Документ Microsoft Word
.docxАктуальность проблемы
В последние десятилетия биотехнология ярко демонстрирует человечеству свои возможности. Обладая новейшими методами исследования, как в области биологии, так и химии, она дает возможность решать самые разнообразные задачи, стоящие перед человечеством, что позволяет говорить об этой области знания, как об одном из пяти приоритетных направлений научно-технического прогресса начала XXI вв. [131].
Одним из важных направлений прикладной биотехнологии является разработка эффективных биологических методов оценки состояния разнообразных объектов внешней среды, загрязнение которых токсичными веществами в настоящее время приобрело комплексный характер. Даже если бы было возможно определить содержание всехксенобиотиков в объекте исследования, такая информация была бы недостаточна для каких-либо прогнозов, так как токсикометрические параметры установлены лишь для небольшой части этих веществ. Кроме того, результат комбинированного действия двух и более токсичных веществ, имеющихся в исследуемом образце даже в небольших количествах, предсказать достаточно сложно. Соединения нетоксичные при изолированном действии могут вызывать значительный патологический эффект при комбинированном влиянии. Поэтому для оценки токсичности природных вод, промышленных сбросов, почвы, кормов и прочих объектов окружающей среды, а также новых химических веществ и внутренних сред организма человека и животных используют тесты на различных организмах. Предоставляя мало информации о природе поллютанта, биотестирование дает возможность с большой степенью достоверности определить степень общей токсичности объекта исследования.
В числе организмов, на которых проводят биотестирование, присутствуют представители подцарства простейших. История применения Protozoa в качестве тест-организмов насчитывает не одно десятилетие. В то же время, развитие иных методов токсикологического анализа, таких как химические, физико-химические, иммунологические, а также использование биологической оценки на организмах из других систематических групп не снижают актуальности биотестов на простейших. Об этом говорит значительное число методических разработок, рекомендаций и публикаций, постоянно появляющихся в специализированных изданиях, а также их широкое использование на практике. Эти методы обладают высокой чувствительностью, экспрессностью, надежностью, универсальностью и малой себестоимостью. Они просты в проведении, поддаются инструмен-тализации и автоматизации, а их результаты легко интерпретируемы. В отличие от химических и физико-химических методов анализа, биотестирование наинфузориях позволяет прогнозировать интегральное воздействие изучаемого объекта на живые организмы, поскольку реакция биологической тест-системы зависит не только от отдельных токсичных соединений, содержащихся в объекте исследования, но и от их взаимодействия между собой, а также от присутствия веществ, обладающих ярко выраженным влиянием на токсичность указанных соединений. А по сравнению с биотестами на высших животных оно обладает значительными преимуществами в экономической, методической и этической сферах.
Несмотря на то, что в рассматриваемой области накоплен богатый фактический материал, в биологической науке до сих пор отсутствует единая концепция, описывающая биотестирование на инфузориях. Определения основных используемых терминов не получили точных и исчерпывающих формулировок, недостаточно изучена культураинфузорий, как система, по реакции которой производится оценка объекта внешней среды, не выявлены закономерности ее реакции на неблагоприятные воздействия, не сформулированы принципы выбора тест-организмов. Как следствие, отсутствуют единые методы подготовки проб и культуры инфузорий как тест-системы к проведению анализа.
Недостаточность теоретического описания биотестирования на инфузориях как метода научного исследования влечет за собой разнообразные проблемы в практическом воплощении конкретных методик. Тест-организмы зачастую подбираются без учета их биологических особенностей, инфузории культивируют на нестандартных средах и в произвольных условиях, во многих методиках процесс подготовки тест-системы к анализу отсутствует как таковой, уровень чувствительности наблюдаемых тест-реакций далеко не всегда соответствует поставленным задачам, используемые для оценки степени проявления тест-реакции критерии в ряде случаев имеют малую информативность по сравнению с альтернативными. Все это приводит к огрублению результатов, неверной их интерпретации, снижению объективности выводов, а зачастую и к дискредитации биотестирования, как метода научного исследования.
