3.Моноклональні антитіла

Уже в 60-ті роки ХХ ст. розроблено методи злиття соматичних клітин тварин і людини. У процесі використовували вірус Сендай і ПЕГ, які збільшують вірогідність утворення гібриду.

Один з результатів методу злиття клітин ссавців швидко знайшов застосування в БТ. Це лінії клітин, що одержуються при гібридизації за участю клітин мієломи та лімфоцитів, за допомогою яких можуть виробляти моноклональні антитіла, тобто антитіла здатні реагувати лише з одним антигеном. Мієломи – злоякісні утворення імунної системи, які мають здатність до необмеженого росту і продукують (синтезують) один тип білків – антитіл. Тобто це природний продуцент моноклональних антитіл. Більшість антигенів викликає в організмі утворення набору суміші антитіл. Але кожен лімфоцит продукує лише одне антитіло. Та лімфоцити не можуть рости в культурі. В-лімфоцити обробляють вірусом Енштейна-Борр і .....

“Безсмертні” клітини одержують злиттям ракових клітин з клітинами, що продукують цінні речовини. Такі клітини називають гібридоми.

Метод їх одержання розроблений в Кембріджі Мільштейном і Келлером. Проводять злиття нормальних лімфоцитів і клітин мієлом. Спочатку гібридоми синтезують 2 типи антитіл батьківських клітин, а далі внаслідок елімінації хромосом утворюються клітини здатні синтезувати антитіла одного типу. Скрінінг і виділення клону, синтезуючого необхідне антитіло, ведуть за допомогою біохімічних та імунологічних методів.

Цим методом (для злиття використовували ПЕГ) одержували антитіла для великої кількості антигенів. Одержання гібридом на основі мієломних клітин та імунізованих лімфоцитів складається із наступних етапів:

1. Одержання мієломних клітин і підготовка їх до гібридизації.

2. Одержання лімфоцитів – продуцентів антитіл до заданих антигенів.

3. Злиття мієломних клітин з лімфоцитами (використовують ПЕГ, вірус Сендай і лізолецитин, а також електричний імпульс).

4. Скрінінг гібридомних клітин.

5. Перевірка здатності продукувати задані моноклональні антитіла.

6. Клонування гібридомних клітин з контролем на стабільність імунних властивостей.

7. Одержання масових культур гібридомних клітин.

Загальна схема одержання гібридом (імплантація in vitro)

Антиген

Організм тварин

В-лімфоцити х клітина мієломи

(селезінка, лімфатичні вузли)

злиття

(ПЕГ, електрошок ін.)

гібридома

селекція на середовищі ГАТ

тестування

(РІА, ІФА, імунофлуоресценція)

клонування

(2-3 рази)

кріоконсервація

культивування

масове культивування культивування в тваринних

гібридом для одержання організмах у вигляді

великої кількості антитіл асцитних пухлин

Моноклональні антитіла використовують в діагностиці, наприклад:

► при визначенні групи крові;

► при пересадці органів і тканин;

► для вивчення функціонування (мічених) нейронів, клітинних мембран та ін.;

► при очищенні білка та інших сполук (імуноадсорбція);

► пасивна імунізація (не вдалося ще одержати стабільні клони на основі клітин людини);

► при встановленні алергену.

Гібридоми можна зберігати в замороженому стані (гібридомні банки в інститутах і лабораторіях).