₄)₂SO₄, CaCl₂. По мере добавления таких солей к раствору белка они сначала растворяюся с помощью высаливания можно разделить белки с разной степенью гидрофильности. Таким способом, например, можно разделить альбумины и глобулины плазмы крови.

При высаливании сохраняется нативность белковых молекул. ОСАЖДЕНИЕ ДЕНАТУРИРОВАННЫХ БЕЛКОВ а) ДЕЙСТВИЕ СОЛЕЙ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ. Образуют соединения с SH-группами белков. Ядовиты для человека и животных. б)КИПЯЧЕНИЕ (или просто нагревание до высоких температур) - теряется нативность, белковая молекула “разворачивается”, гидрофобные структуры выходят наружу. Это приводит к потере гидратной оболочки, молекулы сближаются и взаимодействуют друг с другом. Это приводит к тому, что белок выпадает в осадок. При охлаждении нативность не восстанавливается.Обычно, когда говорят о высаливании, имеют в виду высаливание именно сульфатом аммония. Раньше этот метод применялся и для фракционирования, сейчас, в основном, как дешёвый и удобный метод осаждения белков.