По этим причинам в настоящее время особую важность приобретает вопрос о комплексном подходе к биотестированию. В первую очередь необходим глубокий теоретический анализ этой группы методов. Создание единой концепции оценки свойств объектов окружающей среды по реакции культуры инфузорий должно способствовать развитию, стандартизации и унификации уже разработанных методов, а также созданию новых, более совершенных.
Таким образом, можно заключить, что исследования в указанной области являются актуальными и имеют важное теоретическое и прикладное значение.
Цель и задачи научных исследований
С учетом вышеизложенного в настоящей работе ставилась цель: на основе теоретического осмысления и критического анализа литературных данных и результатов собственных исследований сформировать научные основы биотестирования на инфузориях как метода научного исследования.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
1 Обобщить и систематизировать накопленный опыт в области оценки свойств различных объектов по реакции организмов группы Protozoa;
2 Сформулировать определения основных терминов, используемых в биотестировании;
3 Сформировать научное представление о культуре инфузорий как диагностической тест-системе и выявить основные закономерности процесса ее взаимодействия с объектами исследования;
4 Разработать принципы выбора тест-организмов и методы подготовки культуры инфузорий к проведению биотеста применительно к конкретным задачам биотестирования различных объектов окружающей среды;
5 Сформировать комплекс мер для стандартизации процесса биотестирования и управления основными параметрами тест-систем;
6 Разработать эффективный, экспрессный, недорогой биотест с использованием инфузорий, отвечающий сформулированным требованиям, опробировать его в производственных условиях и внедрить в практику.
Научная новизна
Обобщены и систематизированы исследования в области изучения реакций инфузорий на экстремальные химические воздействия, а также по их использованию в биотестировании.
Разработана система терминов, используемых в области биотестирования. На основе комплексного представления о процессе биотестирования составлена его схема и рассмотрены основные факторы, влияющие на него.
Проведено систематическое исследование процесса взаимодействия токсичных веществ и их смесей с культурой инфузорий на модели тест-реакций гибели и хемотаксиса. Выведены универсальные зависимости, описывающие этот процесс, получены параметры, численно характеризующие токсические свойства химических веществ и их смесей, а также состояние тест-системы.
Показаны пути для оптимизации биотестирования и сформирован комплекс мер для его стандартизации и для управления основными характеристиками культуры инфузорий, как тест-системы.
Предложены принципы выбора тест-организмов. В соответствии с ними выделен и предложен для научно-исследовательских работ и для практического использования штамм инфузории Colpoda steinii. Разработан, всесторонне организован и внедрен препарат для исследования кормов в сельском хозяйстве на основе данного штамма. Разработана технология приготовления и налажено производство препарата.
Все это позволило создать целостную концепцию биотестирования как метода научного исследования.
Практическая ценность
Выделен, всесторонне охарактеризован и депонирован в коллекции микроорганизмов Государственного НИИ Особо чистых биопрепаратов производственный штамм инфузории Colpoda steinii П-1.
Разработана и утверждена на уровне Министерства сельского хозяйства и продовольствия РФ, а также на уровне Министерства аграрной политики Украины научно-техническая документация на препарат "Культура Colpoda steinii сухая для эколого-токсикологических исследований": технические условия и наставление по применению.
Разработанный метод оценки токсичности зернопродуктов включен в Межгосударственный стандарт ГОСТ 13496.7-97 "Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма: Методы определения токсичности", Государственный стандарт Украины ДСТУ 3570-97 "Зерно фуражне, продукта його переробки, комбшорми: Методи визначення токсичностГ и в Национальный стандарт Российской Федерации ГОСТ Р 52337-2005 "Корма, комбикорма, комбикормовое сырье: Методы определения общей токсичности" в качестве экспресс-метода.
