- •Предисловие
- •Введение в биохимию
- •Теоретическая часть
- •Практическая часть
- •Энзимология и биологическое окисление
- •Теоретическая часть
- •Практическая часть
- •Теоретическая часть
- •Практическая часть
- •Теоретическая часть
- •Практическая часть
- •Теоретическая часть
- •Практическая часть
- •Теоретическая часть
- •Практическая часть
- •Биохимия углеводов
- •Теоретическая часть
- •Практическая часть
- •Теоретическая часть
- •Практическая часть
- •Теоретическая часть
- •Практическая часть
- •Теоретическая часть
- •Практическая часть
- •Биохимия липидов
- •Теоретическая часть
- •Практическая часть
- •Теоретическая часть
- •Практическая часть
- •Теоретическая часть
- •Практическая часть
- •Биохимия белков и нуклеиновых кислот
- •Теоретическая часть
- •Практическая часть
- •Теоретическая часть
- •Практическая часть
- •Теоретическая часть
- •Практическая часть
- •Теоретическая часть
- •Практическая часть
- •Теоретическая часть
- •Практическая часть
- •Содержание
- •1 Введение в биохимию 4
- •1 Введение в биохимию 4
-
Практическая часть
-
Решение задач.
-
Лабораторные работы.
-
Задачи
1 Какое из указанных соединений является прямым донором CH3- групп:
а) бетаин; |
в) мет; |
д) N5,N10-метилен ТГФК; |
б) креатин; |
г) S-аденозилметионин; |
е) холин? |
2 Какие важные для нервной системы соединения образуются при декарбоксилировании аминокислот:
а) норадреналин; |
в) серотонин; |
д) ГОМК; |
б) ГАМК; |
г) ацетилхолин; |
е) все перечисленное? |
3 -аланин является предшественником:
а) глутатиона; б) карнозина; в) FMN; г) NAD; д) биотина; е) HS KoA?
4 Какая из следующих аминокислот является чисто кетогенной:
а) иле; б) фен; в) лей; г) про; д) трп; е) ала?
5 Сер и цис могут вступать в ЦТК через:
а) сукцинил-КоА; |
в) ЩУК; |
д) пропионат; |
б) пируват; |
г) глиоксилат; |
е) ацетил КоА? |
6 Триптофан не включается в биосинтез:
а) ниацина; |
в) норадреналина; |
д) индолов; |
б) серотонина; |
г) мелатонина; |
е) ГАМК? |
7 Какие ферментативные реакции участвуют при биосинтезе адреналина:
а) окисление аминогруппы; |
г) декарбоксилирование; |
б) метилирование; |
д) трансаминирование; |
в) алифатическое гидроксилирование; |
е) ароматическое гидроксилирование? |
8 Какие превращения встречаются у человека:
а) сер гли; |
в) ЩУК лиз; |
д) глу цис; |
б) фен тир; |
г) гомоцис мет; |
е) ала гис? |
9 Какие ферментативные пары участвуют в синтезе мочевины:
а) АСТ и диаминоксидаза;
б) серин-дегидратаза и глу-ДГ;
в) оксидаза L-аминокислот и рацемаза;
г) карбамоилфосфат синтетаза и АСТ;
д) глутаминсинтетаза и глутаминаза;
е) аргиназа-уреаза?
10 Какие аминокислоты, вступающие на путь ГНГ, могут ресинтезироваться из метаболитов гликолиза:
а) ала; б) глу; в) глн; г) фен; д) вал; е) мет?
11 С какими коферментами связаны превращения:
А) пиридоксальфосфат; |
а) сер гли; |
Б) ТГФК; |
б) ала пируват; |
В) АТФ; |
в) мет S-аденозилметионин; |
Г) ГТФ; |
г) глу про; |
Д) NADPH; |
д) ЩУК ФЕП? |
12 Серная и фосфорная кислоты являются продуктами катаболизма:
а) углеводов; б) липидов; в) белков; г) нуклеопротеидов; д) всего указанного; е) ни одного из указанного?
13 Альбинизм является результатом дефицита активности:
а) фен-гидроксилазы; б) п-оксифенилпируват-гидроксилазы; в) оксидазы гомогентизиновой кислоты; г) тирозиназы; д) карбамоилфосфатсинтетазы?
14 Алкаптонурия возникает в результате дефицита:
а) фен; б) оксидазы гомогентизиновой кислоты; в) тирозиназы; г) аргининосукцинатлиазы; д) глутаминазы?
15 Фенилкетонурия является причиной дефицита:
а) тир; б) цитруллина; в) карбамоилфосфат-синтетазы; г) гексокиназы; д) фен-гидроксилазы; е) фен?
16 Изменения активности АСТ и АЛТ у больных с заболеваниями миокарда всегда отличаются от такового у больных с заболеваниями печени. Чем это объясняется и какую диагностическую ценность имеет это различие?
17 При гомоцистинурии генетический дефект связан:
а) с мет-диметилазой; б) цистатионинсинтетазой; в) цистатионазой; г) S-аденозин-гомоцистеингидролазой; д) нарушением транспорта аминокислот в почках?
