Заготовка сырья

Сбор урожая: урожай начинают убирать в начале цветения. Именно в этот период в листьях Стевии накапливается максимальное количество стевиозида. В Парагвае – родине Стевии – сезон цветения наступает в январе-марте, что соответствует у нас периоду с июля по сентябрь. Цветение в любом случае наступает через 16-18 недель после посева. Интересно, но продолжительность светового дня влияет на рост и развитие растения. ^[6] Короткие дни способствуют быстрому цветению и образованию семян. Более же длинные дни способствуют росту новых ветвей и листьев, и, соответственно, повышают количество стевиозида в листьях. В оптимальных условиях с 1 кв.м можно собрать урожай, который заменит 7 кг сахара. Уборка Стевии очень проста. Стебель растения срезают на высоте 5-6 см над землей и сушат в светлом проветриваемом помещении, связав пучками, или разложив на нескольких слоях бумаги. Выход стевиозида из листьев культивируемой стевии составляет обычно 6-12% ^[10]

В стевии обнаружено более 100 фитохимических веществ. Она богата терпенами и флавоноидами.

В 1931 году был открыт и описан гликозид названный стевиозид, который содержится в количестве 6-18% в листьях стевии и в 300 раз слаще сахара.

Другие сладкие дитерпеновые гликозиды, обнаруженные в стевии: стевиолбиозид, ребаудиозид А-Е, дулькозид А. ^[4]

Количественное определение гликозидов

Образцы для исследований брали на испытательном участке университета, в селах Патара Поти Хобско-го района, Анаклиа Зугдидского района, Грмагеле Ланчхутского района, Ахалсопели Сенакского района (Западная Грузия).

С целью инактивации ферментов растительные образцы фиксировали водяным паром в течение 1 мин, затем сушили при комнатной температуре и измельчали. Исследование сладких дитерпеноидных гликозидов листьев стевии проводили по схеме, представленной на рисунке

Листья стевии(5 г) измельчали, обрабатывали в аппарате Сокслета хлороформом(300 мл) в течение 2 ч, далее метанолом(300 мл) в течение 5 ч, затем водой(30 мл). Полученный экстракт фильтровали и концентрировали в условиях вакуума. Хлороформные и водяные экстракты не содержат сладких терпеноидных гликозидов.

Метанольные экстракты перекристаллизировали трижды, растворяли в метаноле(10 мл), фильт-ровали через мембранные фильтры(0,45 мкр). Высокоэффективную тонкослойную хроматографию произ-водили на тонком слое силикагеля(Меrс), система растворителей: хлороформ– метанол– вода(30 : 20 : 4). ^[8]

Хроматограму проявляли10% серной кислотой. При хроматографировании применяли растворите-ли: 1) хлороформ– метанол– вода(30 : 20 : 4); 2) этилацетат– изопропанол– н-бутанол– вода(20 : 12 : 7 : 6).

Исследование терпеноидных соединений осуществляли методом жидкостной хроматографии высокогодавления. Хроматографирование проводили на хроматографеBeckman (USA), детектор Millipore-Wаters 210 нм, хроматографические колонкиBordapac C18; Bordapac NH2. Системы растворителей: 1) метанол– вода(65 : 35); 2) ацетонитрил– вода(85 : 15); 3) ацетонитрил– вода(40 : 60).

После проявления пластинки нагревали до110 °С иденситометрировали при390 нм. В таблице1 приве-дены значения Rf этих соединений(окраска экстракта после обработкиH2SO4 темная). Идентификация сладких дитерпеноидных гликозидов стала возможной на основе сопоставления литературных данных споказателями аутентичных соединений(стевиозид и ребаудиозид А). ^[9]

Для стевиозида значение Rf равно 0,75, а для ребаудиозида– 0,80. Опрыскивание серной кислотой, естественно, вызывает образование темных пятен на хроматограмме. Сладкие дитерпеноидные гликозиды в УФ-свете имеют максимум поглощения при210 нм.

Жидкостная хроматография высокого давления позволяет провести анализ в течение20–30 мин, при этом разделяются все основные дитерпеноидные гликозиды.

Посадка саженцев стевии производится в апреле. На1 га сажают 50–70 тыс. саженцев.

Определение оптимального периода уборки урожая крайне важно, чтобы урожай и содержание в растениях сладких дитерпеноидных гликозидов были максимальными. Зафиксировано содержание сладких дитерпеноидных гликозидов на всех этапах роста и развития стевии.

Количество этих соединений возрастает до начала цветения, а затем чуть снижается, поэтому для уборки урожая оптимальным можно считатьпериод бутонизации.

В стевии сладкие дитерпеноидные соединения распределены неравномерно. Основная их часть рассредоточена в зрелых листьях, которые во время бутонизации растения составляют35% от общей массы. Зрелые листья накапливают основную часть сладких веществ, в 9–12-м листьях насчитывается более70% терпеноидов от их общего содержания. В стеблях концентрация сладких гликозидов низкая(0,1%), поэтому перерабатывать их дальнейшем нет смысла(общая доля стебля– 40%).

Выводы

Нами установлено, что в листьях нового для влажных субтропиков растения стевия(Stevia rebaudiana Bertoni) содержится до 11%сладких дитерпеноидных соединений. Сладкие дитерпеноиды в разных частях растения накапливаются по-разному. Максимальное содержание этих соединений обнаружено в зрелых листьях. ^[15]