Совместно с редакцией журнала "Архив ветеринарных наук", Всероссийским обществом протозоологов при РАН, Санкт-Петербургским государственным университетом и Международной академией информатизации организована и проведена Международная заочная научнопрактическая конференция "Инфузории в биотестировании", Санкт-Петербург, 1998 г. В конференции приняли участие свыше ста специалистов из семи стран мира.
Результаты исследований и теоретические обобщения, приведенные в диссертации, могут быть использованы в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторных работ по учебным курсам, связанным с экологией, биологией, зоологией беспозвоночных, протозоологией, производством сельскохозяйственных кормопродуктов и санитарией кормов.
Апробация работы
Материалы работы доложены на следующих съездах, конференциях и заседаниях:
- Заседания Ветеринарного фармакологического совета при Главном управлении ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия Российской Федерации, Москва, в 1992 и 1999 гг.;
- Всероссийская конференция по совершенствованию мер профилактики и борьбы с микотоксикозами птиц, Ломоносов, Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт птицеводства, 1992 г.;
- Международная конференция "Биотехнология-94", Санкт-Петербург, 1994 г.;
- Заседание Всероссийского общества протозоологов, Санкт-Петербург, 1998 г.;
- Международная заочная научно-практическая конференция "Инфузории в биотестировании", Санкт-Петербург, 1998 г.;
- Заседание Международной молодежной научной школы "Биоинди-кация-98", Петрозаводск, 1998 г.;
-1 съезд токсикологов России, Москва, 1998 г.;
- Заочная научно-практическая конференция "Биотехнология в Федеральной целевой программе «Интеграция»", Санкт-Петербург, 1999 г.;
- Семинар "Контроль качества кормов" в Ленинградской областной ветеринарной лаборатории, Санкт-Петербург, 2000 г.;
- III научно-техническая конференция аспирантов СПбГТИ(ТУ), Санкт-Петербург, 2000 г.;
- Всероссийская научная конференция, посвященная 45-летию научно-исследовательской лаборатории питания и водоснабжения Военно-медицинской академии, Санкт-Петербург, 2001 г.;
- Международная конференция молодых ученых "Химия и биотехнология биологически активных веществ, пищеваых продуктов и добавок. Экологически безопасные технологии", Тверь, 2002 г.;
- Межвузовская конференция "Микотоксины в экосистемах Санкт-Петербурга и Ленинградской области", Санкт-Петербург, 2002 г.;
- Всероссийская научно-практическая конференция "Гигиенические проблемы водоснабжения населения и войск", Санкт-Петербург, 2003 г.;
- VII Вишняковские чтения. Стратегия и тактика вузовской науки в регионе, Бокситогорск, 2004 г.;
- Всероссийская научно-техническая конференция "Успехи в специальной химии и химической технологии", Москва, 2005 г.;
- IV съезд Общества биотехнологов России имени Ю.А. Овчинникова, Пущино, 2006 г.
Публикации
Основное содержание диссертации опубликовано в монографии и четырнадцати статьях.
По материалам работы получено четыре патента РФ.
Описание разработанного метода биотестирования опубликовано в ГОСТ 13496.7-97, ДСТУ 3570-97 и ГОСТ Р 52337-2005.
Объем и структура работы
Материалы диссертации изложены на 262 страницах и включают в себя введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты исследований, обсуждение, выводы и практические предложения. Материал иллюстрирован 20 таблицами и 41 рисунком. Список основной использованной литературы содержит 319 наименование работ отечественных и зарубежных авторов.
Заключение диссертации по теме "Биотехнология", Виноходов, Дмитрий Олегович
выводы
1 Сформированы научные основы биотестирования, как метода анализа объектов окружающей среды. Они включают в себя:
- связную систему оригинальных определений основных терминов, используемых в биотестировании;
- схему постановки биологического теста, как процесса превращения материального потока, представленного исследуемым образцом и его действующей формой, в информационный, результатом которого является оценка исследуемого образца;
- описание внутренней структуры тест-системы, как центрального звена процесса биотестирования, и трех групп факторов внешних воздействий на тест-систему;
- пути оптимизации, стандартизации и управления тест-системой и процессом биотестирования в целом.
