- •1) Цитология - ее цели и задачи. Этапы развития цитологии.
- •2) Развитие современной цитологии. Выявление ультрамикроскопических особенностей, присущих специализированным клеткам.
- •3) Современные положения клеточной теории.
- •4) Методы цитологических исследований. Световая микроскопия - основной метод наблюдения клеток.
- •5) Дифференциальное центрифугирование - метод получения отдельных клеточных компонентов для цитохимического и биохимического анализа.
- •6) Клетки прокариот и эукариот. Особенности и различия в их строении.
- •7) Цитоплазматическая мембрана. Современные представления о строении мембран.
- •8) Надмембранные структуры эукариотических клеток.
- •9) Микрофибриллярная система или система микрофиламентов (актин-миозин).
- •10) Тубулиновая система или система микротрубочек (тубулин-динеин)
- •11) Проявление единства субсистем поверхностного аппарата клетки в реализации основных функций: барьерной, транспортной, рецепторной и контактной.
- •12) Мембранный транспорт макромолекул и частиц; экзоцитоз и эндоцитоз.
- •13) Контактная функция плазматической мембраны. Межклеточные контакты.
- •14) Адгезионные (механические): поясковые десмосомы, точечные десмосомы, полудесмосомы.
- •15) Замыкающие контакты: плотный, промежуточный.
- •16) Проводящие контакты: щелевой контакт, химические синапсы и плазмодесмы.
- •17) Особенности развития и строения прокариотических клеток. Основные гипотезы происхождения прокариотной клетки и ее компартментов.
- •18) Цитоплазма. Общий химический состав цитоплазмы. Организация цитозоля.
- •19) Включения в цитозоле растительных клеток, их локализация и функциональное значение.
- •20) Включения в цитозоле животных клеток, их локализация и функциональное значение.
- •21) Морфология, локализация и структура митохондрий.
- •22) Локализация в мембранах митохондрий основных звеньев окислительного фосфорилирования.
- •23) Митохондрия как полуавтономный органоид.
- •24) Хлоропласты - энергообразующие органоиды растительных клеток.
- •25) Эпр. Строение и химический состав.
- •26) Комплекс Гольджи. Общая характеристика, локализация в клетке, ультраструктура.
- •27) Лизосомы. Структура лизосом и их химическая характеристика.
- •28) Пероксисомы (микротельца). Структура пероксисом. Их химическая характеристика. Функциональное значение пероксисом.
- •29) Структурная и функциональная взаимосвязь всех компартментов вакуолярной системы.
- •30) Роль ядра в жизни клетки и его значение в переносе информацииот днк к белку.
- •31) Основные элементы структуры интерфазного ядра: совокупность интерфазных хромосом (хроматин или днп интерфазного ядра), поверхностный аппарат ядра, ядерный сок (кариоплазма) и ядрышко.
- •32) Разновидности хроматина: деспирализованный эухроматин, конденсированный гетерохроматин и факультативный гетерохроматин. Функциональное значение типов хроматина.
- •33) Функция гистонов, как регуляторов транскрипции и укладки молекул днк. Структурная организация хроматина.
- •34) Основные компаненты поверхностного ядерного аппарата клетки: ядерная оболочка, периферическая плотная пластинка (ламина) и поровые комплексы.
- •35) Кариоплазма. Химический состав.
- •36) Ядрышко - органоид клеточных рибосом. Химия ядрышка, рнк ядрышка.
- •37) Структурно-биохимическая организация рибосом, их роль в синтезе белка.
- •1 Этап. Инициация.
- •2 Этап. Элонгация (удлинение цепи).
- •3 Этап. Детерминация (окончание).
- •38) Гипотезы происхождения эукариотической клетки и основных компартментов эукариотических клеток.
- •39) Жизненный цикл клетки: пресинтетическая, синтетическая, постсинтетическая стадии, митоз.
- •40) Деление прокариотических клеток. Особенности репродукции прокариот.
