- •Методические указания для студентов к практическому занятию
- •Санитарная микробиология пищевых продуктов, санитарный контроль бактерионосительства у персонала пищеблоков. Микробиология холеры и галофилезов»
- •Владивосток – 2013 г.
- •2. Мотивация изучения темы.
- •3. Цели занятия.
- •4. Задания для самостоятельной подготовки к практическому занятию:
- •4.1. Перечень контрольных вопросов для самоконтроля знаний.
- •I раздел:
- •II раздел:
- •4.2. Задания для срс во внеучебное время
- •Методические указания по выполнению практической работы с полным регламентом протокола занятия и его оформлением
- •5.3. Задания для самоконтроля подготовки к практическому занятию.
- •6. Этапы проведения практического занятия.
- •7. Ориентировочная основа действия (оод) для проведения самостоятельной работы студентов в учебное время (курация, выполнение лабораторной работы и т.Д.).
- •9. Учебно-материальное обеспечение:
- •9.1 . Литература:
- •9.2. Базы данных, информационно-справочные и поисковые системы:
- •Методы исследования пищевых токсикоинфекций:
- •Внутрибольничный сальмонеллез
- •Бактериологическое исследование
- •2. Микроскопия (1, 2 делают для того, чтобы убедиться в чистоте культуры)
- •Методы дополнительного тестирования и диагностики
- •Материал исследования
- •Микробиологическая индикация ботулизма у больных и пищевых объектах:
- •Токсинообразование у бацилл ботулизма:
- •Сальмонеллезных токсикоинфекций
- •Сальмонеллезов
- •Объекты и материал для диагностики
- •Мероприятия, направленные на предупреждение заноса инфекции в стационары и возникновение госпитальных сальмонеллезов:
- •Классификация семейства Vibrionaceae
- •V.Harveyi V.Marinus
- •V.Parahaemolyticus V.Minicus
- •Основные дифференциальные признаки возбудителей холеры
- •Развернутая дифференциальная характеристика холерных 01 и основных видов холерных не 01 вибрионов
- •Бактериологического исследования (начальный этап)
- •Ускоренный метод диагностики холеры
- •I этап:
- •Экспресс-методы диагностики вибрионов
- •Особенности иммунолюминисцентной диагностики холеры – риф и рниф
- •Питательные среды
- •Фаготипирование холерными диагностическими бактериофагами хдф холерных вибрионов Эль-Тор с одновременной дифференциацией их патогенности
- •Фаготипирование энтеротоксигенных неагглютинирующих вибрионов (наг) не 01 группы типовыми бактериями тэпв к энтеропатогенным вибрионам
- •Характеристика генетической основы патогенности
- •Галофильные вибрионы
- •Основные свойства некоторых морских галофильных и не галофильных вибрионов, патогенных для человека
Бактериологического исследования (начальный этап)
Материал
1.Рвотные массы 4.Кровь 6.Отделяемое ран
2.Промывные воды желудка (дефибриниров.)
3.Испражнения 5.Спинномозговая жидкость
1-2г или мл
первая среда
обогащения 1 мл
50 мл 1% п.в. Э.С.
Щ.А.М. с 1,5% NaCl
1-й день через 6-8 часов через 6-8 часов
исследования инкубации при инкубации при
37оС 9 мл 37оС п.в.
МПБ с с 1,5%
1,5%NaCl NaCl
Э.С.
вторая среда
обогащения
10 мл 1% п.в. Щ.А.М.
Щ.А.М. Щ.А.М.
вторая среда
обогащения
1% п.в. с
1,5% NaCl
__________________________________________________________________
1-й день 1. Посев на щелочной агар (Щ.А.М.) и на одну элективную среду
(Э.С.)
2-й день 2. Отбор колоний, подозрительных на вибрионы с посевов
предыдущего дня:
а) подозрительные на холерные вибрионы колонии агглютинируют холерными 01, RО и 0139 сыворотками; при
положительных результатах проводят исследования, направленные на выделение и идентификацию возбудителя холеры.
б) подозрительные на холерные не 01 группы и др.виды вибрионов колонии на щелочном агаре и элективной среде отсеивают одной петлей на среду Ресселя и в 1% пептоновую воду без NaCl и с 5-10 % NaCl.
3-й день 1. Изучение посевов со 2-го пептона и выделение подозрительных
колоний (культур) проводят так же, как и с 1-го пептона.
2. Учет роста культур в 1% пептонной воде без NaСl и на среде
Ресселя.
3. Постановка пробы на индофенолоксидазу с культурой со среды Ресселя и реакция агглютинации с холерным 01 и 0139 сыворотками на стекле с культурами, выросшими в 1% п.в. без NaCl и давшие характерные изменения на среде Ресселя.
4. Изучение морфологии клеток в мазках, окрашенных по Граму.
5. Посев отобранных культур (галофильных вибрионов) в дифференциально-диагностические среды, содержащие 1,5% NaCl.
6. Определение чувствительности культур к вибриостатику 0/129.
4-й день 1. Учет результатов тестов идентификации. Определение вида выделенных культур вибрионов.
2. Идентификация культур, выделенных со второго пептона.
5-й день Учет результатов исследования. Выдача ответа (окончательного).
__________________________________________________________________
Примечание: в связи с высокой энергией роста холерных вибрионов учет результатов на каждом этапе проводят несколько раз, через 4-8 часов.
Приложение №10
Ускоренный метод диагностики холеры
Вид: Микроскопическое изучение Кал, рвотные массы, желчь,
(рисового отвара)
I этап:
Грам «- » вибрионы Раздавленная капля Иммунофлюоресценция
Подвижность РИФ, РНИФ
Посев на комплект сред:
Б/фаг
МукарджиIV
Пептон 1% пепт. 1% пепт. 5% кров. Щелочной МПА с
1% вода вода + вода + МПА с дисками антибиотиков
01 сывор. 0,5% эритроцитами (полимиксин) и б/фагом
крахмала барана
II этап: Учет по принципу I этапа каждые 4-6 часов в течение суток.
Пленчатый рост Агглютинат 01 При добавлении Гемолиз Индивид. рез-ты
Грам «-» вибрион вибриона йода: V.eltor Х.в. – чувств к
Подвижны Нет его – при Нет синевы при Нет его - полимиксину и
не 01 вибрионах х.в. 01 холерный б/фагу;
Синева – при вибрион Эль-Тор – нет
вибр. Эль-Тор.
За сутки этим методом можно получить окончательные результаты