2 Даны обоснования к использованию инфузорий в качестве тест-объектов в биологических тестах, разработаны системы требований для отбора тест-организмов, тест-реакций и тест-критериев, наиболее пригодных для практического применения.
3 Выведена универсальная зависимость, описывающая процесс взаимодействия культуры клеток инфузорий с токсичным веществом на модели тест-реакции гибели, и на ее основе получены характеристики токсичных веществ - предел обнаружения, определяемый как концентрация данного вещества в растворе, вызывающая гибель 50% клеток Colpoda steinii в течение 3 часов, и токсикологическая широта действия, характеризуемая коэффициентом в показателе степени уравнения "концентрация - время", а также самой тест-системы - индекс синхронизированности, представляющий собой отношение нормирующих коэффициентов в уравнениях "концентрация - время" для 100% и 50% гибели инфузорий. Чувствительность тест-реакции гибели Colpoda steinii к изученным токсичным веществам на 1-2 порядка выше таковой для теплокровных животных. Кривые "концентрация - время", характеризующие процесс взаимодействия тест-системы с токсичным веществом, описываются уравнением степенной функции, а морфологические изменения, происходящие в клетках во время интоксикации, носят специфический характер.
4 Выведена зависимость, описывающая процесс взаимодействия культуры клеток инфузорий с токсичным веществом на модели тест-реакции хемотаксиса. Показано, что применение этой тест-реакции дает возможность исследовать интегральную токсичность объектов внешней среды с содержанием поллютантов на уровне, сравнимом с ПДК.
5 В результате изучения процесса комбинированного воздействия смеси токсичных веществ на культуру клеток инфузорий выявлены аддитивный и антагонистический типы взаимовлияния различных ксенобиотиков, выведены формулы, описывающие процесс взаимодействия смеси токсичных веществ с тест-системой при аддитивном типе взаимовлияния.
6 В результате исследования процесса комбинированного воздействия смеси токсичного вещества с органическими растворителями, а также с поверхностно-активными веществами на культуру клеток инфузорий выявлен эффект потенцирования. Показана принципиальная возможность использования органических растворителей и ПАВ в качестве функциональной нагрузки с целью управления тест-системой и процессом биотестирования в целом.
7 Сформирован комплекс мер для стандартизации процесса биотестирования и управления основными параметрами тест-систем. Он включает использование депонированных штаммов инфузорий, обладающих стабильными генетическими и физиологическими характеристиками, синхронизацию тест-систем перед применением, регулирование чувствительности тест-системы с помощью функциональных нагрузок.
8 В результате практической реализации теоретических основ использования инфузорий в биотестировании выбран вид инфузории, обладающий рядом специфических свойств, обуславливающих его преимущества перед иными тест-организмами, выделен, всесторонне охарактеризован и депонирован штамм Colpoda steinii П-1.
9 На основе культуры инфузории Colpoda steinii П-1 создана тест-система, обладающая по сравнению с существующими важными преимуществами - высокой чувствительностью к токсичным веществам, высокой степенью синхронизированности и постоянством генетических и физиологических характеристик.
10 Для управления процессом культивирования моноксеничной культуры инфузории Colpoda steinii использована математическая модель типа "субстрат - жертва - хищник", получены значения коэффициентов этой модели.
11В результате изучения процесса хранения цист покоя Colpoda steinii в высушенном состоянии определены оптимальные условия их хранения и срок годности.
