2. Способы размножения in vitro.

После стерилизации почки высаживают на твердую питательную среду МС, в пробирки и помещают в световую комнату.

На этом этапе некоторые исследователи для лучшего роста микропобегов розы в культуре in vitro рекомендуют различные концентрации 6-БАП в пределах 0,5 – 1,0 мг/л (Кузьмина, Потапова, 2002).

Рост каллусной ткани первичных эксплантов проходил на среде, содержащей помимо основных добавок (сахароза, агар, мезоинозит, тиамин –HCL, пиридоксин-HCL, глицин), а также цитокинин – БАП (0,5 мг/л) и ауксин – НУК (0,15 мг/л). Через 2 недели инкубации образовался морфогенный каллус: у первичных каллусов наблюдали появление почек, одиночных или многочисленных боковых побегов. Их вырезали и переносили на среды содержащие наряду с основными добавками, БАП – 1,0 мг/л, НУК – 0,1 мг/л или БАП – 2,0 мг/л, 2,4 Д – 0,2 мг/л. На обеих средах спустя 2,5 недели отмечалось разрастание старых побегов и новых. У некоторых образцов образовались корни. Через 3,5 недели в части пробирок (около 5%) появились полноценные растения с листьями и корнями.

Микроразмножение почек проводили на среде, включающей на ряду с основными добавками также 0,1 мг/л ИМК и 1,5 мг/л БАП.

Не образовавшие корней побеги переносили на среду, содержащую 0,75 мг/л БАП и 0,05 мг/л ИМК. Через 4 недели наблюдались развитие корней практически во всех условиях.

Используемые в наших исследованиях среды отличались различным содержанием (БАП - 1,0 мг/л, НУК-0,1 мг/л или БАП - 2,0 мг/л, 2,4 Д -0,2 мг/л). В процессе наблюдений было выявлено, что питательная среда с гормональным составом в БАП - 1,0 мг/л, НУК-0,1 мг/л дает больший процент образования микроклонов за месяц, в отличии от содержания БАП - 2,0 мг/л, 2,4 Д -0,2 мг/л в питательной среде (Павловская Н.Е., 1998).

2.4 Адаптация микрорастений к внешним условиям in vivo, приемы повышения урожайности.

Когда у микроклона образовывались корни, его извлекали из стерильных условий и сажали в горшки, заполненные субстратом. Но перед высадкой в почву, регенеранты проходили акклиматизацию во влажной камере на вермикулите в течение двух недель, а затем горшочки помещали в микро теплички, чтобы дать микрорастениям возможность постепенно привыкнуть к естественным условиям. Как только они адаптировались (через 4-6 недель), поддерживали обычные условия выращивания для данного вида роз. В качестве субстрата использовали торфа-песочную смесь 1:3 и велторф. Наибольший процент приживаемости растений-регенерантов наблюдали во втором типе субстрата 90%. После адаптации к комнатным условиям, пересаживали в открытый грунт, где они прекрасно себя чувствуют, растут и цветут (Акшикова Н.А., 2013).

Выводы

В данной курсовой работе можно сделать несколько выводов.

В первой главе этой работы мы познакомились с технологиями и техникой микроклонального размножения в биотехнологии, а также познакомились с приборами и оборудованием необходимым для создания лаборатории по микроклональному размножению. Ознакомились с приготовлением питательных сред с их агрегатными состояниями и составляющими компонентами. Также ознакомились с режимами стерилизации эксплантов процессами химиотерапии, термотерапии, а также препаратами для стерилизации и сроками. Ознакомились с условиями внешними условиями культивирования регенерата.

Во второй главе мы разобрали технологию оздоровления и микроклонального размножения роз. Для начала изучили технологию оздоровления от вирусных инфекций, далее изучили экспланты для размножения и оздоровления и режим стерилизации. Потом познакомились со способами размножения in vitro. И проведением адаптации к внешним условиям среды.

На основе этих двух выводов можно сделать один общий вывод о том что полученные знания в этой научной работе можно применять на практике. Розы возможно ввести в культуру in vitro и получать оздоровлённые их сорта, для получения оздоровленного посадочного материала для цветоводства.