- •41) Общая организация митоза эукариотических клеток.
- •42) Мейоз, стадии мейоза. Конъюгация хромосом, кроссинговер, редукция числа хромосом.
- •43) Особенности профазы I мейоза.
- •44) Основные различия между митозом (непрямым делением) и мейозом (редукционным делением)
- •45) Котрансляционный транспорт растворимых белков на мембранах гранулярного эпр.
- •46) Клеточный центр: центриоли и диплосома.
- •47) Центросомный цикл в животной клетке.
- •48) Различные типы митоза эукариот.
- •49) Динамика митоза и цитокинеза.
4) Методы цитологических исследований. Световая микроскопия - основной метод наблюдения клеток.
Методы цитологического исследования:
1) Непосредственное наблюдение живых клеток в организме (витальный) или в свежевыделенной ткани (суправитальный).
2) Наблюдение клеток убитых с помощью фиксации, которая сохраняет морфологическую и химическую структуру.
После фиксации любой материал подвергают окрашиванию. Красители – натуральные и синтетические.
Синтетические – кислые и основные. Основные - соли красящих оснований, содержащие аминогруппы, монометиламиногруппы, иминогруппы. Эти группы определяют щелочность красителей. Попадая внутрь клетки, эти группы образуют солевые связи с кислотами, находящимися в структуре клетки, что приводит к их окрашиванию. Кислотные группы клетки - базофильные.
Кислые красители – красящие кислоты или их соли (эозин, пикриновая кислота, азокармин и др.). Кислотные свойства придают нитрогруппы, гидроксильные, карбоксильные группы. Структурные компоненты – ацитофильные или оксифильные.
Широкое распространение получило гистохимическое или цитохимическое окрашивание, которое подразделяется на прямое или косвенное. К прямым методам относят приемы, специфичные для вещества, которые хотят определить. Выявление ДНК – с реактивом Шиффа.
Чтобы обнаружить активность фермента, используют непрямой гистохимический способ или метод ферментативного переваривания. Для этой цели клетки помещают в среду, содержащую субстрат для данной ферментативной реакции и реагенты, связывающие специфически с конечными продуктами реакций.
Краситель Азур связывает и окрашивает цитоплазму, ядро и ядрышко. Предварительная обработка клетки ферментом РНК-азой приводит к тому, что цитоплазма и ядрышко будет окрашиваться слабо, а ядро не изменит в своей окраске. Если же клетку предварительно обработать ДНК-азой, то почти полностью исчезнет окрашивание структур ядра.
На современном этапе особое значение имеют точные способы выявления структур – иммунохимические методы. Это реакции с использованием флуоресцентных антител. Для этого на белок, который хотят определить, получают специфическую сыворотку. В сыворотке содержатся антитела, их соединяют с красителями флуоресцентными. Затем, меченый белок вводят в клетку.
Таким образом был открыт цитоскелет.
Метод фракционирования или дифференциального замещения.
Сначала получают чистые клетки, разрушая ткань в гомогенизаторах.
Полученную суспензию (гомогенат) подвергают высокоскоростному центрифугированию. Крупные компоненты (ядра или неразрушенные мембранные структуры) оседают при низких скоростях 1-3 тыс.J.
При более высоких скоростях (15-30 тыс.) оседают более мелкие макросомы (митохондрии, пластиды, лизосомы, нервные окончания).
Более 50 тыс. – микросомы. 15-20% от общей массы. Имеют сложный химический состав. ЭПР, вакуоли.
150 тыс. – в осадок выпадают рибосомы, вирусы, крупные макромолекулы.
С помощью раствора сахарозы получают более высокую степень разделения. Плотность раствора постепенно увеличивается сверху вниз, образуя градиент плотности. Гомогенат клеток наслаивают поверх сахарозы, затем центрифугируют и органоиды клетки распределяются в зависимости от своей молекулярной массы по высоте градиента, образуя отдельные полосы, которые можно выделить и изучить.