12 Разработан первый отечественный токскит на основе культуры инфузории Colpoda steinii, штамм П-1, со сроком годности более 2 лет. Препарат прошел широкие испытания и внедрен в практику работы лабораторий сельскохозяйственных предприятий России, Украины и Грузии. Метод оценки интегральной токсичности фуражного зерна и комбикормов с использованием препарата включен в Межгосударственный стандарт ГОСТ 13496.7-97, в Государственный стандарт Украины ДСТУ 3570-97 и в Национальный стандарт Российской Федерации ГОСТ Р 52337-2005 "Корма, комбикорма, комбикормовое сырье: Методы определения общей токсичности". Применение препарата в исследованиях внутренних сред организмов в промышленном птицеводстве является перспективным и может быть использовано при решении вопросов, связанных с регулированием условий содержания животных, проведением профилактических мероприятий, а также при создании различных систем прогнозирования экономических показателей сельскохозяйственных предприятий.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
1 Патент РФ № 2001951 "Штамм инфузории Colpoda steinii для приготовления токсикологического диагностикума".
2 Патент РФ № 2039825" "Способ определения токсичности объектов внешней среды".
3 Патент РФ № 2002263 "Способ получения препарата для токсикологических исследований объектов внешней среды".
4 Патент РФ № 2136152 "Способ определения естественной резистентности организма птиц".
5 Временное наставление к экспресс-методу определения токсичности кормов, кормовых добавок, воды и органов павших и убитых животных с использованием культуры Colpoda steinii. Утверждено Государственным департаментом ветеринарии МСХиП РФ.
6 Настанова по застосуванню культури Colpoda steinii (колпода) cyxoi для еколого-токсиколопчних досладжень облект1в зовнппнього середови-ща тварин та птищ. Утверждена Государственным департаментом ветеринарной медицины МАП Украины.
7 Культура Colpoda steinii сухая для эколого-токсикологических исследований: Технические условия. ТУ 9388-001-885-95. Утверждены Государственным департаментом ветеринарии МСХиП РФ.
8 Культура Colpoda steinii суха для еколого-токсиколопчних дослщжень обчею1в зовшшнього середовища тварин та птицк Техшчш умови. ТУ У 46.15.243.-97. Утверждены Государственным департаментом ветеринарной медицины МСХиП Украины.
9 Межгосударственный стандарт ГОСТ 13496.7-97 "Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма: Методы определения токсичности".
10 Державний стандарт Украши ДСТУ 3570-97 "Зерно фуражне, продукта його переробки, комбжорми: Методи визначення токсичноси".
11 Национальный стандарт Российской Федерации ГОСТ Р 523372005 "Корма, комбикорма, комбикормовое сырье: Методы определения общей токсичности".
Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Виноходов, Дмитрий Олегович, 2007 год
1. Авторское свидетельство № 1165993. Способ определения токсичности аминокислот/Байбаков В. И., Безуглов С. Г.//Бюллетень изобретений. 1985.-№ 25. - С. 157.
2. Авторское свидетельство № 1364305. Способ диагностики токсе-мии/Нифантьев О. Е., Малигловка Ю. А., Кокова В. Е., Новохацкий С. Г.//Бюллетень изобретений. 1988. - № 1.-С. 15.
3. Авторское свидетельство № 1554849. Способ оценки качества кор-ма/Цвылев О. П., Гроздов А. О., Харенко Е. Н., Белоусов А. Н.//Бюллетень изобретений. 1990. - № 13. - С. 16.
4. Авторское свидетельство № 1597722. Способ определения токсичности водных сред/Карасев С. Г., Новосадова Т. Г., Стручкова Н. JI.//Открытия, изобретения. 1990. - № 37. - С. 122.
5. Агеев В., Долторнязов И. Определение токсичности кор-ма//Птицеводство. 1988. - № 8. - С. 41-42.
6. Айвазова JI. Е. и др. Метод биотестирования водной среды с использованием инфузорий/Айвазова JI. Е., Гроздов А. О., Соколова С. А., Новосадова Т. Г., Трофимова М. ГУ/Методы биотестирования вод. Черноголовка, 1988. - С. 37-42.
7. Александров В. Я. Методика измерения скорости движения парамеции/Зоологический журнал. 1948 - Т. 27, № 5. - С. 461-464.
8. Алексеев А. А. и др. Применение парамецийного теста для выявления токсических свойств центральной лимфы/Алексеев А. А., Недошивина Р. В., Кайфаджян М. Л., Клецкина И. 0.//Лабораторное дело. 1981. - № 9. -С. 563-565.