18 Какие из следующих соединений включаются в виде прямых предшественников в биосинтез метаболитов:
А) тир; |
а) порфирин; |
е) ацетилхолин; |
Б) трп; |
б) ГАМК; |
ж) тироксин; |
В) сер; |
в) серотонин; |
з) ниацин (PP); |
Г) глу; |
г) кинуренин; |
и) креатин? |
Д) гли; |
д) адреналин; |
|
Лабораторные работы
Лабораторная работа № 1. Определение активности АСТ (аспартатаминотрансферазы) в сыворотке крови по Райтману и Френкелю
П ринцип метода. В результате переаминирования, происходящего под действием АСТ, образуется щавелевоуксусная кислота. Щавелевоуксусная кислота спонтанно декарбоксилируется в пировиноградную. При добавлении 2,4-динитрофенилгидразина в щелочной среде образуется гидразон пировиноградной кислоты красно-коричневого цвета, интенсивность окраски которого определяется колориметрически (см. уравнение).
Ход работы. Пробирку с 0,25 мл субстратно-буферной смеси нагревают в термостате при 37 C в течение 5 мин, добавляют 0,05 мл сыворотки крови и инкубируют 60 мин в термостате при этой же температуре.
Добавляют 0,25 мл раствора 2,4-динитрофенилгидразина и выдерживают в течение 20 мин при комнатной температуре. Затем добавляют еще 2,5 мл NaOH, перемешивают и оставляют еще на 10 мин при комнатной температуре.
Измеряют на фотометре экстинкцию опытной пробы при длине волны 500–560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве контрольной пробы используется дистиллированная вода.
Расчет. Производят по калибровочному графику.
Норма. АСТ – 0,1–0,45 ммоль/ч.л (пирувата на 1 л сыворотки крови за 1 час инкубации при 37 °С).
Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагностическую оценку.
Лабораторная работа № 2. Определение активности АЛТ (аланинаминотрансферазы) в сыворотке и плазме крови ферментативным методом (УФ-области)
Принцип метода. Основан на сопряжении двух ферментативных реакций (АЛТ и ЛДГ) – трансаминирования и последующего NADH-зависимого восстановлении пирувата, образующегося в процессе трансаминирования.
I этап:
АЛТ
L-ала + -кетоглутарат пируват + L-глу;
II этап:
ЛДГ
пируват + NADH+H+ L-лактат + NAD+.
Ход реакции регистрируют по убыли восстановленной формы кофермента – NADH+Н+, имеющего максимум поглощения при 340 нм.
Ход работы. Активность АЛТ в сыворотке крови определяют в 2 этапа.
I этап. В пробирку вносят 1 мл раствора № 1 (смесь ЛДГ, NADH+Н+ буфер-субстрата, пиридоксаль-фосфата) и 0,1 мл сыворотки крови, перемешивают и термостатируют 5 мин при 37 °C.
II этап. Содержимое пробирки переливают в кювету, предварительно нагретую до 37 °C, и добавляют 0,1 мл раствора № 2 (-кетоглутарат).
Измеряют оптическую плотность при длине волны 340 нм, ширине кюветы 10 мм, в интервале 3 мин.
Расчет. Вычисляют изменение экстинкции за 1 мин (А/t) в мккат/л, а также каталитическую концентрацию (активность АЛТ) по формуле
С = A/t 31,75.
Норма. Активность АЛТ сыворотки крови равна 0,15–0,96 мккат/л.
Клинико-диагностическое значение. Определение активности АЛТ и АСТ широко используется в ранней дифференциальной диагностике различных заболеваний. Оба фермента высокоактивны в различных тканях. Однако наибольшая активность АЛТ приходится на печень, а АСТ – на миокард. В связи с высокой информативностью определение активности АЛТ используется для ранней диагностики болезни Боткина (до появления желтухи и первых симптомов болезни – недомогания, слабости и т. д.), а также ее безжелтушных форм. Высокая активность фермента в крови поддерживается первые 10–15 дней, а затем постепенно снижается. Степень увеличения активности АЛТ коррелирует с тяжестью болезни.
АСТ более специфична для миокарда, поэтому используется для ранней дифференциальной диагностики инфаркта миокарда. Причем увеличение активности отмечается через 24–36 часов и снижается на 3–7-е сутки.
Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагностическую оценку.
Рекомендуемая литература
Основная
-
Материал лекций.
-
Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. М.: Медицина, 1990. С. 354–364; 1998. С. 451–468.
-
Николаев А. Я. Биологическая химия. М.: Высшая школа, 1989. С. 323–327, 331–338.
Дополительная
-
Марри Р. и др. Биохимия человека. М.: Мир, 1993. Т. 1 С. 343–355.
-
Филиппович Ю. Б. Основы биохимии. М.: Высшая школа, 1993. С. 259–267.
-
Ленинджер А. Основы биохимии. М.: Мир, 1985. Т. 2. С. 653–681.
-
Врожденные и приобретенные энзимопатии / Под ред. Т. Ташева. М.: Медицина, 1980. С. 120–136.
-
Вилкинсон Д. Принципы и методы диагностической энзимологии. М.: Медицина, 1981. С. 574–586.
Занятие 21
Нуклеопротеиды. Структура и функции информационных макромолекул
Цель занятия: сформировать представления о структуре, метаболизме и функциях азотистых оснований, нуклеотидов и нуклеиновых кислот. Освоить качественные реакции на продукты гидролиза нуклеопротеидов.
Исходный уровень знаний и навыков
Студент должен знать:
-
Строение, свойства и функции азотистых оснований и нуклеотидов.
-
Правила Э. Чаргаффа.
-
Структуру, классификацию, свойства и функции нуклеиновых кислот.
-
Молекулярные механизмы переваривания и всасывания пищи в ЖКТ.
-
Энзимопатии (общая характеристика).
Студент должен уметь:
-
Проводить качественные реакции на белки и углеводы.
Структура занятия