Выполнение лабораторной работы

1. Изучить схемы лабораторной диагностики бешенства по демонстрационным таблицам.

2. Микроскопировать в световом микроскопе демонстрационный микропрепарат эмульсии аммонового рога (окраска по Муромцеву).

3. Изучить иммунобиологические препараты, применяемые для профилактики бешенства.

4. Оформить протокол.

Правила оформления протокола

1. Ответить на контрольные вопросы.

2. Зарисовать схему строения вируса бешенства (по демонстрационной таблице).

3. Зарисовать схемы лабораторной диагностики бешенства (по демонстрационным таблицам).

4. Зарисовать демонстрационный микропрепарат телец Бабеша – Негри.

5. Дать характеристику иммунобиологическим препаратам, применяемым для специфической профилактики бешенства.

Тема лабораторной работы: Ретровирусы, вирусологическая диагностика ВИЧ инфекции.

ЦЕЛИ: знать биологические свойства ретровирусов, их морфологические и физиологические особенности, цитопатическое действие. Методы диагностики. Препараты для лечения; уметь учитывать и интерпретировать результаты вирусологических исследований.

Материально-техническое оснащение

1.Инструменты и оборудование: Планшеты, матрасы, питательные среды, буферные растворы для культур клеток. Серологические реакции. Наборы диагностикумов и диагностических сывороток для серодиагностики вирусных инфекций. Микроскоп.

2.Схемы и таблицы: «Строение ВИЧ», «Схема иммуноблотинга», «Схема иммуноферментного анализа».

Контрольные вопросы

1. Дайте характеристику биологическим свойствам возбудителя ВИЧ. Значение вируса в патологии человека.

2. Назовите основные группы генов и кодируемые ими антигены ВИЧ.

3. Перечислите механизмы и пути инфицировании человека ВИЧ- инфекцией.

4. Каковы особенности микробиологической диагностики ВИЧ-инфекции.

5. Результаты каких исследований подтверждают диагноз ВИЧ- инфекции?

6. Перечислите препараты, используемые для лечения ВИЧ-инфекции.

Выполнение лабораторной работы

1.Изучить по демонстрационным таблицам схемы микробиологической диагностики ВИЧ-инфекции.

2.Ознакомиться с демонстрационными тест-системами для диагностики ВИЧ-инфекции (ИФА, иммуноблоттинг).

3.Учесть демонстрационный ИФА при ВИЧ-инфекции. Дать оценку результата, наметить план дальнейшего обследования больного.

4. Познакомиться с биологическими препаратами для диагностики, лечения ВИЧ.

5. Оформить протокол.

Правила оформления протокола

1.Ответить на контрольные вопросы.

2.Зарисовать по демонстрационной таблице схему строения ВИЧ.

3.Ознакомиться с демонстрационными тест-системами для диагностики ВИЧ-инфекции (ИФА, иммуноблотинг).

4. Учесть демонстрационный ИФА при ВИЧ-инфекции: записать ингредиенты, схематично зарисовать результат реакции. Оценить результат.

5. Учесть демонстрационный иммуноблотинг при ВИЧ-инфекции: записать ингредиенты, схематично зарисовать результат реакции. Оценить результат.

6. Дать характеристику иммунобиологическим препаратам, применяемым для специфического лечения ВИЧ инфекции.

Дополнительный материал

Диагностика ВИЧ-инфекции: Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции включает в себя ин­дикацию ВИЧ и его компонентов в материале от больных и выяв­ление противовирусных антител в крови больных и ВИЧ-инфи­цированных.

Выделение вируса. При выделении ВИЧ из организма больно­го материалом служит кровь (периферические Г-лимфоциты), биоптаты костного мозга (лейкоциты), пунктаты из лимфоузлов, сперма, спинномозговая жидкость, возможно, слюна, секционный материал. Культивирование вирусов чрезвычайно затруднено в связи с использованием сложных в работе культур клеток лимфо­цитов, клеток МТ-2 и МТ-4, полученных из лимфоцитов пу­почной вены при трансформации вирусом HTLV-1.

Вирусы обнаруживаются в культуре клеток по выраженному ЦПД, образованию симпластов или с помощью РИФ, электрон­ной микроскопии. Возможно определение активности специфи­ческого фермента ретровирусов — РНК-зависимой-ДНК-полимеразы (обратной транскриптазы).

Серологическое исследование. При рутинной диагностике наи­более распространены методы серологических исследований, при которых выявляют специфические антитела в крови больных. С этой целью используют ИФА, РИА, РИФ. ИФА проводится по непрямому или конкурентному методу. В реакциях используют тест – системы, включающие антигены, выделяемые из инфицирован­ных клеточных культур либо полученные с помощью рекомби­нантных ДНК. Для уменьшения количества ложноположительных результатов ИФА рекомендуется проведение фотометрического учета с ис­пользованием световых волн разной длины, например 492 нм и 690 нм.

Высокоспецифичным для диагностики ВИЧ-инфекции явля­ется метод иммунноблотинга. При этом прово­дится электрофоретическое разделение вирусных белков с после­дующим перенесением их на мембрану из нитроцеллюлозы. Затем мембрана обрабатывается исследуемой сывороткой. Заключитель­ный этап исследования состоит в выявлении антител к различ­ным белкам ВИЧ. Для этого в систему добавляют антивидовые меченые сыворотки. Результаты им­муноблотинга считают положительными при обнаружении анти­тел к определенным вирусным антигенам: p24, p31, а также к gp41 или к gp120.

Другие методы исследования. Высокочувствительными и спе­цифичными являются молекулярно-биологические методы, в част­ности ПЦР. Обнаружение ВИЧ в крови методом ПЦР возможно в двух вариантах: ПЦР-анализ ДНК провируса ВИЧ, интегри­рованного в геном мононуклеаров периферической крови, и ПЦР-анализ РНК ВИЧ, входящей в состав вирионов. Качествен­ная ПЦР на ДНК провируса используется для диагностики ВИЧ- инфекции, а ПЦР на РНК вируса — для количественного опре­деления концентрации ВИЧ в крови с целью прогноза уже установленной ВИЧ-инфекции. Чувствительность ПЦР на про – вирусную ДНК в настоящее время составляет от 96 до 99%, что объясняют очень низким содержанием провирусной ДНК в клетках крови, а также высокой вариабельностью ВИЧ и неравномерным географическим распространением подвидов вируса. В настоящее время ведется работа по подбору новых праймеров, позволяющих с большей эффективностью выявлять разные подвиды и вариан­ты ВИЧ.

Тема лабораторной работы: Вирусы парентеральных гепатитов С, D. Вирусологическая диагностика.

ЦЕЛИ: знать биологические свойства вирусов парентеральных гепатитов, их морфологические и физиологические особенности, цитопатическое действие. Методы диагностики. Препараты для лечения; уметь учитывать и интерпретировать результаты вирусологических исследований.