9. Афонькин С. Ю., Юдин А. Л. Использование микрокамер для иммунологических реакций с целью клонирования свободноживущих про-стейших//Цитология. 1985. - Т. XXVII, № 10. - С. 1207-1209.
10. Ахтамов М. А., Ахмедов А. А., Насриддинов Н. К. Количественная оценка степени токсичности сывороток при острой бактериальной дизен-терии//Лабораторное дело. 1981. - № 9. - С. 560-561.
11. Багирбекова К. X. Биологическая реакция кровяной сыворотки раковых больных на инфузории//Азербайджанский медицинский журнал. -1940.-№5-6.-С. 87-89.
12. Балаян А. Э., Стом Д. И. Метод биотестирования по обездвиживанию клеток водоросли дюналиэллы//Методы биотестирования вод. -Черноголовка, 1988. С. 21-23.
13. Баренбойм Г. М., Маленков А. Г. Биологически активные вещества: Новые принципы поиска. М.: Наука, 1986. - 364 с.
14. Баркалова Л. М. Токсичность сыворотки крови при раке и других заболеваниях как основа для дифференциальной диагностики//Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1951. - № 4. - С. 291-294.
15. Баснакьян И. А. Культивирование микроорганизмов с заданными свойствами. М.: Медицина, 1992. - 192 с.
16. Бейли Дж., Оллис Д. Основы биохимической инженерии. Т. 2. -М.: Мир, 1989. - 590 с.
17. Беспамятнов Г. П., Кротов Ю. А. Предельно допустимые концентрации химических веществ в окружающей среде: Справочник. Л.: Химия, 1985. 528 с.
18. Богомолова Н. А. Экспериментальные исследования над сво-бодноживущими и паразитическими инфузориями: Автореф. дис. канд. биол. наук. Л., 1952. - 16 с.
19. Божков А. И. Интенсивность экспрессии генома инфузорий как функциональный тест в биотестировании//Инфузории в биотестировании: Тезисы докладов международной заочной научно-практической конференции. СПб: Архив ветеринарных наук, 1998. - С. 91-92.
20. Бойкова Э. Е. Применение простейших в токсикологических ис-следованиях//Экспериментальная водная токсикология. Рига: Зинатне. -1991. - Вып. 15. - С. 155-164.
21. Болдырева Н. М. Оценка качества природных и сточных вод по биологическим показателям//Комплексный глобальный мониторинг состояния биосферы: 3-й Международный симпозиум, Ташкент, 13-20 октября 1985: Тезисы докладов. М.: 1985. - С. 106-107.
22. Болдырева Н. М. Метод биотестирования сточных и природных вод на культуре инфузорий//Методы биотестирования вод. Черноголовка, 1988.-С. 42-43.
23. Брагинский Л. П., Щербань Э. П. Острая токсичность тяжелых металлов для водных беспозвоночных при различных температурных усло-виях//Гидробиологический журнал. 1978. - Т. 14, № 6. - С. 86-92.
24. Бурковский И. В. Экология свободноживущих инфузорий. М.: МГУ, 1984. - 208 с.
25. Быченкова В. Н. Действие высушивания и замораживания на Colpoda таи/?£ш'//Реакция клеток и их белковых компонентов на экстремальные воздействия. М.-Л.: Наука, 1966. - С. 92-100.
26. Быченкова В. Н., Лозина-Лозинский Л. К. Устойчивость инфузории Colpoda maupasi к низкому давлению, аноксии и глубокому охлаж-дению//Жизнь вне Земли и методы ее обнаружения. М.: Наука, 1970. - С. 81-97.
27. Варфоломеев С. Д., Калюжный С. В. Биотехнология: Кинетические основы микробиологических процессов. М.: Высшая школа, 1990. - 296 с.
28. Васильев И. Р., Маторин Д. Н., Венедиктов И. С. Метод биотестирования природных вод по замедлению флуоресценции микрово-дорослей//Методы биотестирования вод. Черноголовка, 1988. С. 23-26.
29. Виноходов Д. О., Виноходов В. О. Препарат токсикологической диагностики кормов//Информационный листок Ростовского ЦНТИ. 1993. -№97-93.-2 с.
30. Виноходов Д. О. Токсикологические исследования кормов с использованием инфузорий. СПб, 1995. - 80 с.
31. Виноходов Д. О., Виноходов В. О., Гинак А. И. Биотестирование как метод научного исследования//Инфузории в биотестировании: Тезисы докладов международной заочной научно-практической конференции. -СПб: Архив ветеринарных наук, 1998. С. 40-43.
32. Виноходов Д. О., Виноходов В. О., Гинак А. И. Исследование токсичности зернопродуктов: новая редакция ГОСТ//Биоиндикация-98: Материалы Международной молодежной научной школы 21-28 сентября 1998. Петрозаводск, 1998. - Т. 1. - С. 164-167.
33. Виноходов Д. О., Виноходов В. О. Colpoda steinii как тест-организм//Инфузории в биотестировании: Тезисы докладов международной заочной научно-практической конференции. СПб: Архив ветеринарных наук, 1998. - С. 85-87.
34. Виноходов Д. О., Виноходов В. О., Гинак А. И. Определение общей токсичности зернопродуктов//1-ый съезд токсикологов России 17-20 ноября 1998: Тезисы докладов. М.: 1998. - С. 271.
35. Виноходов Д. О. Математическое моделирование кинетики роста культуры инфузории Colpoda steinii в периодических условиях//Архив ветеринарных наук. 1998. - Т. 1(48). - С. 121-134.
36. Виноходов Д. О., Виноходов В. О., Гинак А. И., Земляникина Т. А. Использование инфузорий в исследованиях внутренних сред высших организмов//Архив ветеринарных наук. 1999. - Т. 1(48), ч. 3. - С. 551-577.
37. Виноходов Д. О., Гинак А. И. Исследование токсичности зерно-продуктов: новая редакция ГОСТ// Ветеринария в птицеводстве. 2002. -№1. - С. 9.
38. Виноходов Д. О., Поляков Н. JI. Биотестирование в птицеводстве и ветеринарии: Введение в биотестирование// Ветеринария в птицеводстве. -2003.-№5-6.-С. 41-46.
39. Виноходов Д. О., Поляков Н. J1. Определение микотоксинов методами биотестирования.// Ветеринария в птицеводстве. 2003. - №5-6. - С. 47-48.
40. Виноходов Д. О., Поляков Н. JI. Профилактика ассоциированных токсикозов методами биотестирования// Международный вестник ветеринарии. 2005. - №1. - С. 91-95.
41. Виноходов Д. О. Биотестирование на культурах инфузорий в диагностической профилактике пищевых отравлений животных (обзор)// Ветеринарная патология. 2006. - №1. - С. 90-96.
42. Виноходов В. О., Виноходов Д. О., Поляков Н. JI. Новый экспресс-метод определения токсичности мясопродуктов// Практик. 2006. - №2. -С. 26-31.
43. Виноходов Д. О., Пожаров А. В. Методологические особенности токсикологических тестов с инфузориями// Известия СПбГЭТУ «ЛЭТИ». Серия «Биотехнические системы в медицине и экологии». 2006. - Вып. 3. - С. 60-67.
44. Воденичаров Д. Г., Атавина Т. Г., Стом Д. И. Метод биотестирования по остановке движения зооспор хлорококковых//Методы биотестирования вод. Черноголовка, 1988. - С. 83-84.
45. Волков И. В. и др. Региональные особенности токсикорезистент-ности гидробионтов/Волков И. В., Заличева И. Н., Каймина Н. В., Ганина В. С., Мовчан Г. В.//Гидробиологический журнал. 1992. - Т. 28, № 3. - С. 69-71.